1、,原位杂交技术(FISH)在HER2检测中的应用,HER2及其检测的临床意义HER2检测相关指南及指南关于ISH的内容更新Her2检测常用的原位杂交方法,内容提要,HER2介绍及其检测的临床意义,HER2基因人类表皮生长因子受体-2基因 Human Epidermalgrowth Factor Receptor-2(HER2) Gene定位于染色体17q21编码跨膜受体样蛋白（HER2蛋白）,具有酪氨酸激酶活性HER2蛋白分子量185 kDa的糖蛋白:细胞外区（配体结合区）跨膜区（传导信号）细胞内区（激酶活性）,HER2,HER2过表达的结果,正常HER2 表达,HER2 基因扩增导致HER2
2、过表达,HER2 过表达导致肿瘤增殖,促进细胞的生长和增殖-肿瘤发生抑制细胞的凋亡诱导血管新生提高细胞运动能力,增强肿瘤的浸润转移作用,Moasser MM.Oncogene,2007.26(46):6577Freudenbery JA, Wang Q, Katsumata, et al. Exp Mol Pathol.2009.87(1):1,HER2阳性的定义,蛋白水平(过表达): 细胞表面HER2蛋白受体表达大量增加基因水平(扩增): HER2编码基因于细胞核内拷贝增加,IHC,FISH,HER2状态对乳腺癌的临床重要性,乳腺癌的HER2阳性率约为1525%对于乳腺癌患者，HER2过表达
3、对早期乳腺癌预后不利；HER2过表达会降低乳腺癌转移/复发患者的存活率HER2状态也可预测乳腺癌的药物治疗效果，包括对曲妥珠单抗治疗的反应对紫杉醇及蒽环类药物治疗的反应对三苯氧胺的耐药性,Carlson RW, et al. JNCCN 2006:4(Suppl.3):S1S22.,HER2状态评估对于确定患者是否接受抗HER2靶向治疗至关重要,HER2状态对胃癌的临床意义,所有的胃或胃食管结合部癌患者都应在初次诊断时检测肿瘤的HER2状态。HER2在胃癌中过表达预示更差的疾病结局以及进展性更强的疾病类型准确的胃癌HER2表达和基因扩增检测结果是进展期胃癌HER2靶向治疗患者筛选和疗效预测的前
4、提2010年，欧洲和美国先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃食管交界癌患者,Kelley JR and Duggan JM. J Clin Epidemiol 2003;56:19.Bang YJ, et al. Lancet 2010;376:687697.Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2008;26:Abstract 4526.Gravalos C and Jimeno A. Ann Oncol 2008;19:15231529.,HER2检测指南中对于ISH检测的内容介绍,国内外相关指南,国外指南：ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南（201
5、3）NCCN 乳腺癌临床实践指南（2012）NCCN胃癌临床实践指南（2011）欧洲胃癌HER2检测指南（2011）国内指南：乳腺癌HER2检测指南（2014版）胃癌HER2检测指南(2011),10,Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173182.Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.Albarello L, et al. Adv Anat Pathol 2011;18(1):5359,IHC为2+的HER2乳腺癌和胃癌患者均应进行ISH复查！,ISH检测流程和判读标准（ASCO-CAP 2007版）,2
6、007版,Arch Pathol Lab Med. 2007;131(1):18-43,ISH检测流程和判读标准（ASCO-CAP 2013版）,2013版 双探针,Arch Pathol Lab Med. 2013 Oct 7. Epub ahead of print,14,中国乳腺癌HER2检测指南（2014版）,HER2检测常用检测的ISH方法,HER2常用检测方法,免疫组织化学 (IHC): 应用抗体检测蛋白过表达是乳腺及胃组织检测HER2状态的首要方式1原位杂交 技术(ISH): 利用核酸探针检测HER2基因扩增，可用于复检经IHC检测难以确定结果的病例及疑难病例1,1. Wolff
7、 AC et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.,实验室HER2检测的ISH方法总结,18,原位杂交技术原理,使探针与荧光素标记的特异亲和素之间发生免疫化学反应,最后用荧光显微镜对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。,FISH技术介绍,变性 和 杂交,FISH操作流程,组织固定和处理,组织切片和处理,探 针 制 备,洗 脱,杂 交 液的配制,信号放大或镜检,PathVysion 探针试剂盒,INFORM探针试剂盒,BMC Cancer 2009, 9:1,HER2() HER2(+) HER2(+),FISH探针,22,CISH技术介绍,使用生物素或者地高辛标记的探针进行杂交反应，再用鼠抗生物素抗体和辣根过氧化物酶抗鼠抗体进行免疫结合，最后DAB显色,CISH操作流程：, 预处理 变性和杂交 严格洗涤 免疫显色 衬染和封片 镜下观察和结果判读,HER2基因未扩增 HER2基因扩增,CISH探针,双色银染原位杂交技术（DSISH）,DSISH探针,HER2的ISH检测方法之优缺点,总结,HER2检测对于乳腺癌和胃癌诊疗具有重要意义IHC2+的HER2乳腺癌和胃癌患者需进一步通过ISH明确HER2状态选择合适的原位杂交方法检测HER2基因状态,谢谢!,
