1、HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 1 -2018 年高考生物实验归纳汇总实验一：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质一、实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握 NaOH 溶液和 CuSO4 溶液的使用方法。二、实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做
2、还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的 Cu 2O 沉淀。如：葡萄糖 + 2Cu 2+ + 4OH 加热 葡萄糖酸 + Cu 2O（砖红色）+ H 2O即 Cu 2+被还原成 Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色棕色砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上
3、，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红 O 等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37-60）对组织切片染色效果是有好处的。 HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 2 -脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和
4、阿拉伯糖胶等。脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的 Cu2+作用，产生紫色反应。）三、实验材料：1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡 34小时（也可用蓖麻种子）。3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质
5、的黄豆或鸡蛋清。4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜五、实验试剂：HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 3 -1斐林试剂（包括甲液：质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和乙液：质量浓度为 0.05g/ mL CuSO4溶液）2苏丹或苏丹染液3双缩脲试剂（包括 A 液：质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和 B 液：质量浓度为 0.01g/ mL CuSO4溶液）4体积分数为 50%的酒精溶液5碘液6蒸馏水六、方法步骤
6、：一、可溶性糖的鉴定操 作 方 法 注 意 问 题 解 释1. 制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2. 取 1 支试管，向试管内注入 2mL 组织样液。3. 向试管内注入 1mL 新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的 Cu( OH ) 2在 70 900C 下分解成黑色 CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无 CuO
7、H 生成。4. 试管放在盛有 50-650C 温水的大烧杯中，加热约 2 分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 棕色 砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；缩短实验时间。二、脂肪的鉴定操 作 方 法 注 意 问 题 解 释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的干种子要浸泡 34 小时，新花生的浸泡时因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 4 -水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。间可缩短。 形。切片要尽
8、可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴 23 滴苏丹或苏丹染液，染色 1 分钟。染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上 12 滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。三、蛋白质的鉴定操 作 方 法 注 意 问 题 解 释制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过滤。）黄豆浸泡 1 至
9、2 天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约 2ml 于试管中，加入双缩脲试剂 A，摇匀；再加入双缩脲试剂B 液 34 滴，摇匀，溶液变紫色。A 液和 B 液也要分开配制，储存。鉴定时先加 A 液后加 B 液。CuSO4溶液不能多加。先加 NaOH 溶液，为 Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B 液混装或同时加入，会导致 Cu2+变成 Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。否则 CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。 蛋清要先稀释。 如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净
10、。附：淀粉的检测和观察用试管取 2ml 待测组织样液，向试管内滴加 2 滴碘液，观察颜色变化。碘液不要滴太多 以免影响颜色观察HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 5 -七、考点提示：1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ .2、还原性糖植物组织取材条件？ .3、研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ .4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ .5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ .6、花生种子切片为何要薄？ .7、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ .8、脂肪鉴定中乙醇作用？
11、.9、双缩脲试剂 A、B 两液是否混合后用？先加 A 液的目的怎样通过对比看颜色变化？.1、答：葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 2、答：含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 3、答：加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 4、答：混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 5、答：浅蓝色 棕色 砖红色。HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 6 -6、答：只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 7、答：切片的厚薄不均匀。 8、答：洗去浮色。 9
12、、答：不能混合；先加 A 液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。实验二：使用高倍显微镜观察几种细胞一、实验目的：1、学会如何使用显微镜观察细胞；2、了解细胞的结构；3、学会制作临时装片。二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片三、实验用具： 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）四、方法步骤：1、制作松针的临时切片：（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不
13、动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。2、观察切片：（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。 （3）使用 5X 物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成 10X 物镜，观察松针叶面横切结构。（4）换成 40X 物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）4、 动物神经细胞永久装片的观察。五、考点提示：1、松针
14、的叶面结构是什么样的？.HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 7 -2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？.3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？.4、如何调节焦距？.5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。.问（1）是低倍镜还是高倍镜的视野大，视野明亮？为什么？提示：低倍镜的视野大，通过的光多，放大的倍数小；高倍镜视野小，通过的光少，但放大的倍 数高。（2）为什么要先用低倍镜观察清楚后，把要放大观察的物像移至视野的中央，再换高倍镜观察？提示：如果直接用高倍镜观察，往往由于观察的对象不在视野范围内而找不到。因此，
15、需要先用 低倍镜观察清楚，并把要放大观察的物像移至视野的中央，再换高倍镜观察。（3）用转换器转过高倍镜后，转动粗准焦螺旋行不行？提示：不行。用高倍镜观察，只需微调即可。转动粗准焦螺旋，容易压坏玻片。第四步：观察并用细胞准焦螺旋调焦。六：讨论：1 使用高倍镜观察的步骤和要点是什么？答：（1） .（2） .2 试归纳所观察到的细胞在结构上的共同点，并描述它们之间的差异，分析产生差异的可能的原因： 答： .3、P8 图是一个大肠杆菌的电镜照片和结构模式图，大肠杆菌与你在本实验中观察到的细胞有什么主要区别？答： .1 答：（1）首先用低倍镜观察，找到要观察的物像，移到视野的中央。（2）转动转换器，用高
16、倍镜观察，并轻轻转动细准焦螺旋，直到看清楚材料为止。HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 8 -2 答：这些细胞在结构上的共同点是：有细胞膜、细胞质和细胞核，植物细胞还有细胞壁。各种细胞之间的差异和产生差异的可能原因是：这些细胞的位置和功能不同，其结构与功能相适应，这是个体发育过程中细胞分化产生的差异。3、答：从模式图中可以看出，大肠杆菌没有明显的细胞核，没有核膜，细胞外有鞭毛，等等。实验三：观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布一、实验原理：1、真核细胞的 DNA 主要分布在细胞核内，RNA 主要分布在细胞质中。2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA 和 RNA 的亲和力
17、不同，甲基绿对 DNA 亲和力强，使DNA 显现出绿色，而吡罗红对 RNA 的亲和力强，使 RNA 呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。3、盐酸的作用 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输； 盐酸使染色体中的 DNA 与蛋白质分离，便于 DNA 与染色剂的结合二、实验材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞三、实验用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜四、方法步骤：1、取材 滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液； 刮：用消毒牙签在
18、口腔内侧壁上轻轻地刮几下； 涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中； 烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。2、水解 解：将烘干的载玻片放入装有 30ml 质量分数为 8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解； 保：将小烧杯放入装有 30温水的大烧杯中保温 5 分钟。3、冲洗涂片 冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片 10 秒钟； 吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。4、染色 染：用 2 滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色 5 分钟；HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 9 - 吸：吸去多余染色剂； 盖：盖上盖玻片。5、观察 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的
19、区域，移至视野中央，将物像调节清晰； 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。结论：真核细胞的 DNA 主要分布在细胞核中；RNA 主要分布在细胞质中拓展：用大肠杆菌代替人的口腔上皮细胞作为实验材料，请你依据所学内容，预期现象和实验结论分别是怎样的？细胞拟核区域呈现绿色；细胞质区域呈现红色。原核细胞的 DNA 主要分布在拟核中；RNA 主要分布在细胞质中。五、考点提示：1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只
20、集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却 1 分钟。HSABNU 北京师范大学附属中学 高中生物 总复习- 10 -实验四：体验制备细胞膜的方法一、实验原理：细胞膜的流动性和半透性二、实验材料：猪（或牛、羊、人）的新鲜的红细胞稀释液（血液加适量的生理盐水）三、实验用具：蒸馏水、试管、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜四、方法步骤：1、用试管吸取少量红细胞稀释液，滴一小滴在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片2、在高倍镜下观察，待观察清晰时，在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸小心吸引，注意不要把细胞吸跑。上述操作均在载物台上进行，并持续观察细胞的变化。可以看到近水的部分红细胞发生变化；凹陷消失，细胞体积增大，很快细胞破裂，内容物流出。五、考点提示：1、选择动物细胞进行实验的原因：.2、选择哺乳动物成熟红细胞进行实验的原因：.3、细胞破裂后，用什么方法获得较纯的细胞膜：.4、如何获得植物细胞膜：.5、稀释及稀释的时候用生理盐水的原因：.答案1、动物细胞无细胞壁。2、人和其他哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多的细胞器（膜），可以得到较纯净的细胞膜。
