1、补体C3d增强伪狂犬病毒gC基因免疫原性的研究,汇报提纲,文献综述研究的目的、意义研究内容结果与分析结论,补体C3d的分子生物学特性,补体C3d晶体格结构,补体受体CR2晶体格结构,补体受体CR2与C3d结合的晶体格结构,抗原和补体C3d复合物与B细胞表面受体结合示意图,补体C3d的作用机理,伪狂犬病毒gC基因的结构与功能,PrV 11种糖蛋白在免疫中的作用,研究内容：,1.猪、鼠、羊补体C3d分子cDNA的克隆与序列分析 2.补体C3d或受体结合功能区M28对gC基因核酸疫苗的免疫增强作用 3.猪源补体C3d的分子免疫增强作用及小鼠动物模型的建立,试验技术路线图,RT-PCR扩增,补体C3d
2、分子,重组质粒的构建,动物免疫试验,体液免疫,细胞免疫,结果与分析,猪、鼠、羊补体C3d分子的克隆,UL IR Us TR,小鼠肝细胞总RNA的电泳结果,C3d cDNA的RT-PCR扩增,不同物种间C3d氨基酸同源性的比较,鼠/羊补体C3d同源性81%，鼠/猪补体C3d同源性82%,两种不同形式的系统发育进化树,鼠、猪、羊补体C3d蛋白信号肽分析,鼠、猪、羊补体C3d均无信号肽,鼠、猪、羊的受体结合功能区,重组表达质粒的结构示意图,重组质粒的间接免疫荧光试验,A: pcD NA3.1+; B: sgC; C: sgC-C3d3; D: sgC-M284,A,B,D,C,Western blo
3、tting 分析融合蛋白表达,Western blot 检测pcDNA3.1+ 、sgC、 sgC-C3d3、sgC-sC3d3和 sgC-M284 在PK-15 细胞中的表达,不同免疫组诱导的抗gC ELISA抗体检测,鼠源C3d作用,猪源C3d作用,免疫组不同阶段诱导的中和抗体滴度,鼠源补体C3d,猪源补体C3d,各免疫组诱导的淋巴细胞刺激指数,鼠源补体c3d作用,猪源补体c3d作用,免疫组脾细胞IL-4、 IFN-水平检测,鼠源补体c3d免疫增强作用,鼠源补体c3d免疫增强作用,攻毒后小鼠的存活情况,鼠源补体C3d,猪源补体C3d,攻毒后各免疫组小鼠的体重变化情况,鼠源补体c3d作用,猪
4、源补体c3d作用,结论,.克隆了猪、鼠、羊的补体C3d分子，其中羊补体C3d分子的克隆为首次报道。 2. 证明gC基因与C3d融合能够显著增强gC基因常规DNA疫苗所诱发的体液免疫水平，调节Th1/Th2免疫反应平衡，提供更强的免疫保护作用。3. 补体C3d的受体结合功能区M28可以增强gC基因常规DNA疫苗所诱发的ELISA与中和抗体水平，但是较全长C3d的免疫增强作用略差。,4. 猪源补体C3d同样可以显著增强gC基因常规DNA疫苗抗体水平，提供更强的免疫保护作用。5.建立了小鼠模型，研究猪源补体C3d分子免疫佐剂作用。,Tiezhu Tong, Huiying Fan, Yadi Tan
5、, Shaobo Xiao, Jieyu Ling, Huanchun Chen, Aizhen Guo C3d enhanced DNA vaccination induced humoral immune response to glycoprotein gC of pseudorabies virus Biochemical and Biophysical Research Communications（2004IF: 2.904）2. Tiezhu Tong, Huiying Fan, Yadi Tan, Shaobo Xiao, Huanchun Chen, Aizhen Guo I
6、mmunogenicity of a Pseudorabies virus gCC3d fusionprotein containing a porcine homolog of C3d Vaccine (submitted)3.Tiezhu Tong, Huiying Fan, Yadi Tan, Huanchun Chen, Aizhen Guo C3d enhancement of gC glycoprotein immune response against pseudorabies virus 19th International Pig Veterinary Congress,硕士
7、期间发表文章：,硕士期间发表文章：,4.Huiying Fan, Chunmei,Ju, Tiezhu Tong, Hongliang Huang, Jiangqiang Lv, Huanchun Chen Immunogenicity of Empty Capsids of Porcine Circovirus Type 2 Produced in Insect Cells 。 Veterinary research communications 5.佟铁铸、樊惠英、谭亚娣、陈焕春、郭爱珍 鼠、猪、羊补体C3d基因克隆和序列分析 预防兽医学报 (submitted)6. 樊惠英、佟铁铸; 琚春梅; 吕建强; 黄红亮、陈焕春; 猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性 生物工程学报 2005 21（6）975-978,
