1、实验课要求,1.进入实验室须穿白大衣，实验室要保持安静，有秩序，手机要保持关闭或无声状态，以免影响他人。2.必须严肃、认真地进行实验操作，观察实验结果。3.动物室需保持清洁，定期确认饲料和水瓶，注意观察动物。4.取及动物时，注意个人安全。,5.鼠笼及垫料需要每周更换次，用过的鼠笼必须及时清洗干净。6.如有死亡动物，应及时报告并按规定处理。7.爱护公共财物，节约各种试剂,每次实验结束后都要轮流值日，将实验室打扫干净，关好门窗和水电后方可离开实验室。,形态学实验（一）,实验主要内容,小白鼠的捉拿与固定、注射方法动物麻醉及正确使用手术器械方法肝硬化模型制备方法解剖小白鼠并观察腹腔脏器及解剖位置（重点
2、观察胆总管）,小白鼠的生物学特性,）体型小，体重20-40g，寿命一般为2-3年。）性情温顺，胆小怕惊，对外来刺激极为敏感。）属杂食性，胃容量小，不耐饥饿。对温、湿度变化敏感。）性成熟早，繁殖力强。,小白鼠的捉拿与固定方法,先用右手将鼠尾抓住并提起，将其旋转数周后放在实验台面上，在小白鼠向前爬行时用力向后拉尾，此时用左手的拇指和食指捏住小白鼠两耳和头颈部皮肤，然后将鼠置于左手心中，拉直后肢并用左手无名指和小指压紧尾巴和后肢，右手即可作注射、灌胃等实验操作。,常用给药途径与方法,）注射给药法：肌内注射皮下注射皮内注射腹腔注射静脉注射）口服给药法：饲料给药胃管给药,腹腔注射方法,小白鼠做实验时，以
3、左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。可先回抽注射器，确认无血管或脏器刺破。切勿用力过猛，以免刺伤内脏器官。,动物术前准备,实验前动物需：禁食 12-24小时禁水 4-6小时以免手术时出现呕吐及窒息死亡等现象,动物实验常用麻醉剂,（）吸入性麻醉剂：乙醚、氯仿等特点：a.麻醉量与致死量相差大；b.麻醉深度易于掌握；c.麻醉后恢复快（）非吸入性麻醉剂：巴比妥类、氨基甲酸乙酯、水合氯醛、氯胺酮等特点：优点是使用方法简便、麻醉过程平稳，且一次用药便可维持
4、较长时间等；缺点是动物的苏醒较慢，麻醉深度和使用量较难控制。,5%水合氯醛，按0.2m1/20g腹腔注射,麻醉药给药途径,）注射给药法：肌内注射皮下注射皮内注射腹腔注射静脉注射）口服给药法：灌胃法）其他途径：呼吸道给药脊髓内给药直肠内给药,麻醉效果的观察,呼吸：深慢而平稳反射活动：明显迟钝肌张力：全身肌肉松弛皮肤夹捏反应：皮肤夹捏反射消失,正确持剪刀法,为拇指和第四指分别插入剪刀柄的两环，中指放在第四指环的剪刀柄上，食指压在轴节处起稳定和向导作用，有利操作。,正确持镊法,正确持镊是用拇指对食指与中指。,缝 针,缝针是用于各种组织缝合的器械，它由三个基本部分组成，即针尖，针体和针眼。圆针：弧度大
5、者多用于深部组织及软组织。 三角针：前半部为三棱形，较锋利，用于缝合皮肤、软骨、韧带等坚韧组织，损伤性较大。 铲头针：临床较少用。,圆针,三角针,铲头针,直针,器械打结法,肝硬化造模的主要方法,化学性肝硬化模型结扎胆总管肝硬化模型实验性免疫肝硬化模型血吸虫虫卵所致肝硬化模型转基因肝硬化模型复合法,化学性肝硬化模型,无色、易挥发、不易燃的液体。具氯仿的微甜气味。化学性质稳定。分子量153.84，微溶于水，可与乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。操作注意事项：有毒，加强通风。,四氯化碳（ CCl4 ）：carbon tetrachloride,CCl4对肝脏损伤机理,CCl4通过肝微粒体细胞色素P45
6、0氧化酶激活后,产生自由基CCl3-及Cl,CCl3-与肝细胞内大分子发生共价结合,破坏肝细胞功能,肝纤维化、肝硬化,CCl4模型制备过程,给药时间：腹腔注射次/周，共4周，最后一次给药24h之后处死并取材。药物剂量：20% CCl4 0.1ml/20g特点：成功率高、方法成熟，但动物个体差异较大。,CCl4 : 橄榄油:即20的CCl4注射,CCl4注射后肝脏变化,注射CCl4一个月后,正常小白鼠肝脏,正常组,CCL4 组,CCL4 组,结扎胆总管肝硬化模型,固定,备皮,切开皮肤,切开腹膜,消毒,正常人体胆总管解剖,小白鼠胆总管位置,结扎胆总管,进腹后提出十二指肠，近十二指肠处游离胆总管，两端丝线结扎,切断胆总管、缝合,结扎胆总管手术过程,Curr Protoc Toxicol. 2012 May;Chapter 23:Unit 23.1,术后周后胆管明显扩张,胆囊,胆囊管,肝总管,术后周后可见胆囊、胆囊管及肝总管明显扩张；皮肤、肝脏明显变黄,正常组,BDL组,BDL组,每个组 4只,正常组 1只,加药组 3只,考核方式: 1.平时成绩（平时实验操作能力，实验态度，出勤率 ） 30% 2.实验报告书 70%,思考题,肝纤维化和肝硬化的病理特点？人体肝门部解剖特点？手术时注意事项？人体胆总管与十二指肠的关系？肝外胆汁淤积引起肝损伤的机理？胆漏的原因及临床表现？,
