1、微生物样本采集的标准化与规范化,基本原则（一）,采集标本前局部应做好准备工作，标本必须直接采自病变部位。尽可能在合适的时间采集。 例如：清晨的痰和尿液含菌量较多，因此是采集的最佳时间。了解感染性疾病的自然过程有助于决定采集何种标本及采集时间。 必要的免疫学知识对解释血清学结果十分有用。应尽量采集足量的标本送实验室。 例如：成人的血培养标本每次宜采集10ml以上。,基本原则（二）,使用合适器械及运送容器很重要，所有标本都应使用无菌容器；棉拭子常与运送培养基配合使用，但棉拭子不宜用作厌氧菌培养。任何送厌氧培养的标本应做到在厌氧环境下运送。培养标本尽可能在应用抗菌药物前采集，解释培养结果时也应考虑抗
2、菌药物使用史。有些细菌如淋病奈瑟球菌、化脓性链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟球菌等对抗菌药物非常敏感。对送检标本有特殊要求时，应在化验单上清楚标明，或直接与实验室联系。,常见标本类型,血液、骨髓、脓液痰、尿、便胸水、腹水、脑脊液、胆汁、胰液伤口：引流液、分泌物病变组织：炎性组织、坏死组织、脓苔特定部位穿刺液：胰腺周围、囊肿内部中心静脉插管体内留置各种引流管,1.血培养,疑为菌血症、败血症和脓毒血症的患者，一般在发热初期和发热高峰期采集，如已用抗菌药物治疗的患者，应在下次用药前采集。,0,30,60,Time (min),Temp体温,Chills寒战,Blood Cultures血培养,BAC
3、TEREMIALEVEL菌血症的水平,采血套数,表皮葡萄球菌的临床意义,23套血培养，有助于污染的判断。,Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333,污染菌,致病菌,？,采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。,厌氧瓶平均报阳时间快于需氧瓶,采血量(ml)与检出率的关系,Overall,血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3,但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为1：41：10,皮肤消毒剂：,推荐使用碘酊、次氯酸和洗必太或碘伏。 碘酊、次氯
4、酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏。 消毒剂需要有足够的作用时间以保证消毒效果（碘酊作用30s；碘伏作用1.52 min）。 洗必泰的作用时间和碘酊一样，但是没有过敏反应，因此不必擦去，但不能用于小于2个月的婴儿。,操作方法,以75%酒精消毒培养瓶胶塞，等待1分钟。消毒静脉穿刺部位：以碘酊拭子从穿刺中心开始向四周同心消毒，待干；以75%酒精脱碘；不要再接触穿刺部位；抽血8-10 毫升/次，注入培养瓶；直接在培养瓶上注明患者姓名、送检日期， 2小时内送检。培养瓶消毒程序： 用75酒精擦拭血培养瓶橡皮塞（不能用含碘消毒剂），作用60s。用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面残余液体然后注入血液。,需氧和厌
5、氧血培养瓶,血培养标本采集流程,采集次数,急性脓毒血症 10分钟内从不同部位抽血2-3次；急性感染性心内膜炎 从不同部位抽血3次，每次相隔1-2小时；亚急性感染性心内膜炎 从不同部位抽血3次，每次相隔15分钟以上，如果24小时内培养为阴性，则同上再抽血培养3次。不明原因发热 从不同部位抽血2-3次，每次相隔1小时以上；如果24小时内培养为阴性，则同上再抽血培养2-3次。,2.呼吸道标本,下呼吸道标本1）支气管肺泡灌洗液，支气管刷或液，气管吸出物（可避免正常菌群污染，应首选）：将吸出物或洗液置入“U”形管中；将支气管刷置入有盐水的无菌容器中。标本量1毫升。2小时，室温，1次/天。,2）咯出痰在护
6、士或医师的指导下收集痰标本；让患者用水漱口以去除口腔粘膜表面的正常菌群；指导患者深咯，收集下呼吸道痰(不要鼻后液体)。留入无菌容器。2小时，室温，1次/天。,乳酪样痰、粘液痰、 鲜血痰、 唾液血痰,3）诱导痰嘱患者刷牙(主要是牙龈和舌头)后用水漱口；使用喷雾器，让患者吸入3-10%的无菌盐水25毫升；将诱导出的痰液收集入洁净或无菌容器中。其它同前。,标本要求,最理想的标本为：10个鳞状细胞 / 100倍视野，25个多核白细胞。标本最小量：细菌，1毫升；真菌，3-5毫升；分枝杆菌，5-10毫升。,鳞状上皮细胞 革兰染色 200,白细胞 革兰染色 200,结核杆菌检查标本留取,浓缩集菌法查抗酸杆菌
7、：可嘱患者咯晨痰1-2口或更多于洁净干燥容器中。结核菌培养：应停患者当晚抗结核药物一次，次晨咳痰1-2口送检。,上呼吸道：,1）口腔：用拭子去除损伤表面的分泌物或碎屑，弃去拭子；用另一拭子用力抹取损伤部位，不要接触正常组织。用拭子肉汤培养基运送，2小时，室温，1次/天，不鼓励采集表层组织标本检测细菌，应选用供活检的标本或用针抽吸出的标本。可检测放线菌及诺卡菌。,2）鼻：预先用无菌盐水湿润拭子，将拭子插入鼻孔2厘米；靠着鼻粘膜旋转拭子。2小时，室温，1次/天，前鼻部培养可用于检测葡萄球菌和链球菌携带者，可用鼻窥器。,3）鼻咽：经鼻轻柔插入拭子至后鼻咽部；缓慢旋转拭子5秒以吸附分泌物；取出拭子置入
8、肉汤培养基或立刻送至细菌室。肉汤拭子2小时，室温；拭子：15分钟，室温，1次/天。4）咽用压舌板压舌；用无菌拭子在后咽部、扁桃体和其它感染部位采集标本；怀疑白喉可用无菌拭子从患者病变部位假膜及其边缘取材立刻送检。肉汤拭子2小时，室温；拭子：1小时，室温，1次/天。,咽拭子标本采集,3. 尿,外尿道多寄居有正常菌群，故采集尿液时更应注意无菌操作，常用清洁中段尿作为送检标本。中段尿用于细菌培养，最好用晨尿。诊断泌尿系感染的细菌学标准一般为菌落计数105CFU/ml。针对于老年人多重症及卧床患者排尿困难，可相应采用导尿管采集标本。采集和容器为无菌尿瓶，标本量1毫升，条件2小时，室温，1次/天。,1）
9、女性中段尿：用肥皂和水彻底清洗尿道口；用湿润纱垫擦拭；分开阴唇，排尿；排出几毫升后收集中段尿，不终止排尿。2）男性中段尿：用肥皂和水清洗阴茎头；用湿润纱垫擦拭；卷起包皮，排尿；排出几毫升后以无菌螺盖瓶直接收集中段尿，不终止排尿。,3）插导尿管：用肥皂和水彻底清洗尿道口；用湿润纱垫擦拭；以无菌术将导尿管插入膀胱；排出约15毫升尿后，将尿收集至无菌容器中。此操作过程有可能将尿道细菌带入膀胱，增加逆行性感染的机会，留取标本时应注意。4）内置导尿管：以70%的酒精消毒导尿管出尿口；以无菌术用注射器收集5-10毫升尿；将尿打入无菌尿瓶中。,5）结核分枝杆菌：留晨尿（或24小时尿的沉淀部分）10-15毫升
10、于清洁带盖容器送检。24小时尿只能做浓缩集菌法查抗酸杆菌。,4. 便,1)常规培养：直接将便排在洁净、干燥的容器中。在1小时内送至细菌室，或将带有可见粪便的拭子置入无菌试管。条件：洁净、防漏容器或拭子运送。 标本量2克，1小时，室温，1次/天。,2）艰难梭菌：每天排5次以上水样便或软便的患者考虑检测。软便定义为不成形、表现为容器形状的便。检测成形便或硬便意义不大，往往只能指示正常菌群。艰难梭菌在空气中暴露长于15分钟即大部分死亡。-20冻存使毒素活性迅速丢失。将水样便或软便排在洁净、干燥的容器中。 无菌瓶5毫升，10分钟，室温；1次/2天。,3）肛拭子：小心将拭子插入肛门，大约在括约肌之上2-
11、3厘米；轻轻旋转拭子采集肛门隐窝的标本；要在拭子上明显看到粪便，才能检测腹泻病原体。拭子采集，2小时，室温，1次/天。除了长期卧床、无便（如中毒性痢疾）患者及频繁腹泻患者，不推荐做拭子常规培养。用于检测淋病奈瑟菌、志贺菌、弯曲菌、B群链球菌的肛携带者以及不能留取粪便标本的患者。可检测霍乱弧菌。,5. 脑脊液：,以2%碘酊消毒穿刺部位，以酒精脱碘；在L3-L4、L4-L5或L5-S1椎间隙之间插入套管针；到达蛛网膜下腔之后抽出管芯，分别收集1-2毫升液体至3支无菌试管中。最小量：细菌，1毫升， 真菌，2毫升， 抗酸杆菌，2毫升；细菌：不要放冰箱 15分钟，室温。,6. 体液：,包括腹水、胆汁、关
12、节液、心包积液、胸水、滑液等。2%碘酊消毒皮肤；经皮用注射器抽吸或用外科方法获得标本；立刻送至细菌室，待检液体尽可能多送，不要送浸于液体中的拭子。细菌和真菌检测可使用血培养瓶、无菌螺盖瓶以及带橡胶塞注射器。细菌：1毫升，真菌：10毫升，分枝杆菌：10毫升，15分钟，室温。,7. 脓肿,1）开放脓肿：如有可能抽吸脓肿；或用拭子深入损伤部位并旋转抹取脓肿壁，损伤基底部和脓肿壁最有培养价值，送检脓肿表面标本会培养出非感染性的定植细菌。使用拭子采集，2小时，室温，1次/天/来源。 2）闭合脓肿：以注射器抽吸脓肿，排出空气，将脓液注入无菌运送容器或血培养瓶。 标本量1毫升，2小时，室温，1次/天/来源。
13、,8. 骨髓,按外科切口准备穿刺部位。接种于血培养瓶或置于无菌试管，24小时，室温，1次/天。,9. 静脉导管,以75%酒精消毒导管四周的皮肤；以无菌术抽出导管，剪下远端5厘米长的导管直接置入无菌试管；立刻送至细菌室并防干燥。无菌试管运送，15分钟，室温，可接收做培养的静脉导管：中心静脉的、测中心静脉压的、末梢静脉的、动脉的、脐的、营养过度患者的等。,10. 褥疮,褥疮拭子培养的临床意义不大。应选择供活检组织或注射器吸出物。以无菌盐水清洗褥疮表面；如不做活检，用力以拭子抹取褥疮基底部；将拭子置入肉汤培养基中。2小时，室温，1次/天/来源。,参考文献,汪复 张婴元 吴菊芳等，实用抗感染治疗学，北京： 人民卫生出版社，2004，24 33. 叶应妩 王毓三 申子瑜等，全国临床检验操作规程（第三版），南京：东南大学出版社，2006，736754,
