1、萃取分离-双硫腙光度法测定粉质化妆品中微量铅,主讲人：郑芷昕生化设计性实验小组成员：郑芷昕，陈雪静，李庆福,铅(Pb)的危害,中枢神经系统中，大脑皮层和小脑是铅毒性作用的主要靶组织；而在周围神经系统中，运动神经轴突则是铅毒害的主要靶组织。其中铅对神经系统的毒害主要表现为以下4种：（1）使铅中毒者的心理发生变化，例如成人铅中毒后会出现忧郁、烦躁、性格改变等症状，而儿童则表现为多动。（2）铅中毒会导致智力下降，尤其是儿童会出现学习障碍，据报道高铅儿童的IQ值平均比低铅儿童低46分。（3）铅中毒会导致感觉功能障碍，例如很多铅中毒病人时会出现视觉功能障碍：视网膜水肿、球后视神经炎、盲点、眼外展肌麻痹、
2、视神经萎缩、眼球运动障碍、瞳孔调节异常、弱视或视野改变；或嗅觉、味觉障碍等。（4）铅对周围神经系统的主要影响是降低运动功能和神经传导速度，肌肉损害是严重铅中毒的典型证明之一。 铅对血液系统的主要作用表现在2个方面，一是抑制血红蛋白的合成，二是缩短循环中的红细胞寿命，这些影响，最终会导致贫血。 铅对心血管系统的伤害主要表现在：（1）心血管病死亡率与动脉中铅过量密切相关，心血管病患者血铅和24小时尿铅水平明显高于非心血管病患者。（2）铅暴露能引起高血压。（3）铅暴露能引起心脏病变和心脏功能变化。 骨骼是铅毒性的重要靶器官系统，铅一方面通过损伤内分泌器官而间接影响骨功能和骨矿物代谢的调节能力，另一方
3、面通过毒化细胞、干扰基本细胞过程和酶功能、改变成骨细胞破骨细胞耦联关系并影响钙使系统从而直接干扰骨细胞的功能。,我国化妆品卫生规范对于重金属含量限定规范要求铅Pb含量40mg/kg,铅的检测方法:原子吸收分光光度法：选择性好、灵敏度 高、 简便、快速，但仪器昂贵。比色法：设备简单、价廉，灵敏度可满足 要求。极谱法和荧光分光光度法。,原子吸收光度法,原子吸收光谱法，指的是利用气态原子可以吸收一定波长的光辐射，使原子中外层的电子从基态跃迁到激发态的现象而建立的。由于各种原子中电子的能级不同，将有选择性地共振吸收一定波长的辐射光，这个共振吸收波长恰好等于该原子受激发后发射光谱的波长，由此可作为元素定
4、性的依据，而吸收辐射的强度可作为定量的依据。AAS现已成为无机元素定量分析应用最广泛的一种分析方法。,双硫腙比色法,测定铅含量的方法之一。样品经消化后，在pH8.5-9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。,实验目的：,1、掌握样品处理方法2、比较两种实验方法测定铅含量的优缺点。3、通过标准曲线的制作粗略测量化妆品中铅含量4、根据结果比较不同化妆品中铅含量多少，提出相应建议,实验原理：,。,样品经消化后，在pH8.5-9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺
5、等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。,双硫腙（绿色）,Pb -双硫腙螯合物（淡红色）,反应式,有机相在max=510nm测A，求Pb含量。,主要仪器与试剂,仪器：721分光光度计，分流漏斗， 铁架台，铁圈,试剂：Pb标准溶液 100.0ug/L； 双硫腙-CCl4溶液 0.04g/L； 20柠檬酸铵溶液； 20盐酸羟胺溶液 ；酚红指示液 HNO3 （20%）；氨水（1:1）；10氰化钾溶液 Pb未知试液。,试剂的具体配制方法,l、1：1氨水；2、酚红指示液：0.1乙醇溶液。 3、20盐酸羟胺溶液：称取20克盐酸羟胺，加水溶解至约50ml，加2滴酚红指示液，加1：1氨水，调PH至8
6、.5-9.0(由黄变红，再多加2滴)用双硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去再用三氯甲烷洗二次，弃去三氯甲烷层，水层加6N盐酸呈酸性，加水至100毫升。 4、20柠檬酸铵溶液：同理 5、10氰化钾溶液；6、三氯甲烷；不应含氧化物。处理方法：于三氯甲烷中加人工110-120体积的20硫酸钠溶液洗涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的l10馏出液，收集中间馏出液备用。7、20硝酸：量取1ml硝酸，加水稀释至100ml。8、双硫腙溶液：0.5三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。9、双硫腙使用液：吸取1.Oml双硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml，混匀
7、。用：1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)下式用算出配制100m1双硫腙使用液(70透光率)所需双硫腙溶液的毫升数(N)。V =(10(2-lg70)/A=1.55/A10、铅标准溶液：精密称取0.1598克硝酸铅，加10ml1硝酸，全部溶解后，移入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于lml铅。11、铅标准使用液：吸取1.0ml铅标准溶液，置于100毫升容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10mg铅。,12.化妆品铅试样的配制（湿化法）吸取10.Oml化妆品液体样品)，置于250ml定氮瓶中，加数粒玻璃珠，lOml硝酸，放置片刻，小火加热
8、、待作用缓和，放冷，沿瓶壁加入1硝酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断沿瓶壁滴加硝酸有机质分解完全。加热火力，至产生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色，放冷。在操作过程中应注意防止爆炸。加20ml水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入50ml或lOOml容量瓶中用水洗涤定氮瓶，洗液并容量瓶中再放冷，加水至刻度，混匀。定容后的溶液每lml相当于2g样品或2ml样品。b、含酒精性饮料或二氧化碳饮料：吸取10.Oml样，置于250ml定氮瓶中，加数粒玻璃珠，先用小火加热除去乙醇或二氧化碳，再加lOml硝酸，混匀后，以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的
9、溶液每10ml相当于2m1样品。c、含糖量高的食品：称取1.0克样品，置于250ml定氮瓶中，先加少许水使湿润，加数粒玻璃珠，10ml硝酸，摇匀，缓缓加入10ml硫酸，待作用缓和停止起泡沫后，先用小火缓缓加热(糖分易炭化)，不断沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部消失后，再加大火力，至有机质分解完全发生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色，放冷。,双硫腙比色法,通过遮蔽剂除去无关离子，氨水调节PH值，在符合反应发生条件的情况下萃取富集提高铅含量测定的精确度。,实验步骤:,+,1、标准曲线的绘制,实验步骤：,1-6号用水补充至100 ml HNO3 （20%）调pH:2-3 加2m120柠檬酸铵溶液lml20盐
10、酸羟胺溶液和2滴酚红指示液混匀1:1氨水调pH:8.59.5 （加入的酚红指示剂显红色） 2ml10氰化钾溶液 10.00ml双硫腙工作液剧烈振荡2min(注意放气) 静置分层脱脂棉滤人1cm比色杯中,弃去12 ml以1号为参比，510nm测A。,2、铅试样测定,任取一份铅试样2ml分液漏斗，加水至100 ml，以下按标准曲线测定步骤进行。,计算样品中铅含量：含铅量=m/vm：从标准曲线上查到 的样品中的铅质量；v： 水样的体积。,实验关键及注意事项：,1、控制好萃取操作条件的一致性： 萃取液体积、时间、力度、静止时间等 。2、铅试剂暴露在强光下可明显褪色，所以整个实验要避免强光照射。3、所用玻璃仪器均用l0-20硝酸浸泡24小时以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。4、CCl4有一定毒性且易挥发,及时盖好试剂瓶。,预期实验结果分析,经过检测，本试验所测化妆品样品中重金属铅的含量范围在0.87mg/kg左右。同一类别化妆品中重金属铅含量范围广且离散。其中保湿营养霜类变异系数最大，柔肤水类变异系数小。化妆品中重金属铅含量的顺序为：保湿营养霜美白保湿霜类洗面奶类防晒霜类柔肤水类乳液类。,
