1、疫苗和抗体工程,制作组：中英1303第二小分组,免疫的基本概念,免疫是指机体的一种生理性保护功能。它包括机体对异物( 病原生物性或非病原生物性的)的识别、排除或消灭等一系列过程。这种过程可能引起自身组织损伤，也可能没有组织损伤。概括起来说，免疫系统的功能主要表现为三方面，即防御功能、稳定功能及免疫监视作用，这些功能一旦失调，即产生免疫病理反应。 （以毒攻毒）。免疫的概念归纳为：免疫是机体的一种保护性生理反应，其作用是“识别”和排除抗原性异物(如病原微生物，衰老的自身细胞，突变产生的异常体细胞等)，以维持机体内环境的平衡和稳定。免疫反应在正常的情况下对机体是有利的，但在某些情况下也可能造成不利的
2、后果。,机体的抗感染免疫: 抗感染免疫系统分先天性免疫和获得性免疫两大类。 人工免疫分为:人工自动免疫，人工被动免疫； 人工自动免疫：输入抗原,使人体产生抗体； 人工被动免疫:输入免疫血清(含有特异性抗体),使人体获得一定的免疫力,可立即发挥免疫作用。,疫苗的定义和分类,疫苗定义：凡具有抗原性接种于机体可产生特异的自动免疫力，可抵御感染病的发生或流行，总称为疫苗。根据用途，可将疫苗分成预防类，治疗类和诊断类三大类。“菌苗”：以细菌制备的制剂；“疫苗”：病毒及立克次氏体制备的制剂；“类毒素”：以细菌代谢产物毒素制备的制剂。,疫苗分类,（1） 减毒活疫苗（2） 灭活疫苗（3） 多糖疫苗,（4） 组
3、分疫苗（5） 基因工程疫苗,（6） 合成肽疫苗,（7） 抗独特型抗体疫苗,（8） 基因疫苗,疫苗的种类,目前在我国应用的疫苗有几十种到上百种。最常用的有十种。新型的疫苗正在不断研制,乙脑疫苗,用于预防流行性乙型脑炎(简称乙脑)。将流行性乙型脑炎病毒感染地鼠肾细胞，培育后收获病毒液冻干制成减毒活疫苗，用于预防流行性乙型脑炎。,乙肝疫苗,用以预防乙型肝炎。目前我国使用的主要有乙型肝炎血源疫苗和乙肝基因工程疫苗两种，适用于所有可能感染乙肝者。 乙型肝炎血源疫苗系由无症状乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者血浆提取的HBsAg经纯化灭活及加佐剂吸附后制成。,狂犬疫苗,用于狂犬病的预防。狂犬病是致死率达
4、100的烈性传染病，及时、全程接种疫苗是预防此病的重要措施之一。目前我国应用的主要有国产普通浓缩疫苗、国产精制疫苗和法国进口“维尔博”疫苗三种，其中普通疫苗由于副反应过强、反应率较高而面临淘汰，而精制疫苗正逐步在我国得到推广，“维尔博”疫苗则是目前国内质量最好的一种，但价格略高。,甲肝疫苗,用于预防甲型肝炎。将对人无害，具有良好免疫原性的甲型肝炎病毒减毒株接种于人二倍体细胞，培养后经抽提和纯化溶于含氨基酸的盐平衡溶液，用于预防甲型病毒性肝炎。,新型疫苗,预防SARS疫苗预防禽流感疫苗预防甲型H1N1流感疫苗预防艾滋病疫苗,组合疫苗,疫苗作为抗原往往组合起来使用。最常用的组合是白喉-破伤风-百日
5、咳（DTP）；白喉-破伤风-百日咳-乙型肝炎（DTP-HepB）；五价疫苗：白喉-破伤风-百日咳-乙型肝炎-b型流感嗜血杆菌；麻疹-腮腺炎-风疹（MMR）,灭活的目的:破坏疫苗的毒力，但同时要减少疫苗免疫力的损失。 灭活方法:甲醛溶液，酚溶液，掌握好温度和时间。 疫苗的纯化： 去除存在的动物组织，降低疫苗接种后可能引起的不良反应。 冻干：疫苗一般只能在2-8保存12个月。 冻干:如冷冻干燥法等。,疫苗的处理,基因工程疫苗,基因工程疫苗：如基因工程乙型肝炎疫苗用于乙肝的预防。构建活疫苗：可将外源DNA插入载体，该载体能在宿主内复制，得到减毒疫苗。,例： 乙型肝炎表面抗原生产工艺,功能:乙型肝炎表
6、面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒表面包被的抗原（一种蛋白质），是乙肝疫苗的有效成分，预先注射可使人产生抗体，故可预防乙肝病毒的感染。,疫苗的接种方法,直接注射法：裸质粒DNA或经脂质体包裹的裸质粒DNA直接从肌肉，皮肉，皮下，黏膜，静脉内注射。包裹DNA的脂质体能与组织细胞发生膜融合，而将DNA摄入。减少核酸酶对DNA的破坏。基因枪轰击法：将质粒DNA包被在金微粒子表面，用基因枪将包被DNA的金微粒子高速穿入组织细胞。细菌或病毒携带法：选择一种容易进入 某组织器官的细菌或病毒，去除其繁殖基因，形成繁殖缺陷菌株，将质粒DNA转化到该细菌或病毒中，将重组的细菌或病毒转入到组织器官中。由于细菌或病
7、毒不能繁殖，细菌或病毒在体内裂解释放出DNA。,1.5.4 核酸疫苗的生产,抗体,抗体（antibody,Ab)是B细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。抗体和免疫球蛋白的关系: 抗体都是免疫球蛋白，并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性。,抗体的分类,根据生产方法和组成： 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体根据存在的位置： 分泌型Ig(sIg) 膜型Ig(mIg),单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）：
8、由一个B细胞克隆产生的、针对某一特定抗原决定簇的高度特异性抗体；多克隆抗体：多个抗原决定基机体多种抗体的混合物基因工程抗体:,人工制备的抗体,单抗制备步骤,抗原的制备；动物的选择；免疫：如脾内一次免疫（在脾内注入抗原，一定时间后，取脾细胞，单细胞）骨髓瘤细胞培养：融合；培养可分泌特异性抗体杂交瘤细胞的筛选：,人单克隆抗体制备难题,人-人杂交瘤技术：由于伦理学的问题，难于获得人的B淋巴细胞的获得是不允许的，且人的骨髓瘤细胞性能不好，技术上仍未突破；人-鼠杂交瘤技术：小鼠的骨髓瘤细胞和人的B淋巴细胞融合所获得的杂交瘤，可产生人的单克隆抗体。并可在体外长期产生。关键问题是这种杂交瘤在体外传代8周至6
9、个月后，停止分泌人的单克隆抗体。,多克隆抗体,用抗原免疫动物后所获得的免疫动物的血清均为多克隆抗体。通常一个抗原分子具有多个抗原决定簇，不同的抗原决定簇能刺激不同的B淋巴细胞而产生针对不同决定簇的抗体。这种由不同的B淋巴细胞克隆所产生的抗体称为多克隆抗体。,单克隆和多克隆抗体的比较和用途,特异性,敏感性,均一性,McAb,PcAb,低,差,无,高,强,有,1、用于免疫学检测，辅助临床诊断,2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原,3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等,4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。,应用：临床检测、抑制器官移植排斥、治疗自身免疫疾病、生物导弹等,谢谢!！,
