1、正交实验法优选长白山野生越橘中花色苷的提取工艺作者：姜艳霞 吕士杰 田志杰 纪朋艳 罗军 王程 芦小静 雷钧涛【摘要】 目的优选长白山高寒地区野生越橘中花色苷的最佳提取工艺。方法以越橘中花色苷的纯度以及总固体得率为指标,采用正交实验法，优选提取工艺。结果越橘中花色苷的最佳提取工艺：提取次数 3次, 提取料液比 15(gml) ，提取温度为 60，提取时间 30 min。结论此提取工艺合理可行,适用于提取越橘中的花色苷。 【关键词】 正交实验法 越橘 花色苷 提取工艺Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction process of anthocyan
2、in from Vaccinium uliginosum in ChangBaiShan region .MethodsOrthogonal test was used for selecting the optimum of extraction process by the indexes of anthocyanin purity and total solid yield.ResultsExtracting 3 times,30 min each time,five fold volume of water , temperature 60,was considered as the
3、optimum extraction condition.ConclusionThe selected technology is reasonable and feasible, and was suitable for anthocyanin extraction.Key words:Orthogonal test; Vaccinium uliginosum; Anthocyanin; Extraction process越橘，是越橘科越橘属的落叶或常绿灌木，属杜鹃花科植物，产于我国吉林、黑龙江、内蒙古等地，其果实可酿酒或制果浆，小浆果蓝色或紫色，是联合国粮农组织推荐的人类 5 大健康食品
4、之一，富含维生素E 和黄酮类色素以及铁、锰等微量元素，果实中的花色苷具有改善视力、延缓衰老、抗疲劳、抗癌和抗炎作用1 。由于越橘的生长环境，种类的不同，它所含有的花色苷量不同。本研究就长白山高寒地区野生越橘中花色苷的提取进行探讨。1 仪器与材料1.1 仪器及试剂 721 可见分光光度计（上海新茂仪器有限公司） ，HH-601 型超级恒温水浴锅（北京市医疗设备厂） ，组织破碎机（佛山市顺德区欧科电器有限公司） ，SHZ-D 循环水式多用真空泵（巩义市英峪华仪器厂） ，PH050 电热干燥箱（上海双五金） ，T6 新世纪紫外可见分光光度仪（普析通用） 。乙醇和浓 HCl ，均为分析纯，北京化工厂生
5、产。1.2 药材长白山野生笃斯越橘，月份采收，鲜果冻存。2 方法与结果2.1 越橘中花色苷的制备方法 26工艺流程如下：冷冻越桔破碎溶剂提取真空抽滤花色苷提取液纯化花色苷2.2 越橘中花色苷含量测定2.2.1 光谱扫描确定测量最佳波长扫描条件：扫描范围 200700 nm， 扫描间隔 1.0 nm，最佳波长为 535 nm。扫描光谱见图1。2.2.2 计算方法按照文献1,2,5等的方法计算长白山越橘中花色苷的含量。Acy(mg/100 g)=TODE535/10 1%1 cm=TOD98.2TOD = ODDV10D/SVTEV1Acy 为 anthocyanin 的缩写，TAcy 表示总花色
6、苷含量(mg/100 g 越橘鲜果)，TOD 表示总吸光度值， 表示为当某一花色苷质量体积为 1% 时，在 535 nm 下的吸光度值（即 10 mg 某一花色苷的总吸光度值） 。本实验条件下各种花色苷在文中所用的提取溶剂中， 为 98.2。OD 表示吸光度值；DV 表示样品稀释总体积；m 表示鲜果质量（g） 。图 1 越橘中花色苷的扫描光谱（略）2.3 正交实验设计2.3.1 正交实验设计根据药物的性质，以测定越橘中花色苷的总固体得率及纯度为指标，以 95%乙醇和 1.5mol/L HCl(8515) pH 3.0 作为提取溶剂2 ，用正交实验优选越橘中花色苷提取工艺。根据预试验结果，选取影
7、响提取效果的因素和水平，实验方案见表 1。表 1 长白山高寒地区越橘中花色苷提取的影响因素（略）2.3.2 样品溶液的制备按 L9(34)实验列号各条件分别对提取时间，提取温度，料液比，提取次数进行优选。见表 2。2.3.3 总固体得率的测定精密量取样品液 50 ml，称量重量，按实验条件进行提取，40挥发溶剂，直至 100 ml 转移至称重的蒸发皿中,水浴蒸干后，至干燥箱内 80干燥，于干燥器内冷却，精密称重，至恒重，计算提取的固体量。结果见表 2。表 2 正交实验结果（略）2.3.4 含量测定精确称取花色苷固体物 0.5 g，于 50 ml 容量瓶中用提取溶剂溶解，于 535 nm 测吸光
8、度，按“2.2.2”项下方法计算花色苷含量，计算固体提取物中花色苷的纯度（%） 。2.3.5 实验数据与方差分析见表 3。表 3 方差分析结果（略）2.3.6 结果分析比较各因素的极差值可以看出,影响提取效果的因素顺序为 DCBA ，其中提取次数对花色苷的提取纯度影响最大， 越橘中花色苷较优的提取工艺为 D3C3B2A1，即提取次数 3 次，提取料液比15，提取温度 60，提取时间 30 min。3 讨论本实验以最大限度地提取药材中的有效成分,避免有效成分的分解流失和无效成分的溶出为原则，进行了越橘中花色苷的提取工艺研究。通过扫描光谱确定最佳波长为 535 nm，与有关文献2,5报道的接近。采
9、用酸性溶剂提取7和低温挥发可以有效的降低花色苷的分解及提高花色苷的提取量2,8 ，实验结果中时间影响最小，采取最短时间 30 min进行提取，可有效缩短提取过程但不影响提取效率，通过提取方法的研究，为越橘进一步进行有效成分利用的药理学研究提供基础。【参考文献】1 Kalt W,Forney C F,Martin A,et al.Antioxidant capacity,vitamin C,phenolics ,and anthocyanins after fresh storage of small fruitsJ. J Agric Food Chem, 1999, 47:4638.2 孙阳昭
10、，孙志健，廖小军，等红莓果中花青素的提取工艺研究J.食品与发酵工业，2006,32 (1) : 129.3 张 燕，谢玫珍，廖小军. 热和紫外辐照对红莓花色苷稳定性的影响J.食品与发酵工业，2006，31（3）：37.4 向道丽.酶法提取越橘果楂花色苷酶解条件的研究J.中国林副特产，2005，79（6）：1.5 徐金瑞，张名位，刘兴华，等. 黑大豆种皮花色苷的提取及其抗氧化作用研究J.农业工程学报，2005，21（8）：161.6 王振宇，杨 谦. CO2 超临界超声波联用技术萃取花色苷工艺J.东北林业大学学报，2005，32（1）：83.7 李颖畅，孟宪军，修英涛，等.蓝莓果中花色苷的提取工艺研究J.食品科技 ，2007，11：73.8 王振宇，杨 谦. 酶法制备花色苷的研究J.中国甜菜糖业，2004，42（4）：26.
