1、生物化学和分子生物学课程实验教学大纲课 程 名 称：生物化学与分子生物学实验技术 英 文 名 称：Experiment Technology of Biochemistry and Molecular Biology课 程 编 号： 实 验 课 性 质：必修课 程 负 责 人：崔 行 开放实验项目数：3一、学时、学分课程总学时：70 课程总学分：2.0 二、适用专业及年级本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。三、实验教学目的与基本要求掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。掌握各种生物物质能量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握基本的生
2、物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、蛋白质及分子生物学等技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。掌握紫外可见分光光度计、高速离心机、PCR 仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。四、主要仪器设备紫外可见分光光度计、高速离心机、PCR 仪、层析系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。五、实验课程内容和学时分配序号实验项目名 称 实 验 内 容学时分配实验属性实验类型每组人数实验要求指导
3、教师已开/未开1 1可见分光光度技术2蛋白质含量测定1掌握朗伯-比尔定律。2掌握比色定量分析标准曲线的制备。3.熟悉可见分光光度计的使用。5 设计 基础 2 必做 已开2 紫外分光光度法测定蛋白质含量掌握紫外分光光度计的使用方法2 综合 基础 2 必做 已开3 层析技术，蛋白质的分离纯化与鉴定1.熟悉层析技术的原理、分类及应用范围。2.掌握凝胶层析的基本原理、特点和应用。用SephadexG25 脱盐法和用离子交换剂进行蛋白质的纯化。3.学习盐析的方法，用醋酸纤维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。7 设计 基础 2 必做 已开4 离心技术，核酸的分离纯化及含量测定1熟悉离心技术的基本原理。掌握离心
4、力及其作用。掌握常用离心机使用方法和注意事项。2.学习核酸的分离及生物学特性，了解 RNA、DNA 的提取和含量测定方法。7 综合 基础 2 必做 已开5 酶的提取及比活性测定1掌握酶提取纯化的方法和技术以及应注意的问题。2.了解测定碱性磷酸酶活性的原理和方法。3.掌握紫外分光光度计的使用方法。4.了解蛋白质测定在医学中的应用。7 综合 基础 2 必做 已开6 底物浓度对酶促反应速度的影响本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据 Lineweaver-Burk 法作图，计算其 Km 值。2 验证 基础 2 必做 已开7 pH 对酶促反应速度的影响本实验以磷酸苯二钠为底物，在不
5、同 pH 值的甘氨酸缓冲液条件下，测定碱性磷酸酶的活性，从而确定其最适 pH 值。2 验证 基础 2 必做 已开8 温度对酶促反应速度的影响本实验以碱性磷酸酶为例，在不同温度下保温一定时间，观察酶活性的差别。2 验证 基础 2 必做 已开9 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血 LDH同工酶掌握电泳分离同工酶的方法并了解其原理，了解显色原理，了解血清乳酸脱氢酶同工酶电泳分离的临床意义。5 综合 基础 2 必做 已开10 胰岛素对血糖含量的影响及测定1熟悉激素对血糖含量的影响因素。2.学习邻甲苯法测定血糖的原理，了解测定血糖的方法。1.5 综合 基础 2 必做 已开11 糖酵解中间产物的鉴定1复习糖酵解的主
6、要中间步骤及其产物，2.了解一碘醋酸对 3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用。1.5 验证 基础 2 必做 已开12 氨基转换作用 GPT 测定掌握血清谷丙转氨酶活性测定的方法及临床意义1 验证 基础 2 必做 已开13 血清尿素氮测定学习尿素测定的方法。1 验证 基础 2 必做 已开14 血清脂类薄层层析1学习脂类薄层层析法的具体操作。2了解薄层层析在脂类成份分析及脂代谢研究中的用途。1 综合 基础 2 必做 已开15 电泳技术，血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳1熟悉电泳技术的基本原理。2.掌握影响电泳的因素(介质、缓冲溶液、电场强度、电渗等)。3.掌握电泳技术的应用，了解电泳的分类。4.掌握正常人血浆脂
7、蛋白的分类。1.5 综合 基础 2 必做 已开16 1分子生物学技术。2.感受态的转化和鉴定1.掌握 DNA 提取、转染、PCR、核酸杂交、DNA 重组等生物学技术和方法。2.掌握感受态的转化和鉴定。7 综合 基础 2 必做 开部分17 质粒的提取及鉴定掌握质粒的提取及电泳鉴定的方法7 综合 基础 2 必做 开部分18 酶切及酶切鉴定掌握限制性内切酶的特点及应用。7 综合 基础 2 必做 开19 DNA 的回收及重组鉴定学习 DNA 的回收方法及重组子的连接技术.7 综合 基础 2 必做 开部分20 SDS-PAGE测定蛋白质分子量在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂 SDS 测定蛋白质的相对分
8、子量。7 综合 基础 2 必做 已开21 等电聚焦测测定蛋白质等电点根据蛋白质在不同 pH 环境中所带净电荷等于零时，将蛋白质分离。7 综合 基础 2 必做 未开22 脂蛋白的分离和提纯用不同沉淀剂或不同浓度的沉淀剂将脂蛋白分开，分别测定各类脂蛋白。5 综合 基础 2 选做 未开23 PCR 扩增技术对提取的基因组DNA 进行随机引物 PCR 扩增，再观察扩增的结果。6 研究 基础 2 选做 未开24 Western 印迹 应用 Western 印迹技术，分析经SDS-PAGE 电泳分离并转移到硝酸纤维素薄膜上的特定蛋白质成分。7 综合 基础 2 选做 未开25 组织和细胞总 RNA 提取学习 RNA 的制备，分析并了解基因表达在转录水平上的调节机制。7 研究 基础 2 选做 未开26 鸡卵黏蛋白的分离纯化学习离子交换层析的基本原理、过程及树脂的应用。10 研究 基础 2 选做 未开
