1、第十九章中药及其制剂分析概论,Analysis of Chinese Medicine Preparation,学习要点,掌握 中药及其制剂的质量标准，中药分析常用的方法和技术，中药样品的主要制备方法。熟悉 各类中药及其制剂的质量分析要点。了解 中药的特色和中药分析的特点。,第一节 概 述,中医典籍战国黄帝内经、汉伤寒杂病论、汉肘后备急方、宋惠民局药方中药典籍唐本草、本草纲目中药制剂汤、丸、散、膏、丹、酒剂、酊剂等近40种,中药（tradional chinese medines）,定义：在中医理论指导下，用于预防、治疗、诊断疾病并具有康复和保健作用的物质。 以中医药学理论指导其临床使用的中国
2、传统药物，用中医药学理论体系的术语表达其性味（四气五味）、功效和使用规律（归经）。,中药（tradional chinese medines）,麦冬 【性味与归经】甘、微苦，微寒。归心、肺、胃经。【功能与主治】养阴生津，润肺清心。用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘，咽白喉。 五味子 【性味归经】：温；酸、甘；归肺、心、肾经 【功能与主治】收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠。,中药制剂(TCM preparation),中成药(Chinese patent medicine)根据
3、药典、制剂规范和其他规定的处方，将中药的原料药物加工制成具有一定规格，可以直接用于防病、治病的药品。中药制剂中的一些药品经过药品监督局审批，在市场上允许出售，可以通过医生诊断给患者使用，也可由患者根据经验与常识直接使用的中药制剂产品。,君臣佐使,2010年版中国药典,一部收载2165种，包括中药材1102种、中药制剂1063种HPLC用于含量测定587种GC用于含量测定16种,中药现代化(modernization of TCM)研制开发“安全有效、稳定可控”的现代中药“中药现代化科技产业行动计划”“八六三”计划“十一五”计划,中药制剂分析(analysis of TCM) 以中医理论为指导，
4、运用现代分析理论和方法研究中药制剂质量的一门应用学科。是祖国医药学宝库的重要组成部分。 如何确定中药及其制剂质量评价的指标是关键问题,一、中药及其制剂分析的特点,中药及其制剂分析的特点,中药作用的物质基础是其中的化学成分；中药及其制剂所含的化学成分复杂，难以确定有效成分。按中医理论和用药原则组方：根据药味的“君、臣、佐、使”，首选主药、贵重药、毒剧药；指标成分：有效成分、毒性成分和特征成分。,含量的影响因素多原药材（生长环境、采收时间、贮藏条件）需经检验； 炮制工艺影响；贮藏条件；,4.分析方法特点,预处理（提取、纯化和浓缩）；测定方法要专属性强、灵敏度高、分离效率高；方法要简便；必须有中医药
5、理论指导；运用当代先进的科学技术，逐步探明其作用机理，寻找评价和控制其质量的新方法、新途径，为人类健康事业作出更大的贡献，使中药走向国际。,5.中药化学分类,生物碱苷类：强心苷、皂苷萜类：川楝素黄酮类香豆素类挥发油：薄荷油、樟脑油醌类：紫草素,甾体：麦角甾醇、豆甾醇、胆甾醇有机酸类：绿原酸、咖啡酸鞣质多糖 氨基酸 使君子氨酸、南瓜子氨酸蛋白质和酶,二、中药制剂的分类,（一）液体制剂合剂与口服液 合剂系指药材用水或其他溶剂提取，提取液经浓缩制成的内服液体制剂。单剂量包装的合剂称口服液。酊剂和酒剂 酒剂是指药材用蒸馏酒浸提制成的澄清液体制剂；酊剂是指药物用规定浓度的乙醇浸出或溶解而制成的澄清液体制
6、剂。,（二）半固体制剂,煎膏剂 又称膏滋，是指药材用水煎煮，去渣浓缩后，加炼蜜或糖制成的半流体制剂，有的煎膏剂还可加入药材细粉，搅拌混匀后制得。流浸膏剂 指用适宜的溶剂浸出药材中的有效成分，蒸去部分溶剂，调整浓度至规定标准而制成的制剂，1g/1ml，乙醇为防腐剂。浸膏剂 是指用适宜的溶剂浸出药材中有效成分后，蒸去全部溶剂，浓缩成稠膏状或块、粉状的浸出制剂，25g/g，多数为原料。,（三）固体制剂,丸剂 是指药材粉末或药材提取物加适宜的粘合剂或辅料制成的球形或类球形的制剂。根据粘合剂和制备方法不同分为蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、浓缩丸和微丸等。散剂 多种药材混合制成的粉末状制剂，分内服和外用2种。
7、颗粒剂 又称冲剂是指适宜的辅料与药材提取物或与药材细粉制成的颗粒状制剂。片剂 是指药材细粉或浸膏加辅料压制而成的片状制剂。,5、胶囊剂 分硬胶囊、软胶囊和肠溶胶囊。硬胶囊 将一定量的药材提取物加药粉或辅料制成粉末或颗粒，填充于空心胶囊中制成，或将药材粉末直接装于空心胶囊中制成。软胶囊 将一定量的药材提取物加适宜的辅料密封于球形或其他形状的软质囊材中，用压制法制备，软质囊材用明胶、甘油或其他药用材料制成。肠溶胶囊是指胶囊经高分子材料处理或其他方法加工后，其囊壳在胃中不溶，在肠中才能崩解的胶囊。,（一）取样与样品保存,科学性、真实性、代表性，均匀、合理药材：一般从包装的四角和中间五处取样，袋装可从
8、中间直接插入，桶装可在桶中央取样，深度可达1/32/3处。数量至少3次检验用量，贵重药可酌情取样。,三、中药分析供试品溶液的制备,（一）取 样,粉状中药制剂：一般取样100g。液体中药制剂：一般取样200ml，同时，须注意容器底部是否有沉渣，如有应彻底摇匀，均匀取样。,固体中成药：一般片剂取量200片，未成片前已制成颗粒可取100g。丸剂一般取10丸，胶囊按药典规定取样不得少于20个胶囊。,注射液：取样要经过两次，配制后在灌注、熔封、灭菌前进行一次取样，经灭菌后的注射液须按原方法进行，分析检验合格后方可供药用。已封好的安瓿取样量一般为200支。,（二）供试品溶液的制备,提取方法 萃取法 冷浸法
9、 回流提取法 连续回流提取法 水蒸气蒸馏法 超声提取法 先放置一定时间 超临界流体萃取,纯化方法 萃取 柱色谱法 硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂等。,第二节 中药的鉴别,取样鉴别检查含量测定,鉴别,性状鉴别法显微鉴别 粉末药材的特征鉴别理化鉴别色谱鉴别 纸色谱、薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱,第三节 中药的检查项目与内容,中药的安全问题：重金属、有害元素一、杂质检查法性状或部位与规定不符有机、无机杂质，沙石、泥土,二、水分测定法1、烘干法：适用于不含挥发性成分的药品。,烘干法水分测定仪,2、甲苯法：适用于含挥发性成分的药品.,甲苯法装置,3、减压干燥法：适用于含挥发性成分的贵重药品。4、GC法,
10、三、总灰分和酸不溶性灰分的测定,炽灼残渣药材检查，而中药制剂很少检查,四、重金属及有害元素的测定,重金属检查法样品前处理检查Pb：二硫腙法 原子吸收光谱法,五、农药残留量测定,法,农药灭幼脲的测定,六、有关杂质的检查,根据中药的特殊毒性物质制定检查项目,七、其他,黄曲霉素测定法HPLC法,第四节 中药及制剂中成分的含量测定,一、中药及制剂中化学成分的含量测定,1、选用君药及贵重药建立含量测定方法， 如有毒药也应建立含量测定项目，若含量太低无法测定，则应在检查项下规定限度检查项目；若上述药物基础研究薄弱或无法进行含量测定的，也可依次选臣药及其他药味测定含量；2、有效成分或指标成分清楚的， 可以测
11、定有效成分或指标成分；3、成分类别清楚的， 可测定某一类总成分的含量,4、所测成分应归属于某单一药味：如处方中有黄连和黄柏，最好不用小檗碱作为定量成分；5、检测成分应尽量于中医用药的功能主治相近；6、若确实无法进行含量测定的，可选适当溶剂测定浸出物的含量。,（二）中药及制剂化学成分定量方法,HPLCGCTLC-扫描法,1、高效液相色谱法,桂枝茯苓丸中桂枝为君药，采用高效液相色谱法测定其中桂皮酸的含量。供试品的制备：精密称取本品细粉约1g，置50ml量瓶中，加50%甲醇40ml，超声震荡提取30min，放冷，加50%至刻度，离心10min（1200r/min），上清液过0.45m滤膜，取续滤液备
12、用。对照品溶液的制备：精密称取桂皮酸对照品适量，50%甲醇配成0.01mg /ml的溶液。色谱条件：Inersil 5ODS-柱（25cm4.6mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（29：71）；检测波长285nm；流速1.0ml/min。用外标法测定其含量。,2、分光光度法,特点：灵敏、简便，但专一性不强，需提取纯化等前处理，同时用阴性对照品在相同的条件下测定，应无紫外吸收。 中国药典主要用于几个最大吸收波长较高（300nm）以上，吸收较强的组分的含量测定。小檗碱、芦丁、黄芩甙、丹皮酚等。,示例 左金丸中小檗碱的含量测定。黄连为本方的君药，小檗碱为主要有效成分，故测定其含量。,取本品细粉约1g
13、，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1：100）适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液移至50ml容量瓶中，加盐酸-甲醇（1：100）稀释至刻度，摇匀。精密量取5.0ml，置已处理好的氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用乙醇30ml预洗）上，用乙醇25ml洗脱，收集洗脱液至50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。照分光光度法，在345nm的波长处测定吸收度，按盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）的吸收系数为728计算，即得。本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得小于6.0%。,3、薄层扫描法,薄层扫描法是用一定波长的光照射在薄层板
14、上，对薄层色谱有紫外光和可见光吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。薄层扫描法具有分离效能高、快速、简便等特点 。,薄层色谱条件：原则组分应完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾。 检测方法：吸收测定法和荧光测定法两种。 测量方法：有反射法和透射法两种。 扫描方式：有单波长和双波长两种。,（5）测定方法的选择,外标法：若标准曲线经过原点，可用一点法校正，如不通过原点，宜采用二点法校正，必要时用多点校正法。测定时，供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不少于4个，对照品每一浓度不少于2个。 内标法：内标法是将
15、内标加入供试品溶液和对照品溶液中以其峰面积的比值作为定量依据。目前应用较少。 注意事项 影响因素较多，测定时应注意以下几点： 薄层厚度应均匀，表面应平整，最好使用预制板； 点样应准确，原点大小应一致； 喷洒显色剂应均匀，量适中；并用胶布加以固定。,（6）注意事项,影响因素较多，测定时应注意以下几点： 薄层厚度应均匀，表面应平整，最好使用预制板； 点样应准确，原点大小应一致； 喷洒显色剂应均匀，量适中；并用胶布加以固定。,脑得生丸中人参皂甙的含量测定。,精密称取供试品2g，置索氏提取器中先用乙醚脱脂，再用甲醇连续回流提取人参皂甙，挥去甲醇，残渣加水溶解后，用正丁醇提取纯化，正丁醇减压回收后，残渣
16、加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取人参皂甙Rg1对照品，加甲醇制成0.5mgml的对照液。吸取供试品溶液24l，对照品溶液2l和4l分别交叉点于高效硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）510放置12h的下层液为展开剂，展开，取出晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，110加热至斑点颜色清晰，取出，在薄层板上盖同样大小的玻璃板，用胶布固定，照薄层扫描法测定，波长：S = 525nm，R = 700nm，测定供试品和对照品吸收度积分值，计算即得。,（三）多指标成分的测定法,（四）中药一测多评的定量方法,二、中药及制剂质量的整体控制和中药指纹图谱,Traditional Chi
17、nese Medicine Fingerprint-指药材、饮片、提取物或中药制剂等经适当处理后，采取一定的分析技术和方法得到的能够标示其化学的、生物学的或其他特性的图谱。,显著特点：一是通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保产品质量的相对一致。,中药指纹图谱借用DNA指纹图谱发展而来，最先发展起来的是中药色谱指纹图谱。中药色谱指纹图谱是一种综合的，可量化的色谱鉴定手段2。借以鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量均一性和稳定性。其基本属性是“整体性”和“模糊性”。,整体性 对照指纹图谱的建与评价应注意指纹特
18、征的整体性。 一个品种的对照指纹图谱是由各个具有指纹意义的峰组成的完整图谱构成的，各个有指纹意义的峰（或薄层色谱的斑点）其位置（保留时间或比移值）、大小或高你（积分面积或峰高）、各峰之间相对的比例是指纹图谱的综合参数，建立和评价时从整体的角度综合考虑，注意各有指纹意义的峰相互的依存关系。 中药色谱指纹图谱在一定程度上与临床疗效的稳定性及用药安全性方面有相关性，因此对照指纹图谱中所有色谱峰在样品指纹图谱中均应体现且可追溯。只有在对照指纹图谱中所有色谱峰的稳定体现，才是保证产品真正稳定可控的前提。为保证色谱指纹图谱在整体上相似，在建立对照指纹图谱时： 应尽可能包含所有具有指纹意义的特征峰，尤其是含
19、量少面指纹意义显著的色谱峰、指纹特征区、共有特征区； 排除溶剂峰及其他可以追溯的杂质峰，供试品的制备应与工业生产相似，并尽可能采用流动相来溶解。 通过比较指纹图谱在整体上的相似，楞以判断出样品的真实性.,模糊性 在实际过程中由于受到各种因素的影响，样品指纹图谱中有可能出现个别色谱峰的增加/减少，色谱峰图谱行为可能发生改变，如峰形、峰宽、峰高发生变化及保留时间发生偏移等，不可机械性地通过色谱图的叠加来评价反指纹色谱图和相似。 增加/减少的色谱峰对指纹图谱整体相似的贡献，不是单纯性的降低，有可能出现相互消长的现象。对于难以把握的色谱峰，建议由软件去进行判别评价，尽可能避免人为判别评价。,指纹图谱评
20、价方法,指纹图谱相似性的评价从两个方面考虑： （1） 色谱的整体“面貌”，即有指纹意义的峰的数目、峰的位置和顺序、各峰之间的大致比例（薄层色谱还有斑点的颜色）等是否相似，以判断样品的真实性。 （2） 以样品与对照样品或“标准图谱”之间或不同批次样品指纹图谱之间总积分值作量化比较。如总积分面积相差较大（如+20%），则说明同样量的样品含有的内在物质上有明显差异，这种差异是否允许，应视具体品种、具体工艺的实际情况，并结合含量测定项目综合判断。 能比较应在同一台仪器平行进行测定，评价的结果可能陈致误判或不同评价者得到不同的评价结果，建议通过计算机辅助指纹图谱相似度评价软件来进行。,评价指标 采用相似
21、度作为指纹图谱评价的指标。引用变量 根据中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）之规定，与中药指纹图谱有关的技术参数如下：保留时间（RT）；峰高（height）；峰面积（area）；峰面积比（A%）；相对保留时间（RRT）；积分面积相对比值（RA）。 相对保留时间（RRT）和积分面积相对比值（RA）是中药指纹图谱的两个核心参数，可作为指纹相似度评价的重要变量。 参照国外实验室的做法，现选择积分面积相对比值（RA）作为计算指纹图谱相似度的变量。,中药质量标准的研究,唯有质量标准伴随产品“终身” 在药典标准工作管理办法总则中规定：对象和过程 制定标准必须坚持质量第一，充分体现“安全有效、技术先进，
22、经济合理”的原则，择优发展的作用 凡正式批准的药品都要制定标准。,分类 2级标准法定和企业质量标准的特性药品具有安全性、有效性、稳定性及可控性。权威性、科学性、进展性 质量标准制定的前提处方组成固定；原料稳定；制备工艺稳定。,五、中药制剂标准内容,名称 (汉语、拼音、拉丁) 组方 制法 性状 鉴别 检查 含量测定,方法学的考察,提取条件的选定 分离纯化 测定条件的选择 空白试验 标准曲线的制备 测定方法的稳定性试验（间隔一定时间测定） 精密度试验,重复性试验 灵敏度及检测限 回收率试验 加样回收 1：1 成药空白（除去欲测药材后的成药） 成药空白（加已知被测药材测定回收率）误差较大 回收率至少需要进行5次试验（n=5），或三组平行试验（n=9）,1.中药制剂分析的一般程序为（ ）,A 取样鉴别检查含量测定写出检验报告B 检查取样鉴别含量测定写出检验报告C 鉴别检查取样含量测定写出检验报告D 检查取样含量测定鉴别写出检验报告,A,习题,2.中药制剂分析常用的提取方法有 、 、 、 、 、 。,萃取法,冷浸法,回流提取法,水蒸气蒸馏法,超声提取法,超临界流体萃取法,3.中药制剂中杂质的一般检查项目有 、 、 、 、 等。,水分检查,总灰分和酸不溶性成分,重金属,残留农药,
