1、神经干细胞治疗脑梗死的研究进展,山东大学第二医院神经内科毕建忠,干细胞神经干细胞神经干细胞与脑梗死我们的工作,干 细 胞,1、干细胞 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,2 、干细胞分类胚胎干细胞：指胚胎早期的干细胞。这类干细胞分化潜能宽，具有分化为机体任何组织细胞的能力成体干细胞：指成体各组织器官中的干细胞，成体干细胞具有自我更新能力，但分化潜能窄，只能分化为相应(或相邻)组织器官组成的细胞,3、干细胞的自稳定性指干细胞可在个体生命过程中自我更新并维持其自身数目恒定干细胞的自稳定性是区别肿瘤细胞的本质特征细胞通过其特有的分裂方式维持自稳定性,4、干细胞的分裂方式干细胞有对称与不对称两种
2、分裂方式,不对称分裂的结果使两个子细胞一个成为功能专一的分化细胞；另一个保持干细胞的特征使机体对干细胞的调控更灵活，以适应机体的生理变化要求机体对干细胞分裂的调控更精确，以保持干细胞数目恒定,4、干细胞的分裂方式,5、干细胞的分化潜能,根据其分化潜能大小，干细胞可分为三类,（1）全能干细胞(胚胎干细胞)具有形成完整个体的分化潜能如胚胎干细胞(ES)具有很强的分化能力，可无限增殖并分化为全身200多种细胞类型，及机体的各种组织、器官,（2）多能性干细胞多能干细胞具有分化出多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力如骨髓多能造血干细胞，它可分化出至少十二种血细胞，但不能分化出造血系统以外的其
3、它细胞,（3）专能干细胞(成体干细胞)专能干细胞(也称单能、偏能干细胞)，这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞(卫星细胞),6、干细胞的转分化和去分化,（1）干细胞的转分化 一种组织类型的干细胞在适当条件下分化为另一种组织类型的细胞的过程称干细胞的转分化（2）干细胞去分化一种干细胞向其前体细胞逆向转化称干细胞去分化 干细胞转分化和去分化表明成体干细胞被移植入受体中具有很强的可塑性，为干细胞治疗提供了可能,神经干细胞,传统观点：神经细胞无再生能力。新发现：中枢神经系统中部分细胞仍具有自我更新及分化产生各种神经细胞的能力，这些细胞被称为神
4、经干细胞。,1992年Rynolds和Weiss首先从成体小鼠侧脑室旁膜下的神经组织中分离并培养了神经干细胞Svendsen等用同样的方法从人的胚胎中分离出神经干细胞,（1）胚胎来源在发育过程中，哺乳动物中枢神经系统的大部分区域都存在神经干细胞，如大脑皮层、嗅球、脊髓及海马等部位这是由于发育中的组织具有较多的具有分化潜能的神经前体细胞,1、神经干细胞的来源,（2）成年来源海马齿状回下分子层和前脑的室管膜下区是2个神经干细胞聚集区嗅球、小脑、脑干、脊髓和视网膜等部位也已分离培养出神经肝细胞NSC在成年哺乳动物的脑内广泛存在,1、神经干细胞的来源,（3）其它来源诱导胚胎干细胞向NSC分化诱导少突胶
5、质细胞的前体细胞逆向分化为NSC诱导骨髓间充质干细胞分化为NSC通过基因操作使胚胎NSC获得永生化,1、神经干细胞的来源,2、神经干细胞的特点,缺乏神经系统分化的标志具有自我更新及增殖的能力具有多种细胞分化的潜能，可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞以及它们的前体细胞,（1） nestin，巢蛋白属于第类中间丝蛋白仅在胚胎早期神经上皮表达，出生后停止表达在神经前体细胞最先表达，一旦神经前体细胞朝向终末方向分化成神经元和胶质细胞(如星形胶质细胞)时，nestin便停止表达,3、神经干细胞的标志物,（2） vimentin，波形蛋白属于第类中间丝蛋白表达起始于神经迁移完成时分化完成后表达下降
6、,3、神经干细胞的标志物,（3） Musashi1RNA结合蛋白最先在果蝇中发现，是果蝇感觉神经前体细胞不对称分裂所必需的蛋白选择性地在各种哺乳类动物的神经干细胞/祖细胞表达在维持干细胞状态和分化中发挥重要的作用被作为哺乳类神经干细胞的标志蛋白,3、神经干细胞的标志物,（4）CD133又称AC133，是相对分子量为120kD五次跨膜的糖基化多肽最早由Miraglia等1997年报道为一种新的细胞表面抗原，表达于人的造血干细胞表面分选的CD133阳性的胚胎来源的脑细胞能增殖形成细胞球，而CD133阴性的细胞不能形成细胞球,3、神经干细胞的标志物,（5）GFAP，胶质纤维酸性蛋白属于第类中间纤维星
7、形胶质细胞的标志蛋白位于室管膜下区的细胞表达GFAP，显示出神经干细胞的特性,3、神经干细胞的标志物,4、神经干细胞的增殖与分化,基因调控细胞因子甲状腺激素与维甲酸神经细胞黏附分子其他,基因调控,(1)bHLH基因家族主要包括Neurogenine1、Neurogenine2和Mash1Neurogenine1和Neurogenine2促进神经干细胞向神经元方向分化，同时抑制其向胶质细胞分化Mash1促进神经干细胞向神经元前体细胞分化,(2)Notch基因Notch基因编码一个3105的跨膜蛋白Notch蛋白通过两种类型细胞间作用起局部调控功能：侧方抑制信号和诱导性信号Notch蛋白的作用为抑
8、制干细胞向神经元方向分化，并促进向胶质方向分化,基因调控,(3)PTEN基因抑癌基因PTEN基因敲除小鼠的脑体积显著增长，海马和小脑出现分层结构混乱PTEN基因对NSC的增殖起负向调节作用,基因调控,(1)表皮生长因子（EGF）家族EGF是促有丝分裂因子促进神经干细胞的增殖EGF多诱导NSC向星形胶质细胞分化,细胞因子,(2)纤维生长因子（FGF）家族FGF家族在胚胎期和成年期的中枢神经系统和周围神经系统发育中都有表达FGF1和FGF2发挥主要作用可刺激干细胞增殖诱导干细胞分化的作用与FGF的浓度有关，高剂量可以刺激产生神经元和少突胶质细胞，低剂量只产生神经元,细胞因子,(3)转化生长因子（T
9、GF-）超家族主要包括活化素、骨形成蛋白家族(BMPs)、白细胞抑制因子(LIF)和血小板源生长因子(PDGF)活化素仅影响细胞系的增殖，不影响分化BMP4可诱导NSC向星形胶质细胞分化LIF可促进NSC的分化PDGF可减少干细胞分化为成熟神经元的数量,细胞因子,通过细胞内核受体发挥作用3表达水平增加可诱导小脑区域前体神经元的分化RA可增加NSC向神经元前体细胞的分化,甲状腺激素(T3)和维甲酸(RA),神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)是细胞外基质的一种成分，介导细胞间的接触，调节神经迁移、轴突生长和基因表达等过程抑制NSC的增殖诱导NS
10、C向神经元方向分化,神经细胞黏附分子,GABA在早期神经系统发育中调节神经前体细胞的增殖和神经元的迁移、存活和分化谷氨酸可以抑制皮质前体细胞增殖而促进细胞分化血管活性肠肽(VIP)和垂体腺苷酸环化酶活性肽(PACAP)具有促进NSC增殖作用,其他因素,神经干细胞的治疗作用包括：替代治疗，用分化得到的神经元细胞或者胶质细胞来代替损伤或者变性的细胞转基因治疗，通过转基因的神经干细胞释放神经营养因子，来促进神经再生，释放肿瘤杀伤因子，遏制肿瘤生长作为基因载体，与病毒媒介结合后，发挥治疗作用,5神经干细胞的应用,NSC移植治疗的主要途径利用体外分离培养的NSC直接移植利用NSC系进行移植通过目的基因修
11、饰后移植通过神经营养因子原位诱导NSC增殖、分化,体外培养的NSC作为移植供体的优点,(1)在可控制的培养条件下，实现快速体外扩增以满足移植所需的细胞数量(2)可根据拟移植部位的细胞类型及细胞结构特异性，在体外使其分化成与受者部位细胞类型及构成相似的细胞群体后再行移植(3)可低温冻存，复苏后仍能维持原来的生物学特性，故可构建NSC库，源源不断地供应细胞,(4)可来源于受体自身，结构上易与宿主固有组织整合而无免疫反应(5)具有潜在的迁移能力，能在脑实质内弥散较远的距离到达靶部位(6)在中枢神经系统中不受血 脑屏障限制，以稳定直接的方式运送基因产物或替换无功能神经细胞,体外培养的NSC作为移植供体
12、的优点,NSC基因治疗的作用机制,（1）低免疫源性与自我更新NSC不表达成熟细胞抗原，具有低免疫源性，较少发生异体排斥反应，因而有助于长期存活，是基因治疗较理想的载体转染了治疗基因的NSC植入后可表达基因产物，从而达到治疗目的通过不对称分裂增殖，自我更新，使NSC载体在表达外源性基因同时，能修复肿瘤组织侵蚀的正常脑组织,（2）迁移能力参与病变部位神经结构和功能的修复迁移追踪肿瘤细胞，释放特定基因产物（3）良好的组织融合性移植后的NSC可透过血脑屏障至脑实质中，与宿主细胞在细胞形态结构和功能上形成初步的良好融合，使外源性基因高效稳定表达，而达到治疗作用,NSC基因治疗的作用机制,神经干细胞治疗神
13、经系统疾病的研究,神经系统变性疾病帕金森病阿尔茨海默病亨廷顿病脑血管病脑梗死脑出血,神经系统损伤脊髓损伤脑外伤神经系统肿瘤遗传代谢性疾病粘多糖综合症神经节苷脂沉积症,-,（1）帕金森病,Nishino等将神经干细胞植入大鼠帕金森病模型纹状体中，发现植入的神经干细胞可分化为多巴胺能神经元，半数以上的模型动物症状缓解Anton等通过转染了酪氨酸羟化酶(TH)基因的神经干细胞提供TH，可补偿帕金森病的多巴胺缺失Akerud等采用从人胚胎的腹侧中脑内分离出黑质细胞植入PD病人脑中，发现有一半以上的病人症状明显改变而且效果持续存在,Wang等用胚胎干细胞来源的胆碱能神经干细胞移植到小鼠AD模型大脑，结果
14、显示胆碱能神经干细胞进入损伤区，向胆碱能神经元细胞分化Gray将NSC注射入阿尔茨海默病模型动物脑内，观察到有胆碱能神经元表型和胶质细胞表型且实验动物认知功能恢复,（2）阿尔茨海默病,Brasted等将神经干细胞植入亨廷顿病大鼠模型脑内，使大鼠受损的运动习性重新恢复，表明亨廷顿病动物植入的神经干细胞可在脑内形成功能性连接，对促进亨廷顿病症的改善具有一定的作用Freeman等利用神经干细胞移植治疗人类亨廷顿病，病人症状和体征改善，组织学显示移植细胞替代了受损细胞并部分重建了神经元间的联系,（3）亨廷顿病,Jin等发现脑缺血可以促使大鼠海马齿状回和室管膜的NSC增殖Park等将NSC移植到缺血性脑
15、损伤的小鼠脑中，NSC显示强烈的移植物外源基因表达，并分化为损伤缺失的神经细胞Kondziolka等将人的NSC体外分化为神经元并移植到12例脑卒中患者的基底节。术前、术后的神经功能、PET和MRI检查结果表明NSC移植是安全的，6例患者的神经功能明显改善，PET扫描显示梗死部位的代谢活动增强,（4）脑梗死,Nonaka等用全反式维甲酸诱导胚胎干细胞分化为神经干细胞，注射到脑出血大鼠模型的对侧侧脑室内，28后在出血腔周围看到胚胎干细胞来源的神经元细胞和星形胶质细胞,神经元在侧脑室室管膜下区形成细胞结节Jeong等发现，通过静脉移植的神经干细胞选择性地移行到大鼠脑血肿周围，分化为神经元细胞(约1
16、0%)和星形胶质细胞(约75%),（5）脑出血,McDonald等将NSC注入大鼠胸髓损伤模型，2周后分化成少突胶质细胞、星形胶质细胞和神经元，并发现后肢部分负重与协调能力恢复Iwanami等将体外扩增的人NSC移植到损伤后9的狨猴脊髓，8周后分化为神经元、星形胶质细胞和少枝胶质细胞，损伤腔减小，同时运动功能明显增强,（6）脊髓损伤,Riess等对颅脑损伤的动物进行NSC移植治疗，发现NSC能分化为神经元并改善实验动物的运动功能Wennersten等在成年大鼠单侧顶叶皮质脑挫伤后,立即将人NSC移植到损伤附近，2周和6周后,移植细胞出现在损伤区域周围、海马、胼胝体和同侧的室管膜下区，双重染色显
17、示分化为神经元细胞和星形胶质细胞,（7）脑外伤,Be nedetti 将转染IL-4的鼠NSC注入的鼠胶质瘤模型发现，动物生存期明显延长，肿瘤体积明显缩小Abody等利用NSC做载体，转导胞嘧啶脱氨酶基因后治疗颅内胶质瘤模型动物，发现能有效的将5-Fc转变为5-Fu，80%的肿瘤细胞被杀灭，同时NSC还能追踪向正常组织浸润的肿瘤细胞,（8）中枢神经系统肿瘤,Buchet等将转导-葡糖苷酸酶基因的NSC注射到粘多糖综合症新生鼠体内，结果发现-葡糖苷酸酶活性在整个中枢神经轴表达，治疗组动物能长大成熟，而非治疗对照组动物在成熟前全部死亡Lacorazza等的研究表明：将NSC移植入神经节苷脂沉积症小
18、鼠脑内后，能表达-氨基己糖酶8周以上并增加酶的活性，脑内部分区域神经节苷脂的贮积减少,（9）遗传代谢性疾病,神经干细胞与脑梗死,1、外源性NSC治疗脑梗死2、内源性NSC治疗脑梗死3、诱导造血干细胞转分化治疗脑梗死4、我们的工作,1、外源性NSC治疗脑梗死,1997年，Mattsson, B 等从妊娠17天的大鼠胚胎新皮质取出脑组织，移植入局灶性缺血7天的大鼠病灶内，发现移植物可以在脑内存活，并改善动物的神经系统功能；但需要严格的控制饲养条件2001年，Riolobos, A S等将大鼠胚胎的脑组织移植入脑梗死模型的脑组织后，对患侧肢体进行强制性训练，结果运动能力得到一定改善，荧光示踪显示移植
19、细胞可向宿主脑内迁移；但未进行训练组未见改善说明：胚胎脑组织移植可以改善脑梗死大鼠模型的神经功能，但需要特殊的饲养条件和功能训练,胚胎脑组织移植治疗脑梗死,脐带血干细胞移植治疗脑梗死,2001年，Chen J等将人脐带血细胞经尾静脉注入大脑中动脉梗死的大鼠体内，14天后发现其神经功能明显改善2004年，Vendrame M等通过实验发现，静脉给予人脐带血细胞可以改善脑梗死大鼠模型的神经功能，减小梗死灶体积，且其效果呈剂量依赖性 说明脐带血干细胞移植可以促进脑梗死动物模型功能恢复，且可以通过静脉输入,2001年，Veizovic等将胚胎鼠来源的永生化神经上皮细胞系直接植入大脑中动脉梗死大鼠的病灶
20、内，发现肢体运动功能显著改善2002年，Modo, M.等将相同细胞系植入大脑中动脉梗死大鼠的侧脑室内，结果发现大鼠的认知功能显著改善说明同种胚胎源性NSC可以改善脑梗死大鼠的神经功能，但不同位置的植入效果不同,同种胚胎源性NSC移植治疗脑梗死,2003年，Jeong 等将人NSC经静脉注入脑梗死大鼠模型体内，结果显示神经功能显著改善2004年，Kelly等将人NSC直接注入大鼠脑梗死模型的大脑皮层，可见NSC在宿主脑内存活，并迁移分化为神经元和神经胶质细胞说明异种胚胎源性NSC亦可以在大鼠脑内分化为神经细胞，并改善宿主的神经功能,异种胚胎源性NSC移植治疗脑梗死,2003年，Zhang ZG
21、等首次从成年大鼠的侧脑室下区分离培养出NSC，采用强磁性标记后植入脑梗死大鼠模型的脑池内，利用磁共振示踪观察NSC的迁移情况，结果显示：NSC可以定向向梗死灶内迁移，增殖分化为神经元和胶质细胞，代替缺失的神经组织大鼠的神经功能明显改善说明，成年来源的NSC同样可以对脑梗死动物模型起到治疗作用,成年来源的NSC移植治疗脑梗死,2、内源性NSC治疗脑梗死,脑梗死后的神经再生,2001年，Kee NJ等通过阻断双侧颈动脉造成大鼠的全脑缺血模型，1周后齿状回的神经干细胞数目为正常水平的2到3倍；2周后，60%的新生细胞分化为CRMP-4阳性的幼稚细胞；5周后， 60%的新生细胞分化为钙结合蛋白（cal
22、bindin ）阳性的成熟细胞2001年，Arvidsson A等通过阻断一侧大脑中动脉2小时，造成局灶性脑梗死模型，5周后，免疫荧光显示NeuN 和BrdU阳性的NSC数目显著增加提示：全脑和局灶性大脑缺血，均可直接刺激脑内NSC的增生,2002年，Arvidsson A等在大脑中动脉阻塞造成的脑梗死大鼠模型中发现：侧脑室下区NSC大量增生，并向基底节区迁移6周内80%的新生细胞相继发生死亡仅有0.2%的损伤细胞得到新生细胞的替代修复提示：单纯依靠机体的自身反应产生的NSC增殖、分化尚远不足以修复梗死造成的神经细胞缺失,脑梗死后的神经再生,2002年，Nakatomi H等向全脑缺血大鼠脑梗
23、死模型的脑室内注射EGF和FGF，结果显示：海马区的NSC数目显著增加，并分化为颗粒细胞大鼠的神经功能，尤其是空间定位能力得到明显改善说明：EGF和FGF可以在体内促进内源性NSC增殖、分化为功能性神经细胞，改善大鼠的缺血性损伤,神经生长因子诱导的内源性NSC增殖,2003年，Sun Y等在大脑中动脉阻塞造成大鼠脑梗死后1-3天，通过侧脑室给予VEGF，结果发现：侧脑室下区和齿状回NSC的存活数目增加缺血半暗带的血管显著增生梗死灶体积明显减小大鼠神经功能明显改善说明：VEGF可以通过多种途径促进梗死后神经的再生和修复,神经生长因子诱导的内源性NSC增殖,2002年，Sun Y等将载有BDNF基
24、因的重组腺病毒注入大鼠脑梗死模型的海马区，结果发现：BDNF在宿主脑内可以大量表达内源性神经干细胞的数量较对造组减少大鼠的神经功能未见明显改善说明：外源性BDNF对大鼠内源性NSC的增殖有抑制作用,神经生长因子诱导的内源性NSC增殖,2002年，Ehrenreich H等选择13发病8小时以内的脑梗死病人，在第1-3天给予EPO静脉注射，结果发现：病人脑脊液内EPO水平达到对照组的60-100倍一个月后，病人神经功能明显优于对照组颅脑MRI现实梗死灶体积显著减小未见明显副作用出现提示：EPO可以促进急性脑梗死病人的恢复,神经生长因子诱导的内源性NSC增殖,2004年，Wang L等通过体外试验
25、证明，EPO可以促进养的NSC分化为神经元和血管上皮细胞；同时将EPO注入脑梗死大鼠的腹腔内，结果发现：梗死灶周围内的NSC明显增殖，并分化为神经细胞大鼠脑内的VEGF和BDNF水平显著升高大鼠的神经功能显著改善说明：EPO可以通过促进VEGF和BDNF的分泌促进NSC的增殖，对大鼠脑梗死起到治疗作用,神经生长因子诱导的内源性NSC增殖,内源性NSC治疗的优点,不使用胚胎NSC可避开伦理学责难NSC的来源稳定可靠无免疫源性，供体源于受体自身具有正常NSC自我更新、多潜能分化功能治疗操作简便，仅需激活呈静息态的NSC,避免内环境的紊乱与异种NSC相比,无动物致病基因存在可能成瘤性较同种异体的NS
26、C降低，较异种更为显著缩短治疗时程，节省治疗费用可以像使用药物一样使用内源性NSC，有利于制定合理的治疗规范或指南,内源性NSC治疗的优点,3、诱导造血干细胞转分化治疗脑梗死,造血干细胞向NSC的诱导分化,造血干细胞（haemopoietic stem cell，HSC）来源于骨髓HSC具有分化为多种基质细胞的能力，包括骨、软骨、脂肪、肌腱以及其他结缔组织HSC具有转分化为肌细胞和肝细胞等组织细胞的能力HSC可以转分化为NSC,Sugaya等在体外将HSC与分化的NSC共同培养，发现HSC可以转分化为NSC,进而分化为神经元和胶质细胞提示：HSC可在分化的NSC诱导下转分化为NSC,造血干细胞
27、向NSC的诱导分化,2000年，Mezey E等直接将HSC注入成年大鼠的侧脑室，免疫组化显示：HSC可以在CNS内增殖，并表达神经细胞特异性抗原HSC来源的细胞可以在CNS内迁移提示：HSC可在脑内转分化为NSC,造血干细胞向NSC的诱导分化,外源性HSC治疗脑梗死,2001年，Chen J等从成年大鼠体内提取骨髓基质细胞（MSC），体外培养后，直接注入脑梗死大鼠模型的梗死灶周围，结果显示：MSC在大鼠脑内增殖并转分化为神经元表型的细胞大鼠的运动功能和感觉功能及NSS评分均明显优于对照组说明：成体MSC脑内移植向NSC转分化对脑梗死具有治疗作用,外源性HSC治疗脑梗死,同年，Chen J等又
28、将从成年大鼠体内提取MSC，体外培养后，分别经静脉和颈动脉注入脑梗死大鼠模型体内，结果均显示：MSC可以迁移至大鼠脑内增殖并转分化为神经元表型的细胞大鼠的神经功能均明显优于对照组说明：成体MSC经周围血管移植向NSC转分化对脑梗死具有治疗作用,外源性HSC治疗脑梗死,2004年，Taguchi A等从人脐带血提取CD34+的HSC，经静脉注入免疫抑制的大鼠脑梗死模型体内，发现：梗死灶内新生血管增生神经元样细胞增殖、迁移至病灶内大鼠神经功能明显改善说明：脐带血来源的HSC经周围血管移植向NSC转分化对脑梗死具有治疗作用,2003年，Schabitz WR等发现G-CSF可以减轻谷氨酸对体外培养N
29、SC的损伤；同时，他们把G-CSF通过静脉注入大鼠脑梗死模型的体内，发现：梗死灶体积较对照组减小47%神经系统功能明显改善提示：G-CSF对脑梗死大鼠具有神经保护作用,内源性HSC治疗脑梗死,2003年，Willing AE等采用G-CSF动员骨髓HSC至周围血中，提取分离后移植入大鼠脑梗死模型体内，结果显示：可见转分化的NSC增殖、分化，并向病灶出迁移大鼠神经功能明显改善说明：动员自体骨髓HSC，移植入体内转分化为NSC对脑梗死有治疗作用,内源性HSC治疗脑梗死,2004年，吕传真等采用线栓法治成大鼠脑梗死模型，然后给予G-CSF皮下注射，结果显示：HSC被动员至外周血，并可以向脑内迁移、分
30、化为NSC梗死灶周围NSC和新生血管明显增多梗死灶体积明显减小大鼠神经功能明显改善说明：直接采用G-CSF动员自体HSC向NSC转分化对脑梗死有治疗作用,内源性HSC治疗脑梗死,2004年，Schabitz WR等在美国神经病学学会年会上宣布，一项正在进行的关于G-CSF治疗急性脑梗死的临床安全性试验，初步结果未见明显的副作用，对G-CSF治疗脑梗死的临床应用起到了一定的推动作用,内源性HSC治疗脑梗死,我们的工作,粒细胞集落刺激因子（G-CSF）与血管内皮生长因子（VEGF）对SAMP10小鼠作用研究,观察联合应用G-CSF与VEGF诱导自体干细胞分化，治疗快速老化小鼠（ SAMP10 ）的
31、作用及其机制,研究目的,粒细胞集落刺激因子（graunlocyte colony-stimulating factor，G-CSF）是一种重要的造血生长因子，能与特异性受体结合，通过信号传导系统，调节粒系细胞的增殖与分化可以动员骨髓的造血干细胞（HSC）进入血液循环，进而向中枢神经系统迁移可促进NSC的增殖、分化具有神经保护作用,立题依据,VEGF是一种分泌型的二聚体蛋白，是强有力的血管形成因子，可通过与受体结合，促进内皮细胞形成管腔 促进NSC的增殖、分化，与神经细胞的再生密切相关VEGF可以促进脑内的血管生成，为NSC的增殖、分化提供良好的微环境VEGF可以通过可通过促进血管和神经胶质细胞
32、增殖，以及抗凋亡发挥神经保护作用,立题依据,二者联合，可以动员自体骨髓内的造血干细胞和间充质干细胞进入血液，并迁移到脑内分化为NSC，同时诱导脑内的NSC增殖；二者进一步分化为神经元和胶质细胞，代替缺失的神经细胞的功能，改善SAMP10 小鼠的神经功能,立题依据,采用SAMP10小鼠为研究对象，先后给与G-CSF和VEGF联合应用，观察小鼠给药前及给药后7天，21天，28天，56天 的行为学改变，同时行组织病理学观察，判断NSC的迁移、增殖及分化情况,实验方法,实验结果,Morris水迷宫试验显示，给药后小鼠的认知功能明显改善，且联合应用G-CSF和VEGF优于单用G-CSF,实验结果,第7天水迷宫结果,与对照组比较* P0.05,实验结果,第14天水迷宫结果,与对照组比较* P0.05,实验结果,第28天水迷宫结果,与对照组比较* P0.05,实验结果,第56天水迷宫结果,与对照组比较* P0.05,组织病理显示给药后，小鼠脑内出现nestin免疫染色阳性的神经细胞，G-CSF干预后阳性细胞数明显高于对照组，而G-CSF与VEGF的联合应用nestin表达水平更高,实验结果,谢谢！,
