1、1,全国妇幼保健协会HCY重大课题介绍,杭州中翰盛泰生物技术有限公司温州 医 科大 学 附 属 第 一 医 院,（同型半胱氨酸检测的质量保证方案）,陈晓东,该项目背景品牌的优势生化与方法性能和特点质量保证措施,,2,一、项目的背景（一）,出生缺陷是我国政府亟待解决的 重大社会问题 出生死亡率在下降，但缺陷率在上升。 出生缺陷发生率大概在5.6%左右 每年新增90万，明显可见的25万 “人口与健康”目标：15亿，3%？ HCY和叶酸：1%的贡献？ 中国妇幼保健协会HCY课题的实施,3,项目的背景（二）已证实叶酸代谢与出生缺陷相关，和孕期、围产期合并症相关。但发生机理并不是叶酸缺乏，而是和血液中H
2、CY不能正常代谢。调查HCY相关影响因素，提出针对不同HCY水平和基因多态性妇女的围孕期叶酸增补模式并予以人群验证，建立起成体系的检测、干预、健康管理的标准和规范。步骤：张家港6（试点）50100家1000家 整省加入 覆盖全国,4,同型半胱氨酸具有胚胎毒性我国每隔40秒钟就会有一个缺陷儿出生出生缺陷病因复杂，机理未清，出生后干预有心无力孕期补充叶酸或含叶酸维生素复合剂可降低胎儿出生缺陷发生率,同型半胱氨酸妊娠与优生,5,高HCY血症对孕期的影响,近年发现，孕妇血浆中HCY水平升高可直接影响宫内胎儿生长发育，发生胎儿流产、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、新生儿出生缺陷以及一些妊娠相关疾病(如PI
3、H、胎盘早剥、胎盘血管疾病)，并可能与早产、低体重儿等密切相关。,6,目前已在CFDA注册产品,数据检索至国家食品药品监督局网站，截止2015年2月3日,二、中翰盛泰HCY品牌、性能优势,项目组为什么选用本公司HCY？ 来自国际知名品牌英国Axis-Shield,,8,JOINSTAR与英国Axis-Shield全面战略合作,,9,HCY循环酶法检测 专利使用现状,国内其它公司产品,雅培、罗氏、贝克曼的试剂（包括免疫法）都源自： Axis-Shield,HCY,AXIS-SHIELD HCY:专业专注20年,,10,实行双品牌、同品质战略,英国ASD公司原装进口,自产：专利许可，技术转让同工艺
4、，同原料，同标准 保证原装品质,,11,Jacobsen DW, Ed. Robinson K, Homocysteine and Vascular Disease, 2000, 15-39,带有巯基的一个氨基酸巯基有活性，可以进行氧化还原反应 不存在于饮食蛋白中从蛋氨酸中形成代谢依赖于叶酸和B族维生素,三、HCY的生化与检测方法,胱氨酸,,12,12,Du Vigneaud 1932 首次提出HcyMcCully1969 首次在基因紊乱的患者中提出血管组织病理学 ，叫高胱氨酸尿症，提示高Hcy可能引起早期血管疾病。 美国哈佛-1995WilckenCVD 患者Hcy水平升高 通过补充维生素来
5、纠正Boushey升高5mol/L ，在女性中的风险性增加80%，而男性60%,Kilmer McCully,Du Vigneaud,Homocysteine 的发现与应用,同型半胱氨酸的代谢,心脑血管疾病糖尿病肾病中风 老年、血管性痴呆，静脉栓塞 肿瘤,同型半胱氨酸升高相关疾病,妊娠并发症几率增加： 习惯性流产、 先兆子痫、 早产、 新生儿体重低 新生儿缺陷， 神经管缺陷,高压液相层析 + 电泳液相层析 + 质谱分析高压液相 + 荧光/紫外氨基酸分析仪毛细管电泳 + 激光诱导荧光测定酶免疫测定荧光偏振酶免疫测定双循环酶法,HCY测定的方法学演变,两种酶法原理比较,腺苷脱氨酶,1.五步反应；2
6、.共7种底物参与反应；3.反应需要NH3的参与。,方法（一）谷氨酸脱氢酶法,方法（二） 乳酸脱氢酶法,1.Axis-Shield公司专利；2.四步反应；3.共5种底物参与反应；4.无NH3参与。,（三）两种循环酶法-典型反应曲线,可测量区段少；可使用测试模式少；A1-A2变化值 321。,反应段接近直线，可使用测试模式多；A1-A2变化值 594；灵敏度高；线性可加大。,,19,溯源性：NIST SRM 1955,每盒产品中均包含校准液 与试剂一起注册 目前有很多国内厂家的 HCY试剂不含校准液,（一）校准品的溯源性,四、本HCY试剂的方法性能优势,1.1可溯源的参考物质-外部,有证参考物质：
7、美国国家标准与技术研究院SRM 1955(National Institute of Standards and Technology，NIST SRM 1955)三个浓度水平：Level 1: 3.980.18 mol/L Level 2: 8.850.60 mol/L Level 3: 17.71.1 mol/L用四种测量程序赋值LC/MS、GC/MS、 FPIA、LC-FD。,1.2 可溯源的参考物质-内部,工作校准品- Axis-Shield 六个浓度水平。 内部质控品（QC Panels） 来源于Axis-Shield，共17个。 产品校准品- 来源于Axis-Shield 两个浓度
8、（0mol/L,28mol/L） 质控品- 来源于Axis-Shield 三个浓度,1.3 产品的量值溯源,ASD: Axis-ShieldJS : JoinStar,,23,（二）适用性和稳定性,适用生化仪机型 （几乎所有） 上机稳定性：30天 校准稳定性：30天视生化机型不同而略有差别 对AU系列的建议,24,（三）有证质控品,英文名称：HCY Control Kit注册证号：国食药监械（进）字 2011第2402152号产品标准： YZB/UK 2144-2011生产厂家：英国Axis-Shield Diagnostics Ltd.规格：FHCY200CN： 低值：11.5ml 中值：1
9、1.5ml 高值：11.5ml,定值质控品也可溯源到： NIST SRM 1955,对质控品的应用建议,（四）本HCY试剂的方法性能,精密度（重复性）准确度1（比对试验）准确度2（抗干扰试验）分析灵敏度（LOB /LOD/ FS）线性范围（可报告范围）稳定性（上机、定标）,26,26,4.1精密度,Olympus AU400上建立的数据,4.2准确性用病人标本作方法比对,(来自省人民医院临床试验资料),4.3 准确性抗干扰,4.4 灵敏度,LOB0.5LOD0.7FS：样本浓度1.0左右CV约为2%,4.5 稀释线性,稀释线性：1-50 mol/L,4.6 稳定性,试剂储存稳定性：12个月；上
10、机稳定性：30天；校准曲线稳定性：30天；上述稳定性数据为日立7100数据， 仪器及使用环境不同略有偏差。,妇幼保健协会HCY课题准确实施（同型半胱氨酸检测的质量保证方案）,,32,五、如何保障：,,33,三个层面：保障结果准确性、一致性,网络信息贯穿,检验申请患者准备标本采集标本运送,,34,检验分析的全过程,分析前,分析中,分析后,标本处理标本分析质量控制报告结果,审核发放临床解释投诉建议信息反馈,各单位加强分析全过程质量控制,,35,35,1、质控图的定义,规范室内质控；Levey-Jennings 质控图,共二个水平,,36,36,建议：使用Westgard至少二个规则 （自己室内可用
11、-常规六规则）,若本批检验有一个质控结果超出（不包括正好在了2S限值线上的结果）2s限值线。表示本批结果可能有问题，符合12s规则。要检查一下。,（1） 12s 为警告规则，不是失控。,,37,常用（经典）多规则： （1） 12s （2） 13s （3） 22s （4） R4s （5） 41s （6） 10x,37,（2） 13s 即这个质控值不仅超出2s限值线（符合12s规则），而且还超出了3s限值（符合13s规则）。这是在检验中很少发生的（0.3%），是一个失控规则。,,38,医院端-室内质控数据上传及室内质控分析,室内质控数据上传,室内质控图,详细的室内质控数据,,39,项目组-专家进行室间质控分析,一个质控品的所有医院的室间质控值分布,室间质控结果详细列表,分析每个质控品及批号,,40,总流程图,公司地址：浙江省杭州市余杭区钱江经济开发区兴国路519号杭州联络处：浙江省杭州市莫干山路188-200号，之江饭店6号楼2楼,总机号码：0571-89028388传真号码：0571-89028080,邮箱： 网址：,41,
