1、血小板抗原抗体检测及临床应用(血液病科篇),吉林芬瑞生物制品销售有限公司苏 凯,目 录 / contents,血小板抗原,血小板抗体与疾病,血小板抗体检测的临床意义和临床应用,04,临床治疗方案参考,血小板简介,血小板：D:2-5um V:红细胞*1/5功能：促进止血和加速凝血正常范围：100-300109/L,骨髓干细胞,胞质块脱落,来源：,多功能祖细胞,巨核祖细胞,幼巨核细胞,巨核细胞,血小板,血小板形态,静息状态,活化状态,血小板抗原,血小板“非特异性”抗原,血小板“特异性”抗原 HPA抗原,HLA-类抗原 ABH抗原,血小板具有HLA-类抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C
2、抗原），无HLA-类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。血小板个体间HLA-类抗原位点数差别不大。每个血小板上至少有20000个HLA抗原位点。,HLA抗原,部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。血小板上的ABH抗原个体之间表达不同，约5%的非O型个体为A抗原或B抗原的高表达者。故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用O型血小板，以排除ABO系统抗体的干扰。GPIb、GPIIb/IIIa、 GPIa/Iia、CD109等也携带少量ABH抗原,ABH抗原,主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。1990年国际输血协会血小板免疫学工作组提出
3、了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系统。,HPA抗原,已确定了33个HPA，其中12 个抗原为双等位基因表达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高频率抗原命名a，低频率抗原命名b。其余21个抗原为低频率抗原，尚未发现对偶抗原，命名为bw。单核苷酸多态性（SNP）:33个HPA中均已搞清楚基因背景，其中32个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一个核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在 AAG1929-31。,HPA抗原,HPA抗原,HPA抗原,血小板抗原定型,
4、血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点：特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗， 无其它HPA单抗。基因定型限制性片段长度多态性分析（RFLP）序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。（2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相 匹配的血小板供者。（3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输 血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。（
5、4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关 资料和证据。,血小板抗原定型,血小板抗体的产生方式,以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。,移植（骨髓、器官）,输血小板、红细胞（尤其是没有滤白的红细胞）,血小板抗体与部分相关疾病,血小板抗体检测常用方法,方法,指标,血小板抗体检测方法-固相凝集法,血小板抗体筛检，包括HLA抗体、HPA抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。血小板交叉配型，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，避免血小板输注无效症的发生。患者自身抗体检测，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检
6、测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直接加入抗人IgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。,用途：,血小板抗体检测方法-固相凝集法,1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。2.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。,血小板抗体检测的临床
7、意义,3.药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。,血小板抗体检测临床意义,预防血小板输注无效自身免疫性疾病的辅助诊断药物性抗体检测,血小板抗体检测临床应用,预防血小板输注无效,现状,1.很多地区成分血不滤白；,2.血小板盲输现象非常普遍；,血液病患者输血小板时进行配型的重要性！,预防血小板输注无效,困惑,患者抗
8、体阳性，没有配合的血小板怎么办！,预防血小板输注无效,反向推动血站配合临床供应配型相合的血小板,提前告知患者输注风险,针对患者个体状况采取针对性临床干预,血小板输注无效的危害,1）患者发生免疫反应，加重病情。 2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。 3）浪费财力、物力、宝贵的血小板资源。 4）存在医疗纠纷隐患。 5）不利于采供血机构和医疗机构业务水平的提高。,预防血小板输注无效,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板输血采用随机供者血小板有效率不超过30%；采用交叉配型相容性血小板有效率为92%，而对于重度血小板免疫患者，输注相容性血小板
9、有效率为70%。,血小板交叉配型意义,预防血小板输注无效,对844例贫血、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检测。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。检测结果统计如下：,临床数据：,预防血小板输注无效,海南省人民医院,共检测102例患者，阳性18例，平均阳性率17.6%,预防血小板输注无效,9例抗筛阳性患者，8例寻找到了相合的血小板，输注效果良好。,中华临床医师杂志 2012/01,预防血小板输注无效,57例血小板输注无效患者中，血小板抗体阳性患者为21例（37）,采用固相凝集法对有血小板抗体的21例患者进行输注前交叉配型来筛选血小板供者。选择交叉配型阴性或反应最弱的的
10、供者血小板给患者输注。21例患者输注相容性血小板后，所有患者1h CCI7.5109，24h CCI4.5109，有效率为100。,吉林大学第三医院,中国实验诊断学 2013年第1期,预防血小板输注无效,广州血液中心,95例血小板输注患者经固相凝集法检测，血小板抗体阳性32例，抗体阳性率为33.7%。,将血小板抗体阳性患者随机分成未配型组和配型组，各16例。,广东医学院学报 2012/1,预防血小板输注无效,进行血小板抗体检测，可以辅助诊断血小板免疫性疾病，如ITP。,自身免疫性疾病的辅助诊断,一般认为，ITP的发病机制包括血小板自身抗体导致的血小板破坏和清除。,检测患者血小板自身结合抗体，了
11、解血小板是否在体内致敏，是血小板自身抗体导致ITP发生的直接证据,检测患者血小板自身游离抗体，了解血浆中的自身抗体是否能在体外与患者自身血小板结合，是血小板自身抗体导致ITP发生的间接证据,自身免疫性疾病的辅助诊断,血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究夏世勤 苏莉 刘秋洪 杨眉 安邦权 王茂玲 于慧芳1贵州省人民医院输血科 ，2遵义医学院检验系，结论 血小板抗体的产生与血小板输注疗效密切相关，血小板抗体是直接影响血小板输注效果 的重要免疫因素之一 ；血液病患者的病因与血小板抗体的产生有一定相关性 ； 血小板抗体的产生与患者性别无关 ； 血小板输注次数与血小板抗体产生密切相关
12、： 血小板抗体的产生与输注的血小板种类有关，单采组明显低于浓缩组。 医学检验 2013年8月第2O卷第22期,流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITP诊断中的应用研究吴国才，王珍(广东医学院附属医院 血液内科 ，广东 湛江 524001)摘要 ：目的 探讨流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITP诊断中的意义 。方法 选择2012年5月至2013年6月在我院血液科住院的3O例ITP患者为观察组,同期本院健康体检正常者3O例为对照组，采用流式细胞技术检测两组对象的外周血血小板相关抗体PAIg(PAIgG 、PAIgM 、PAIgA )水平 。结果FCM检测观察组患者血小板抗体 ，PAIgG阳性率为7O
13、,平均荧光强度为(25.154-2.61)，对照组平均荧光强度为 (5.09士0.54),两组比较有显著性差异(P 0.05)。结论 流式细胞仪检测血小板相关抗体 在ITP诊断中具有重要的临床意义 中国实验诊断学 2O14年6月第18卷第 6 期,自身免疫性疾病的辅助诊断,许多药物会导致血小板减少，常见的有肝素、奎宁、奎尼丁等，均会诱导产生药物依赖性血小板抗体，从而产生血小板减少症。 药物性抗体产生的机制尚不完全明了。目前认识的产生机制主要有： 免疫复合物机制：药物与抗体结合形成免疫复合物，与血 小板上的Fc受体结合，介导血小板的破坏。 半抗原机制：药物小分子与血小板膜蛋白结合，形成新的 抗原
14、，刺激免疫系统产生抗体，从而破坏血小板。,药物性抗体检测,血液科患者可能产生药物性抗体的用药：抗生素类：头孢他啶、头孢曲松、磺胺类、万古霉素镇痛剂：芬太尼、布洛芬、对乙酰氨基酚消化系统用药：雷尼替丁、心血管系统用药：ACEI、阻滞剂抗肿瘤药：奥沙利铂,2. MF Leach. Detection of drug-dependent platelet antibodies by use of solid-phase red cell adherence assay. British Journal of haematology,1997,97,755-761.,1. Alan D. Michel
15、son Platelets, Third Edition，Chapter 42,药物性抗体检测,怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。 对于免疫复合物机制，可以将药物直接加入待检标本中；对于半抗原机制，可将其加入0.5%缓冲液中。 检测时加入药物的浓度，应参照相应药物的药代动力学数据，选用下列三个浓度： 1.略低于谷浓度 2.峰浓度 3.峰浓度的5-10倍。,药物性抗体检测,对照标本与血小板,无药物性血小板减少症的健康人标本，作为本实验的对照标本。,4-6人份混合，O型血小板。该血小板与待检血小板做
16、配型实验，结果应为阴性。,药物性抗体检测,每一个标本使用三条试剂，一条用于免疫复合物机制，两条用于半抗原机制。,PC,NC,免疫复合物机制,半抗原机制,对 照 标 本,阳 性 对 照,阴 性 对 照,检 测 标 本,药物性抗体检测,操作步骤：免疫复合物机制,1. 将血小板包被在微孔板上，洗板3次2. 加入两滴低离子强度溶液3. 加入两滴已加入不同浓度药物的待检标本（同时加入不添 加药物的待检标本作为对照）4. 向阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性 对照、阴性对照5. 37气育45分钟6. 洗板5次7. 立即加入抗人IgG及指示红细胞，混匀8. 离心，观察结果,药物性抗体检测,操作
17、步骤：半抗原机制,1. 将血小板包被在微孔板上，洗板3次2. 加入两滴低离子强度溶液3. 加入三滴已加入不同浓度药物的BSA溶液4. 37气育30分钟5. 洗板3次6. 向相应孔中加入两滴低离子强度溶液，待检标本、对照表本；阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性对照、阴性对照（每种药物浓度均做阳性对照、 阴性对照）7. 37气育45分钟8. 洗板5次9. 立即加入抗人IgG及指示红细胞，混匀10. 离心，观察结果,药物性抗体检测,血小板抗体相关的血小板免疫性疾病的治疗推荐使用大剂量丙球或糖皮质激素。 治疗方案应结合患者及其它合并症综合考虑。有出血倾向者推荐以下治疗方案：（1）轻微出血倾向：使用激素者维持之前用量。（2）明显出血倾向：起始剂量为泼尼松 1020 mg/d，起效后逐渐减至维持量 510 mg。（3）首次诊断者出现明显血小板减少及出血倾向：起始剂量为泼尼松 0.51 mg/ （kgd），血小板计数维持（2030）10 9 /L以上且出血倾向改善后 2 周可 逐渐减量。（4）严重出血倾向：期待快速起效时，可考虑大剂量的丙球0.4 g/（kgd）持续 35 d，或甲基泼尼松龙 1 g/d持续 3 d，同时可输注血小板。（5）糖皮质激素和丙球可同时使用。,临床治疗方案参考,Thank You !,
