1、药 物 分 析 Pharmaceutical Analysis,01:47,第三章 药物的杂质检查,3.1 概述,3.2 一般杂质的检查方法,3.3 特殊杂质的检查方法,01:47,概 述,3.1 概述,有效性：以动物实验为基础，最终以临床疗效来评价；安全性：热原检查、毒性试验、刺激性试验、过敏试验、升压或降压物质检查等。纯度要求：对各类杂质的检查；制剂通则：含量均匀性，溶出度、释放度、装量差异、生物利用度的均一性；,01:47,一、药物的纯度与要求,药物的纯度 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣。,概 述,药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑；考虑杂质的生理作用；,化学试剂不能
2、代替药品！,01:47,药物的杂质 指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。,药物的纯度与要求,例：,乙酰水杨酸,水杨酸,01:47,二、杂质的来源,在贮藏过程中引入,合成过程中，原料不纯；有一部分原料没有反应完全；反应中间产物和副产物在精制时没有除净；在制成制剂的过程中，产生新的杂质；制剂生产过程中所用溶剂、试剂的残留；与生产器皿接触引入杂质；,受外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、异构化、发霉等变化。,由生产过程中引入,概 述,01:47,例：,乙酰水杨酸,水杨酸,二羟乙基过氧化物（有毒）,麻醉乙醚,例：,例：,差向四环素（毒性高、活性低）,四环
3、素,杂质的来源与种类,01:47,一般杂质 是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。特殊杂质 是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。,杂质的来源与种类,三、杂质的种类,01:47,四、杂质的限量,杂质限量 是指药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。,杂质的量 杂质限量,合格,不合格,杂质的量,概 述,01:47,杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法,杂质对照品或纯品溶液,供试品溶液,在相同条件下处理,平行操作,比较结果,颜色比色浑浊比浊色斑比较色斑,特点：不需知道杂质的准确含量；必须有对照品或是纯品。,杂质的限
4、量,01:47,杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法,例1：中国药典规定检查砷盐时，应取标准砷溶液2.0ml（每1ml相当于1ug的As）制备的标准砷斑，今依法检查溴化钠中的砷盐，规定含砷量不得超过0.0004% ，问应取供试品多少克？,杂质的限量,01:47,杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法,例2：检查对乙酰氨基酚中的氯化物，取对乙酰氨基酚2.0g，加水100ml，加热溶解，冷却，滤过，取滤液25ml，依法检查氯化物，所产生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10ug的Cl-）制成的对照液比较，不得更浓，问氯化物的限量？,杂质的限量,01:47,杂
5、质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法,供试品溶液,特点：以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量不需对照品,试剂,无正反应合格,有正反应不合格,杂质的限量,01:47,杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法,供试品,测定特定的待检杂质的参数,如：测定A、pH值等,结果规定的限量,特点：不需要对照品,杂质的限量,01:47,一般杂质的检查方法,3.2 一般杂质的检查方法,氯化物检查法,硫酸盐检查法,重金属检查法,一般杂质的检查方法,溶液颜色检查法,铁盐检查法,砷盐检查法,易炭化物检查法,溶液澄清度检查法,干燥失重测定法,残留溶剂测定法,炽灼残渣检查法,水分测定法,01:4
6、7,（一）原理,一、氯化物检查法,（二）操作（标准对照法）,供试品溶液,标准NaCl溶液,稀HNO310ml,H2O,稀HNO310ml,H2O,40ml,40ml,AgNO31ml,AgNO31ml,H2O,H2O,50ml,50ml,暗处放置5min,暗处放置5min,一般杂质的检查方法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,纳氏比色管应配对 ；,氯化物检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；,可以加速氯化银的生成；产生较好的乳浊；可避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀。,氯化物检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,纳
7、氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；,使生成白色浑浊而不是白色沉淀,氯化物检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；暗处放置 ；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察 ；平行操作。,氯化物检查法,01:47,反复过滤至澄清,H2O,（三）注意事项及讨论,2. 供试品溶液不澄清时的处理方法过滤,3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法,稀HNO3,H2O,AgNO31ml,暗处放置10min,标准NaCl溶液,AgNO31ml,H2O,无Cl-,暗处放置5min,暗处放置5min,50
8、ml,50ml,内消色法,2倍量的供试品,氯化物检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法,外消色法 向供试品溶液中加入某种试剂，使供试品溶液的颜色褪去或与对照品溶液颜色相同后再依法检查。,4. 供试品溶液显碱性时的处理方法,先中和为中性后再检查；避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。,5. 预先排除干扰物。,氯化物检查法,01:47,（一）原理,二、硫酸盐检查法,（二）操作（标准对照法）,供试品溶液,标准K2SO4溶液,H2O,H2O,25% BaCl2 5ml,25% BaCl2 5ml,H2O,H2O,50ml,50ml,放置10m
9、in,放置10min,40ml,40ml,稀HCl 2ml,稀HCl 2ml,一般杂质的检查方法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀盐酸；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察 ；平行操作。,2. 供试品溶液不澄清时的处理方法过滤,3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法,硫酸盐检查法,01:47,过硫酸铵 50mg,过硫酸铵 50mg,（一）原理,三、铁盐检查法,（二）操作（标准对照法）,供试品溶液,标准铁溶液,H2O,H2O,30% 硫氰酸铵 3ml,30% 硫氰酸铵 3ml,H2O,H2O,50ml,50ml,25ml,25ml,稀HCl
10、4ml,稀HCl 4ml,35ml,35ml,一般杂质的检查方法,01:47,（三）注意事项及讨论,纳氏比色管应配对；酸性条件稀盐酸加过硫酸铵氧化剂： 加过量硫氰酸铵 比色方法：白色的背景上，自上而下的观察。,稀盐酸可以防止铁盐水解,氧化供试品中 Fe2+生成Fe3+ ；防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。,增加生成的配合物的稳定性，提高灵敏度；消除Cl-、PO43-、SO42-等离子与铁盐形成配合物的干扰。,铁盐检查法,01:47,四、重金属检查法,重金属 指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。,一般杂质的检查方法,01:47,第一法 硫代乙酰胺法,黄色至棕黑色混悬液,（一）
11、原理,（二）操作（标准对照法）,供试品溶液,标准铅溶液,H2O,醋酸盐buffer（pH3.5）2ml,H2O,醋酸盐buffer（pH3.5）2ml,25ml,25ml,硫代乙酰胺 2ml,摇匀放置2min,硫代乙酰胺 2ml,摇匀放置2min,重金属检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,1. 条件,用Pb(NO3)2先配制贮备液，并加入硝酸防止铅盐的水解，临用前稀释；醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 硫代乙酰胺试液 ；平行操作； 比色方法：白色背景，自上而下的观察 ；,重金属检查法硫代乙酰胺法,01:47,2. 供试品溶液有色时的处理方法外消色法/内消色法,外消色法用稀焦糖溶液调节对照管
12、颜色与样品管颜色一致。 用对测定不干扰的指示剂调节对照管颜色与样品管颜色一致。内消色法,重金属检查法硫代乙酰胺法,01:47,3. 干扰物的排除方法,高铁盐（Fe3+）供试品中微量高价Fe3+存在 供试品为铁盐（大量的Fe3+）药物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽剂,重金属检查法硫代乙酰胺法,01:47,第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法,（一）原理 供试品在500-600炽灼破坏后，加HNO3加热处理，再按第一法进行检查。,（二）操作,重金属检查法,01:47,（三）注意事项及讨论,HNO3处理后必须蒸干除尽氧化氮；炽灼温度：500600；含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿。,
13、重金属检查法炽灼后硫代乙酰胺法,01:47,第三法 硫化钠法,（一）原理,（二）操作（标准对照法，比色）,（三）注意事项及讨论,碱性条件：NaOH显色剂：Na2S,重金属检查法,黄色至棕黑色混悬液,01:47,第四法 微孔滤膜法,（一）原理：同第一法,（二）操作,重金属检查法,微孔滤膜过滤法检查重金属装置,01:47,五、砷盐检查法,古蔡氏法白田道夫法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）奇列氏法（次磷酸法）,一般杂质的检查方法,01:47,（一）原理,砷()的反应： As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ +
14、 3H2O AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3（黄色） AsH3 + 2As(HgBr)3 3AsH(HgBr)2 （棕色） AsH3 + As(HgBr)3 3HBr + As2Hg3（黑色）,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（二）操作,8cm,有孔玻璃旋塞,导气管,AsH3发生瓶,溴化汞试纸,醋酸铅棉花(60mg),HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液,生成砷斑,吸收硫化氢气体,古蔡氏法检砷装置,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（三）注意事项及讨论,各试剂的作用,HCl：提供酸性环境，反应物；加KI和酸性SnCl2的作用：做还原剂，还原砷()为砷(),砷盐检
15、查法古蔡氏法,As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O,01:47,（三）注意事项及讨论,各试剂的作用,加KI和酸性SnCl2的作用：KI被氧化生成的I2又可以被SnCl2还原为I I与反应中产生的Zn 2能形成稳定的配位离子，有利于生成AsH3的反应不断进行。,砷盐检查法古蔡氏法,As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O,01:47,（三）注意事项及讨论,各试剂的作用,加KI和酸性SnCl2的作用：KI和酸性S
16、nCl2可抑制SbH3生成 锑斑，影响结果观察SnCl2可以与Zn生成锌锡齐，起去极化的作用，使氢气均匀连续发生,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（三）注意事项及讨论,各试剂的作用,醋酸铅棉花的作用 ：吸收H2S，排除硫化物干扰,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（三）注意事项及讨论,2. 反应的最佳条件,加Zn粒：能通过1号筛（850-1000m）；约2g盐酸酸性下反应温度2540，45min标准砷溶液2ml（1g/ml）,砷盐检查法古蔡氏法,3. 供试品砷斑和标准砷斑应平行操作，并立即观察； 供试品砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。,01:47,（三）注意事项及讨论,4. 干扰物的排除,如供
17、试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等应在检查前加入HNO3处理，氧化成硫酸盐，再做检查；供试品若为铁盐，需先加酸性SnCl2试液，将Fe3+还原为Fe2+,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（三）注意事项及讨论,4. 干扰物的排除,供试品为共价键结合的砷化物，要先进行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。排除方法：酸破坏法/碱破坏法酸破坏法：+稀硫酸与溴化钾，如：葡萄糖中砷盐的检查碱破坏法：+氢氧化钙，500-600灼烧，如：中药麻仁丸中砷 盐的检查 +无水碳酸钠碱融，如：苯甲酸钠中砷盐的检查,砷盐检查法古蔡氏法,01:47,（四）古蔡氏法的特点,优点：灵敏度高。缺点：不适于含锑的药物。,砷盐检
18、查法古蔡氏法,01:47,五、砷盐检查法白田道夫法,一般杂质的检查方法,（一）原理,棕褐色的胶态砷,（二）特点,优点：不受锑干扰 。缺点：灵敏度低 。,01:47,五、砷盐检查法 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）,一般杂质的检查方法,（一）原理,红色的胶态银,红色的胶态银,01:47,（二）操作,Ag-DDC法检砷装置,砷盐检查法Ag-DDC法,AsH3发生瓶,醋酸铅棉花(60mg),HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液,吸收硫化氢气体,Ag-DDC,01:47,（三） Ag-DDC法的特点,优点：灵敏度高； 可限量也可定量； 锑干扰小缺点：吡啶有恶臭，中国药典改为Ag-DDC
19、的三乙胺-氯仿（1.8：98.2）溶液代替，灵敏度略低。,砷盐检查法Ag-DDC法,01:47,五、砷盐检查法奇列氏法（次磷酸法）,一般杂质的检查方法,（一）原理,（二）特点,优点：不受S2-、SO32-、Sb的干扰，适用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物砷盐的检查 缺点：灵敏度较古蔡氏法低 。,01:47,六、溶液颜色检查法,一般杂质的检查方法,是控制药物中有色杂质量的方法,中国药典收载有三种方法： 第一法 目视比色法，即与标准比色液比较的方法。第二法 分光光度法。第三法 色差计法,01:47,七、易炭化物检查法,一般杂质的检查方法,易炭化物指药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。,方
20、法：H2SO4炭化后与对照液比较。,对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；（3）高锰酸钾液。,01:47,八、溶液澄清度检查法,一般杂质的检查方法,澄清度检查是检查药品溶液的混浊程度。它可以反映药物溶液中微量不溶性杂质的存在。,方法：与浊度标准液比浊。,浊度标准液制备原理：,甲醛腙（白色混浊）,肼,01:47,溶液澄清度检查法,澄清指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂或未超过0.5号浊度标准液。,01:47,九、炽灼残渣检查法,一般杂质的检查方法,炽灼残渣 指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽
21、灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。,0.1%0.2%,12 mg,01:47,十、干燥失重测定法,一般杂质的检查方法,干燥失重 药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。,用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。,恒重 供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。,01:47,干燥失重测定法,干燥失重测定方法：,01:47,十一、水分测定法,一般杂质的检查方法,2005版中国药典二部收载两种方法：费休氏法、甲苯法,（一）费休氏法,A供试品消耗的费休试液的体积B空白消耗的费休试液的体积F每1ml费休试剂相当于水的重量(mg)W供试品的重量,01:47,水分测定法费休氏法,费休试液的配制
22、 称取碘(置硫酸干燥器内48小时以上)110g，置干燥的具塞烧瓶中，加无水吡啶160ml,注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300ml，称定重量，将烧瓶置冰浴中冷却，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存。临用前应标定浓度,01:47,（二）甲苯法,适用于含挥发性成分的药品,A500ml的短颈圆底烧瓶；B水分测定管；C直形冷凝管，外管长40cm。,甲苯法装置,水分测定法,01:47,十二、残留溶剂测定法,一般杂质的检查方法,残留溶剂 指在合成原料药、辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完
23、全除去的有机溶剂。,01:47,3.3 特殊杂质的检查方法,特殊杂质 是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。,原理：利用药品和杂质在理化性质及生理作用的差异,方法：色谱分析法 光谱分析法 化学分析法 物理分析法 生物学分析法,特殊杂质的检查方法,01:47,一、色谱分析法,包括：薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法,（一）薄层色谱法（TLC法）,1、杂质对照法 适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况。,例：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查,N-甲基哌嗪,供试品(50mg/ml)10l,N-甲基哌嗪对照品(50mg/ml)10l,特殊杂质的检查方法,01:47,2、供试品溶液自身稀释对
24、照法适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况,例：氢化可的松中“其他甾体”的检查,供试品液：3mg/ml对照液：60g/ml（供试液稀释50倍）,判断： 供试品溶液的杂质斑点数3个； 颜色对照液主斑点颜色。,薄层色谱法,01:47,3、杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用4、对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量时，可以用含待检测杂质符合限度要求的与供试品相同的药物作为对照品。,薄层色谱法,01:47,内标法加校正因子法外标法加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法 峰面积归一化法,（二）高效液相色谱法（HPL
25、C法）,HPLC法检查杂质的方法有五种：,特殊杂质的检查方法,01:47,1、内标法加校正因子法 适用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。,高效液相色谱法,对照品+内标进样，求校正因子,供试品+内标进样，求Cx,内标物浓度,杂质对照品浓度,供试品中杂质的峰面积,内标物的峰面积,杂质对照品的峰面积,供试品中杂质浓度,01:47,2、外标测定法 适用于有对照品的杂质，而且进样量能够精确控制的情况。,3、加校正因子的主成分自身对照测定法,高效液相色谱法,例：红霉素中红霉素B、C的检查： 对照品液(0.2mg/ml)进样20l，调灵敏度，使主峰达满量程的20%； 供试品液(4mg/m
26、l)进样20l，红霉素B、C校正后的A，均不得大于对照品液的主峰面积；其它单个杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积（5.0%）。,对照品液：供试品的稀释液,01:47,4、不加校正因子的主成分自身对照法 该方法适用于没有杂质对照品的情况。,高效液相色谱法,对照品液：供试品的稀释液,例:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的检查： 对照品液(0.01mg/ml)进样20l，调灵敏度，使主峰达10%30% 样品液(0.14mg/ml)进样20l，杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积的1.0%。,01:47,5、面积归一化法 适用于粗略测量供试品中杂质的含量。,高效液相色谱法,例：利巴韦林中有
27、关杂质的检查： 对照品液(5g/ml)进样10l,调灵敏度，使主峰达满量程的20%25% 样品液(0.4mg/ml)进样10l, 各杂质峰的面积之和不得超过总峰面积 的1.0%,01:47,高效液相色谱法,（三）气相色谱法（GC法） 主要用于药物中挥发性的杂质检查。,内标法加校正因子法外标法峰面积归一化法标准溶液加入法,01:47,二、光谱分析法,包括：紫外分光光度法、红外分光光度法、原子吸收分光光度法,（一）紫外分光光度法,特殊杂质的检查方法,肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线,01:47,（二）红外分光光度法,特殊杂质的检查方法,供试品在640cm-1和662cm-1处的校正吸收值之比，不得
28、大于含10%A晶型甲苯咪唑对照品在该波长处的校正吸收值之比。,01:47,（三）原子吸收分光光度法,特殊杂质的检查方法,是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。,限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量- a 供试品液 = - b b (a-b)合格; b (a-b)不合格。,01:47,三、化学分析法,特殊杂质的检查方法,杂质与一定试剂产生沉淀；杂质与一定试剂产生颜色反应；杂质与一定试剂反应产生气体。,例：呋塞米中芳香第一胺的检查,呋塞米,2-氨基-4-氯-5-氨磺酸基苯甲酸,重氮化-耦合反应显色,三、化学分析法,杂质与一定试剂
29、产生沉淀；杂质与一定试剂产生颜色反应；杂质与一定试剂反应产生气体。,01:47,三、化学分析法,特殊杂质的检查方法,例：阿司匹林中游离水杨酸的检查,阿斯匹林,水杨酸,01:47,四、物理分析法,特殊杂质的检查方法,是根据药物与杂质在物理性质上的不同来进行检查的。如气味、颜色、旋光度等。,四、物理分析法,是根据药物与杂质在物理性质上的不同来进行检查的。如气味、颜色、旋光度等。,五、生物学分析法,利用药物本身与可能存在的杂质间生物活性上的差异，采用生物学分析法以控制杂质的限量。,01:47,本章重点,本章重点,掌握药物的纯度、杂质、一般杂质、特殊杂质等基本概念；掌握杂质的来源、种类；掌握杂质限量检查的方法和限量检查的计算公式；掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐检查的方法、原理、反应条件、加入各试剂的作用及试验注意事项等；熟悉特殊杂质检查的一般方法。,
