1、第十七章 免疫球蛋白的检测及应用,医学检验系 王洪兴,概述： 人类免疫球蛋白（ immunoglobulin,Ig ）由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。按其重链分为五类， IgG 有四个亚型， IgA 有二个亚型并有 sIgA ， IgM 亦有二个亚型。 Ig 主要存在于血液中，占血浆蛋白总量的 20% ，也可存在于其他体液中，其含量依次为 IgG 、 A 、 M 、 D 、 E 。,第一节 IgG 、 IgA 、 IgM 的测定,一、单向免疫扩散法 其原理是将抗血清均匀混入琼脂，然后打孔加入待测血清（ Ig ），血清向四周扩散，形成可见的沉淀环，量取沉淀环直径与标准曲线，推算出抗体
2、含量，待测血清要做一定稀释。,该方法是经典方法，但可能出现误差。 1 ）待测血清或标准液溢出加样孔 2 ）固相抗体或抗原过量而使沉淀过大或过小，前者形成海德堡曲线，后者形成钩状效应 P54 3 ）加样量不足或过多，或混有气泡 4 ）加样孔破裂 5 ）琼脂板存放时间过长，水分蒸发或变形 6 ）琼脂半不平，厚薄不平 7 ）打孔后挑取琼脂将琼脂底挑取，以致待测血清底部流溢 8 ）扩散时置盒不水平，导致沉淀环不圆 该方法影响因素多，实验时间长，结果的重复性差，该技术设置了钩状效应校正系统。,第二节 体液中 IgG 、 IgA 、 IgM 测定的临床意义,一、血清 Ig 定量的临床意义 1. 低 Ig
3、血症 先天性低 Ig 血症 获得性低 Ig 血症 2. 高 Ig 血症 1 ）多克隆 Ig 增高 2 ）单克隆 Ig 增高,二、尿液 Ig 定量的临床意义 免疫循环复合物沉积在肾小球基底膜并激活补体而造成肾组织损害，检测蛋白尿，结合临床对肾功能评价有一定的作用。 尿液中检测游离轻链是诊断轻链病的主要手段，并对多发性骨髓瘤等疾病的分型鉴定及预后判断均有重要意义。,三、脑脊液 Ig 定量的临床意义 中枢神经系统可以产生很强的免疫应答，血液中的 Ig 可渗透至 CSF ，生理情况下血中通过通透性正常的血 - 脑屏障（ blood brain barrier ， BBB ）而进入 CSF 。 IgG
4、易通过 BBB ， IgA 略难， IgM 分子大，更难通过 BBB 。当脑组织或脑膜有病变时脉络丛通透性增加， BBB 发生破坏，或自身病变组织产生病理产物，进入脑脊液，使脑脊液组织发生改变。,第三节 IgE 和 IgD 的测定,一、 IgE 的测定方法 1 、放射免疫法：固相抗 -IgE+IgE+ 125 I 标记抗人 IgE 2 、化学发光免疫分析法：固相抗 -IgE+IgE+ 酶标抗 IgE+ 底物 3 、乳胶颗粒免疫浊度法 4 、酶免疫试验,二、 IgD 的测定方法,（一）测定方法 放射免疫测定法和乳胶颗粒免疫浊度法 （二）临床意义： IgD 含量低，除 SmIgD 为膜表面受体外，
5、其他生物学功能不明，在妊娠末期，大量吸烟者和 IgD 骨髓瘤患者血清中 IgD 含量升高。,第四节 异常免疫球蛋白的检测,一、 M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤。,（一）血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 区与慢 区 IgA 型多位于慢 区与 区 IgM 型多位于 2 区或 区 IgD 型多位于 区或 区 但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病时 M 蛋白呈淡染区带常在 或 区，需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时观察。,（二）免疫球蛋白定量测定 （三）轻链片段定量测定 （四）免疫电泳及免疫固定电泳 1. 免疫电泳 2. 免疫固
6、定电泳,免疫固定电泳有以下特点： 1. 周期短 2. 敏感性高 3. 分辨清晰 4. 结果易于分析,（五）本周蛋白的检测 即尿中游离的免疫球蛋白轻链，对轻链病作出诊断，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。 本周蛋白在 pH5.0 的条件下，加热至 50 60 出现沉淀，继续加热至 90 以后又重新溶解，故称凝溶蛋白。 也可用抗 和 型轻链抗血清进行免疫电泳，为了提高检出率，尿标本宜先用聚乙二醇通过半透膜浓缩。,二、冷球蛋白的检测与鉴定,是血液中的一种特殊蛋白质，在 4 时不溶解并自发沉淀， 30易于聚合，它们固定补体产生炎症反应，类似IC引起的
7、疾病。冷球蛋白存在于许多疾病。 冷球蛋白有两种类型，单株型和混合型 1）IgG或IgM单株型冷球蛋白 2）混合型冷球蛋白。IgG、IgM、IgA多株型与IgG、IgM和补体C3混合型,（一）定性分析 分离血清作二支分装，一支置 4，一支置37，直立，一般于2472小时，4一管可出现沉淀 （二）定量分析 将沉淀用冷 pH7.0 ， 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液洗涤，然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥 / 巴比妥钠缓冲液中，置 37 30min，进行免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定,（三）注意事项 1. 部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 时发生沉淀，故取标本时要保温 2. 部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀，但有的需要数天，故此应放置一周 3. 正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多克隆冷球蛋白的性质，且含量低 4. 冷纤维蛋白原、 C 反应蛋白 - 蛋白复合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性，实验时应加以区别,思考题：1IgG、IgA、IgM的测定技术2体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用3IgE、IgD、的测定技术4异常免疫球蛋白的检测技术,
