1、禽流感 监测,宣汉县动物疫病预防控制中心实验室2013年5月10日,主要内容：一、概述二、病原三、流行病学四、临床症状和病理变化五、实验室监测诊断六、人员防护,一、概述禽流感（AI），即禽流行性感冒的简称，是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病。本病传播迅速，常呈流行性或大流行性发生。临床上，可出现急性败血症、呼吸道感染甚至隐性经过等形式。是一种危害严重的疾病，世界动物卫生组织（OIE）和我国均将其列为A类烈性传染病。根据禽流感病毒致病性和毒力的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。禽流感病毒有不同的亚型，由H5和H7亚型毒株（以H5N1、H7N7和H7N9为代表
2、）所引起的疾病称为高致病性禽流感（HPAI）。今年3月以来，我国上海、安徽、浙江、江苏、北京、河南、湖南、山东、江西、福建、台湾、广东等省市先后发生人感染H7N9亚型病例。截至5月6日，确诊129人，31人死亡，康复42人。,1878年在意大利首次发现禽流感，当时称为鸡瘟，1955年才证实为A型禽流感病毒。此后，世界各地均有过本病的发生。目前，世界许多国家和地区都存在本病，1994年证实禽流感在我国鸡群中已有发生。下图是国际粮农组织制作的禽流感暴发与家禽饲养密度的关系：,这是2003-2006年H5N1在家禽和野鸟中的流行情况图红色为家禽流行区域，黄色为野鸟流行区域,这是2005年的HPAI全
3、球分布图红色区域代表当年有疫情的国家,这是2006年的HPAI全球分布图,这是2007年的HPAI全球分布图从这张图上可以看出，当年为世界性暴发,这是2008年的HPAI全球分布图,这是2008年中国的情况,这是2013年截至5月1日16时我国人感染H7N9的分布图,二、病原,1、流感病毒分类： 禽流感的病原为禽流感病毒（AIV），是一种RNA病毒，属正粘病毒科流感病毒属。 流感病毒分为A（甲）、B（乙）、C（丙）三型。 A型流感病毒能引起人、禽类及多种哺乳动物发病，常以流行形式出现，可引起世界范围内的大流行，在动物中广泛存在，能致动物大批死亡。 B型流感病毒主要引起人发生流感。 C型流感病毒
4、主要引起人和猪发生流感。,2、禽流感病毒的H和N是什么意思？ 禽流感病毒的囊腺上有两种纤突，都是糖蛋白，是AIV的主要表面抗原:一种叫血凝素(HA)，可凝集多种动物的红细胞，诱导产生中和抗体；另一种叫神经氨酸酶(NA)，是病毒粒子表面的另一种重要抗原。由于这两种糖蛋白极易发生变异，所以，根据糖蛋白的变异情况，目前，HA分为H1H16 共16个不同的型别，NA分为N1N9 共9个不同的型别。理论上，H和N可组合成144个不同的亚型，各型之间无交互免疫力。所以，禽流感的防控工作是个繁杂的事情。,3、AIV的毒力划分： 不同亚型的禽流感病毒，毒力差异很大。 根据OIE标准:病毒对鸡静脉接种后的致病指
5、数(IVPI): IVPI1.2,高致病性(HPAIV)； 0.5IVPI1.2,低致病性(LPAIV)； IVPI0.5，无致病性(NPAIV)。 高致病性病毒引起高致病性禽流感，传播快，可致100%死亡(一般认为H5、H7亚型的一些毒株为高致病性毒株) ； 低致病性病毒引起低致病性禽流感，产生温和性呼吸道疾病、沉郁和产蛋禽类的产蛋下降等问题； 无致病性病毒感染后，不出现任何症状。 我国已分离的禽流感病毒株亚型有H9N2、H9N3、H5N1、H7N1、H7N3、H7N9、H4N5、H14N5等，其IVPI在0.483.00，高、低、无致病性病毒株在我国均有存在。,4、病毒的变异：AIV很易发
6、生变异，HA和NA这两种表面抗原可独立或同时发生变异，HA的变异性很强，是AIV发生变异的主要原因。同时，AIV的致病力也容易发生变异，不断出现新的高致病力毒株，且可能感染新的宿主。5、流感病毒的血凝性：AIV能凝集马、驴、猪、牛、羊、鸡、鸽、豚鼠和人的红细胞，但不能凝集兔红细胞。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3、H7N9等,6、AIV的抵抗力：AIV存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中，大量的病毒可通过粪便排出。AIV对外界环境的抵抗力不强，对高温、紫外线、各种消毒药敏感（对
7、碘制剂特别敏感，目前我县使用的是消毒正典，有效成份是聚维酮碘溶液），易被杀死。5630分钟、6010分钟可灭活病毒。但对低温和干燥环境较适应（0-4可存活数月，-70稳定，冻干可存活数年）。,三、流行病学1、流行特点： 禽流感病毒感染多种家禽、野禽和鸟类，以鸡和火鸡易感性最高。水禽如鸭、鹅可带毒、散毒，一般无临床症状。从鸭分离到的流感病毒比其他禽类都多。目前已发现可携带AIV的鸟类种类有88种。 病禽是主要传染源，野生水禽是自然界流感病毒的主要带毒者，鸟类也是重要的传播者。 传播途径：主要经消化道传播，也可通过伤口、呼吸道、眼结膜传染。垂直传播的证据很少，但有证据表明实验感染鸡的蛋中有禽流感病
8、毒的存在。因此，不能完全排除垂直传播的可能性。 以接触传播为主，也可能通过空气和蛋的媒介传播。,最近，中国科学家从猪的鼻分泌物中分离出了禽流感病毒，而猪有复制禽类和人类流感病毒的能力因此，禽流感病毒和人类流感病毒在猪体内，有可能混合重组产生一种新型的、致命的、能在人与人之间传播的毒株。,2、临床症状： 具有诊断意义的症状： 1）急性发病死亡； 2）脚鳞出血； 3）鸡冠出血或发绀、头部水肿； 4）肌肉和其它组织器官广泛严重出血。,养殖场急性发病死亡,病鸡脚鳞出血,病鸭腿及脚蹼皮下严重出血,鸭蹼皮下出血,临床症状,病鸡脚鳞皮肤充血、出血,病鸡头部、眼睑周围肿胀,结膜充血、出血，并流出粘性鼻涕,冠髯
9、肿胀，严重时出血、坏死,病鸭头部肿胀，流出血性鼻涕,3、病理变化：（1）剖检病变: 全身组织器官严重出血。腺胃粘液增多，刮开可见腺胃乳头出血、腺胃和肌胃之间交界处粘膜可见带状出血；消化道粘膜，特别是十二指肠广泛出血；呼吸道粘膜可见充血、出血；心冠脂肪及心内膜出血；输卵管的中部可见乳白色分泌物或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂,有的可见“卵黄性腹膜炎”。水禽在心内膜还可见灰白色条状坏死。胰脏沿长轴常有淡黄色斑点和暗红色区域。急性死亡病例有时未见明显病变。 （2）病理组织学变化:主要表现为脑、皮肤及内脏器官（肝、脾、胰、肺、肾）的出血、充血和坏死。脑的病变包括坏死灶、血管周围淋巴细胞管套、神经胶质
10、灶、血管增生和神经元性变化；胰腺和心肌组织局灶性坏死。,鸭肝脏、心脏出血,禽流感,腺胃乳头出血，腺胃和肌胃交界处带状出血,【大体病变】,干酪性窦炎,喉头气管黏膜水肿,卵泡出血、破裂，腹腔内有新流出的卵黄,气管黏膜出血,气管内有干酪样渗出物,鸭胰腺出血、坏死,禽流感,五、实验室监测诊断,方法血凝抑制试验（HI）、琼脂扩散试验、ELISA、补体结合试验、中和试验等方法特异性抗原、抗体检测方法；RT-PCR、荧光定量PCR、病毒分离培养等病原学检测方法。样品采集血清样品：翅下静脉，心脏。组织样品：采取气管、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、泄殖腔等。拭子：用棉拭子涂擦喉头、气管、泄殖腔、猪鼻腔。样品保存送检采
11、集的样品如在48小时进行检查，可放入4保存，否则放于低温下保存（-70保存最好）。,下面详细说一下HPAI监测样品的采集、保存与运输技术要求1、采样范围：活禽交易市场、农贸市场、家禽及生猪屠宰场（点）、家禽养殖场（村）等，尽可能覆盖多种家禽（特别是水禽）和多个摊位。 2、采样前的准备1）采样要求：根据采样目的，采集不同类型和不同数量的样品，采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法。）采样器具：动物检疫器械箱，保温箱或保温瓶，剪刀，镊子，酒精棉，碘酒棉，棉签，注射器、针头、动物保定器等。3）样品容器：1.5mL离心管，10mL离心管及易封口样品袋，塑料包装袋等。4）保存和
12、运输用品：塑料盒(1.5mL小离心管专用)，铝饭盒，瓶塞，无菌棉拭子，胶布，封口膜，封条，冰袋。 采样刀剪等器具和样品容器须经无菌处理。,5）试剂：禽流感病毒抗原快速检测卡和加有抗生索的PH7.4等渗磷酸盐缓冲液(PBS) A、PH7.4的等渗磷酸盐缓冲液配制方法 ： NaCI（氯化钠） 8.0g NaH2PO4(磷酸二氢钠) 1.561g Na2HP04（磷酸氢二钠） 3.582g 将上列试剂按次序加入定量容器中，加适量蒸馏水溶解后，再定容至1000mL，调PH值至7.4，高压消毒灭菌20分钟，冷却后，保存于4冰箱中备用。,B、棉拭子用抗生素PBS(病毒保存液)的配制： 取上述PBS液，按要
13、求加入下列抗生素：咽喉拭子用PBS液中加入青霉素(2000IU/mL)、链霉素(2mg/mL)、丁胺卡那霉素(1O00IU/mL)、制霉菌素(1O00IU/mL)。粪便和泄殖腔拭子所用的PBS中抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后应调PH值至7.4。在采样前分装小离心管，每管中加这种PBS1.01.3mL，采粪便时在小离心管中加这种PBS1.01.5mL，采样前冷冻保存。6）记录和防护材料不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、记录本等；口罩、一次性乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。,3、样品采集1）基本要求应从死禽和处于急性发病期的病禽采集样品，样品要具有典型性。采样过程要注意无菌操作，同时避免污
14、染环境。采样人员要加强个人防护。2）血清样品：心脏或翅静脉采血，每只病禽采血样2mL3mL，盛于1Oml离心管中，经离心或自然放置析出血清后，将血清移到另外小离心管中封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。3）拭子样品：每只采集泄殖腔拭子和咽喉拭子各1个，将采集的样品端剪下置于含有抗生素的PBS 液(加1.OmL1.3mLPBS)小离心管中，封好口，贴好标签。,.4）泄殖腔拭子采集方法：棉拭子插入泄殖腔约1.52cm，并在内壁上反复旋转擦拭3圈以上后，沾上粪便。取出，插入装有PBS液的离心管内，剪掉露出部分，盖紧瓶盖，作好标记。5）咽喉拭子采集方法：将棉拭子插入口腔至咽的后部直达喉气管，轻轻
15、擦拭并慢慢旋转3圈以上，取出，插入有PBS液的离心管内，剪掉露出部分，盖紧瓶盖，作好标记。6）鼻腔拭子采集方法：先将猪保定，将棉拭子插入猪鼻腔内，轻轻擦拭并慢慢旋转3圈以上，沾上鼻内分泌物。然后将蘸有分泌物的拭子浸入PBS液中，剪掉露出部分，盖紧瓶盖，作好标记，密封低温保存。,7）粪便样品： 小家禽采泄殖腔拭子容易造成伤害，可只采集每个样品1g-2g新鲜粪便样品，置于内含有抗生素PBS(加lmL1.5mLPBS)的离心管中，封好口，贴好标签。保存粪便和泄殖腔拭子的PBS中抗生素浓度提高5倍。8）病料样品应采集组织样品。取死亡不久的病死禽采样。每只禽采集肠管及肠内容物1份；肺和气管样品1份；肝、
16、脾、肾、脑等各l份并分别采集。上述每个样品取样重量为15g20g，放于样品袋或平皿中，如果重量不够可取全部脏器(如脾脏)。不同禽只脏器不能混样，同一禽只不同脏器不应混样。样品采集完后将样品封口，贴好标签。,9）整禽采样 适于禽主或兽医部门采样。将病死禽或病禽装入塑料袋内，至少用两层塑料袋包装，同时和血清样品一起用保温箱加冰袋密封包装，由采样人员12小时内带回或送到实验室。要求死禽和病禽总数不少于5只。10）采样单及标签等的填写 样品信息详见附表动物血清、组织（拭子）样品采集送检单，采样单应用钢笔或签字笔逐项填写(一式三份)，样品标签和封条应用记号笔填写，保温容器外封条应用钢笔或签字笔填写，小离
17、心管上用记号笔作标记。应将采样单和病史资料装在塑料包装袋中，随样品一起送到实验室。,11）包装要求： 每个组织样品应仔细分别包装，在样品袋外面贴上标签，标签注明样品名、样品编号、采样日期等。再将各个样品放到塑料包装袋中。 拭子样品：小离心管应放在特定的塑料盒内。血清样品：装于小离心管中，再装袋封存。 包装袋外、塑料盒应贴封条，封条上应有采样人签章，并注明贴封日期，标注放置方向，切勿倒置。,4、保存和运输 1）样品应置于保温容器中运输，保温容器应密封，防止渗漏。一般使用保温箱，保温容器外贴封条，封条有贴封人(单位)签字(盖章)，并注明贴封日期。 2）样品应在特定的温度下运输，拭子样品和组织样品应
18、作暂时的冷藏或冷冻处理，然后运送实验室。 若能在4小时内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。 如果超过4小时，应作冷冻处理，先将样品置于 -30冻结，然后再在保温箱内加冰袋运输，经冻结的样品必须在24小时内送到。 若24小时不能送到实验室，则运输过程中环境温度应保持在-20以下。,3）血清样品要单独存放。若24小时内运达实验室，在保温箱内加冰袋冷藏运输；若超过24小时，要先冷冻后，在保温箱内加大量冰袋运输，途中不能超过48小时。 4）各种样品到达实验室后，若暂时不进行处理，则应冷冻(以-7O或以下为宜)保存，不应反复冻融。,咽喉拭子的采集,鸡咽喉拭子的采集,鸡咽喉拭子的采集,泄殖腔拭子的采集,特别说
19、明,1、各乡镇所采样品自己编号，应注明采样地点，详细至乡、村、社和场，并注明畜主姓名。动物代号：猪A、牛B、羊C、鸡D、鸭E、鹅F、其它G。咽喉拭子代号：用Y代表泄殖腔拭子代号：用X代表粪便代号：用V代表鼻腔拭子代号：用Q代表,2、从同一头（只）畜禽采取的血清、咽喉拭子、泄殖腔拭子，编号应一致。例：某镇一养鸡场第5个鸡的血清样品为D5，那么，它的咽喉拭子则为DY5，泄殖腔拭子为DX5；本次要求将咽喉拭子和泄殖腔拭子装在同一个离心管内，故编号为：DXY5。某乡猪场第15个猪血清编号为A15，那么它的鼻腔拭子编号则为：AQ15。,宣汉县动物疫控中心动物血清、组织（拭子）样品采集送检单送检单位： 送
20、检人： 送检时间： 单位：头、只,采样单位： 采样时间： 采样人（签字）：,六、人员防护,（一）诊断、采样、扑杀、消毒及无害化处理人员的防护： 1、进入感染或可能感染场地和无害化处理地点： 1）穿防护服； 2）戴可消毒的橡胶手套； 3）戴N95口罩或标准用手术口罩； 4）戴护目镜； 5）穿胶靴。 2、离开感染或可能感染场地和无害化处理地点： 1）工作完毕后，对场地及其设施进行彻底消毒； 2）在场内或处理地出口处脱掉防护装备； 3）将脱掉的防护装备置于容器内进行消毒处理； 4）对换衣区域进行消毒，人员用消毒水洗手； 5）工作完毕后要洗澡。,（二）饲养人员1、在与感染或可能感染的禽鸟及其粪便等污染
21、物品接触前，必须戴口罩、手套和护目镜，穿防护服和胶靴；2、扑杀处理禽鸟和进行清洗消毒工作前，应穿戴好防护物品；3、场地清洗消毒后，脱掉防护物品；4、衣服必须用70以上的热水浸泡5分钟或用消毒剂浸泡，然后再用肥皂水洗涤，于太阳下晾晒；5、胶靴和护目镜等要清洗消毒；6、处理完上述物品后要洗澡。,（三）扑疫人员1、必备物品：口罩、手套、防护服、一次性帽子或头套、胶靴等。2、进入感染或可能感染场地1）穿防护服；2）戴口罩，用过的口罩不得随意丢弃；3）穿胶靴，用后要清洗消毒；4）戴一次性手套或可消毒橡胶手套；5）戴好一次性帽子或头套。,3、离开感染或可能感染场地1）脱个人防护装备时，污染物要装入塑料袋内，置于指定地点；2）最后脱掉手套后，手要洗涤消毒；3）工作完毕后要洗浴，尤其是出入过有禽粪灰尘的场所。,（四）健康监测1、所有暴露于感染或可能感染禽和场的人员均应接受卫生部门监测；2、出现呼吸道感染症状的人员应尽快接受卫生部门检查；3、出现呼吸道感染症状的家人也要接受健康检查；4、免疫功能低下，60岁以上和有慢性心脏和肺脏疾病的人员要避免从事与禽接触的工作；5、应密切关注采样、扑杀处理禽鸟和清洗消毒的工作人员及饲养人员的健康状况。,谢谢,
