1、慧分型糖尿病分型产品介绍,201512 无锡,内容提要,I型糖尿病与糖尿病分型目前糖尿病分型面临的问题慧分型糖尿病分型产品介绍,糖尿病分型,在我国患病人群中，以2型糖尿病为主，2型糖尿病占90%以上，1型糖尿病约占5-10%，其他类型糖尿病仅占1%,1型与2型糖尿病鉴别要点,1型糖尿病（T1DM）,2012年版中国1型糖尿病防治指南,一、定义：因胰岛细胞破坏而导致胰岛素绝对缺乏，具有酮症倾向的糖尿病，患者需要终身依赖胰岛素维持生命。,二、T1DM临床特征1、起病年龄：大多数患者20岁以前起病，但也可以在任何年龄发病；20岁以前发病的患者中约80%是T1DM；2、起病方式：起病较急，多数患者的口
2、干、多饮和多尿、体重下降等“三多一少”症状较为典型，有部分患者直接表现为脱水、循环衰竭或昏迷等酮症酸中毒的症状；3、治疗方式：依赖胰岛素治疗。,1型糖尿病亚型,2012年版中国1型糖尿病防治指南,1、免疫介导性,典型T1DM：大部分T1DM患者细胞的破坏进展迅速。胰岛自身抗体是细胞遭受免疫破坏的标志物，是诊断自身免疫性T1DM的关键指标。成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）：在病因上归属于免疫介导性T1DM的缓慢进展亚型。LADA的早期临床表现貌似2型糖尿病, 而以胰岛细胞遭受缓慢的自身免疫损害为特征, 胰岛功能衰退速度三倍于2型糖尿病。早期诊断和干预LADA，对于保留残存的胰岛细胞功能、延
3、缓慢性并发症的发生和发展具有实际意义。,2、特发性糖尿病 该型糖尿病呈急骤起病，酮症酸中毒程度较重，胰岛在短期内被彻底破坏，很难恢复。仅少数患者体内可检测到胰岛自身抗体。,自身免疫性糖尿病与特发性糖尿病的鉴别流程,内容提要,I型糖尿病与糖尿病分型目前糖尿病分型面临的问题 糖尿病分型产品介绍,目前糖尿病分型面临的问题,2型糖尿病呈年轻化，I型，2型不容易区分 LADA和2型相似，容易误诊,1型糖尿病病因和诊断,一、病因1、遗传因素：有一定的家族和种族聚集性，目前认为HLA复合物是决定1型糖尿病遗传易感性最重要的因素2、环境因素：病毒感染、生活水平、地域因素等,二、诊断1、T1DM主要依据临床表现
4、而诊断，依赖胰岛素治疗是诊断T1DM的“金标准”。T1DM实际上是一种回顾性诊断，在患者起病初期进行分型诊断有时非常困难。2、目前自身抗体未成为诊断1型的标准，主要用于确诊后分亚型，诊断病因。,成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）,1型糖尿病的自然病程,启动细胞自身免疫，胰岛细胞损伤,第一时相胰岛素分泌消失 (IVGTT),糖耐量异常(OGTT),体液自身免疫(免疫学异常，自身抗体出现)，胰岛素分泌尚可维持正常,触发因素,100%,0%,10%,自身免疫性糖尿病临床数据,1、T1DM的发病率在全球呈上升趋势。2011年IDF统计，在全球1.9亿小于15岁的儿童中，T1DM患者约为49万，每年
5、新诊约7.7万例，年增加率约3.0%。2、随着胰岛自身抗体检测技术的推广，部分既往临床诊断为2型糖尿病患者被重新诊断为LADA。LADA在中国18岁以上新发初诊“2型糖尿病”患者中的比例约为6.0%。3、2013年，中南大学周智广教授等通过对20岁及以上的成人组胰岛自身抗体的筛选，结果提示在中国有大约610万成年人伴有自身免疫性糖尿病。在糖尿病患者中，GADA、IA-2A和Zn T-8阳性率分别为4.1%（190/4671）、1.4%（65/4671)和1.7%（78/4671）。数据显示，中国拥有世界范围内最大的自身免疫性糖尿病人群。,使用个体化的方案达到最佳的血糖控制；避免严重低血糖、症状
6、性高血糖及酮症（酸中毒）的发生；延缓糖尿病慢性并发症的发生；改善患者的生活质量；维持正常的生长与发育。,1型糖尿病治疗的首要目标,1型糖尿病的血糖控制目标,胰岛自身抗体,胰岛自身抗体是胰岛细胞遭受免疫破坏的标志物，是诊断自身免疫性T1DM的关键指标：谷氨酸脱羧酶抗体（glutamic acid decarboxylase antibody, GAD-Ab）蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体（insulinoma-associated 2 molecule antibody, IA-2A）胰岛素自身抗体（insulin autoantibody, IAA）胰岛细胞抗体（islet cellantibody
7、, ICA）锌转运蛋白8抗体（Zinc transporter 8 antibody, ZnT8-Ab）,胰岛自身抗体,ICA由于检测方法难标准化, 目前临床应用有限。LADA的筛查主要采用GADA。因GADA出现早且持续时间长，临床预测价值已证实 ，加之检测业已标准化，是迄今公认的诊断LADA 最敏感的免疫指标 。其余如IAA、IA-2A 及新近发现的ZnT8A 等阳性对LADA的诊断也有参考价值。,胰岛自身抗体产生时间,谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）,1、在患者出现1型糖尿病临床表现前数年甚至十余年即可出现，是最早出现的自身抗体 。,2、GADA可作为1型糖尿病预测的指标，在初发1型糖尿病患
8、者中，GADA的检出率很高，一般为60%80%，最多的可达96%，而2型糖尿病和正常人中的检出率很低(1%2%)3、国外报道在糖尿病前期个体中有82%的GADA阳性，可作为普查手段，筛查1型糖尿病的高危人群和个体,4、GADA可作为成人迟发自身免疫性糖尿病(LADA)的预测和早期诊断指标，此类患者常可出现GADA的高水平，并稳定维持。单一抗体诊断LADA的敏感性为GADAIA-2AIAA,蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）,1、IA-2A是一种重要的胰岛自身抗体，IA-2A与GADA均是胰岛细胞抗体的组成成分。检测IA-2A对于1型糖尿病的诊断与预测有着重要的临床意义。2、IA-2A对胰岛细胞
9、损害的标志性作用比GADA更具特异性，IA-2A在1型糖尿病初诊后多年仍存在，对1型糖尿病诊断价值较大3、IA-2A主要与经典的1型糖尿病相关，对LADA的诊断价值远不如GADA，在LADA的诊断中，IA-2A的检测需与其它胰岛细胞自身抗体联合进行。4、IA-2A在1型糖尿病患者的一级亲属中抗体阳性预报率为81%，可作为1型糖尿病高危人群筛查指标,胰岛素自身抗体(IAA),1、抗胰岛素抗体有两种：抗胰岛素自身抗体，属自身免疫抗体；使用了外源性胰岛素产生的抗体。2、IAA在新诊断的T1DM患者中的阳性率为40%，多见于儿童（4岁），在成人中的阳性率仅为4%，在5岁以前发生的IAA阳性率达50%，
10、IAA滴度随增龄而降低。3、IAA不是糖尿病的特异抗体，在胰岛素自身免疫综合征、甲状腺疾病也可出现，甚至不少正常人也为阳性。4、单纯的IAA阳性不能作为1型糖尿病的标志，仅表明有进展为糖尿病的自身免疫倾向。IAA水平与T1DM发生的速度呈相关性，高滴度IAA者发病较快,内容提要,I型糖尿病与糖尿病分型目前糖尿病分型面临的问题 糖尿病分型产品介绍,胰岛素抗体检测试剂盒,谷氨酸脱羧酶,蛋白酪氨酸磷酸酶、,糖尿病自身抗体的临床意义,糖尿病自身抗体检测方法,酶标包被板,从左至右依次为：阳性对照、阴性对照、浓缩洗液、酶标工作液2、显色液A、显色液B、终止液,试剂盒主要组成成份,适用于包含450nm及63
11、0nm波长的酶标仪。如Thermo 的MK3 酶标仪，北京普朗的DNM-9602系列酶标分析仪，美国伯乐的CODA全自动酶免分析仪等。,适用仪器,试剂盒采用双抗原夹心免疫分析模式，分别使用GAD、IA-2和人胰岛素特异性蛋白作为固相抗原，辣根过氧化物酶(HRP)标记的相同蛋白作为标记抗原，分别与样本中的谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）和胰岛素抗体（IAA）形成双抗原夹心；经洗涤后，加入显色液，测定其OD值，根据临界值判断样本中是否含有谷氨酸脱羧酶特异性抗体。,检验原理,从冰箱中取出试剂盒及待测样本，将所有试剂及样本恢复至室温（1825）。洗液配制：每瓶浓缩洗液（
12、20）用475ml去离子水稀释，充分混匀，待用。编号：将样本对应包被板按需编号，每板设阴性对照2孔，阳性对照2孔（若酶标仪无630nm波长，用洗液设空白对照1孔）。加样：分别在相应孔中加入阴性对照品、阳性对照品和待测样本100l。温育：用封板胶封板后，37温育30分钟。洗板：揭去封板胶，每孔加入洗液200300l，洗涤6遍，最后一次尽量扣干。加酶：每孔加入100l酶标抗原工作液。温育：用封板胶封板后，37温育30分钟。洗板：操作同步骤6。显色：每孔加入显色液A、B液各50l，轻轻振荡混匀，37避光显色10分钟。测定：每孔加入终止液50l，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪主波长450
13、nm，辅助波长630nm，测定各孔OD值，OD450nm值减去OD630nm值为最终读数（若酶标仪无630nm波长，用空白孔调零后测定各孔OD值）。,操作流程,1、参考值临界值（CUT OFF）=2.1Nx（Nx为阴性对照OD均值，阴性对照OD值0.05按0.05计算）。2、检验结果的解释（1）本试剂盒测定结果中，阳性对照OD值不低于0.8，且阴性对照OD值不高于0.1时，试验结果才有效，否则应重新试验。（2）结果判定：阴性判定：样本OD值临界值，为抗体检测阴性；阳性判定：样本OD值临界值，为抗体检测阳性。（3）如果样本OD值在临界值附近，建议重复试验。,参考值及检验结果解释,1.阴性参考品符
14、合率：用10份阴性参考品进行检定，检测符合率应为（-/-）10/10。2.阳性参考品符合率：用10份阳性参考品进行检定，检测符合率应为（+/+）10/10。3.检测限：用检测限参考品进行检定5次，阳性应为4/55/5。4.重复性：用1份精密性参考品进行检定，CV(%)应不大于10%（n=10）。5.热稳定性：试剂盒各组分37放置6天，应符合上述指标要求。,产品性能指标,自身糖尿病抗体联合检测预测T1DM,1、采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后提取血清用于检测。2、样本储存：样本于28保存，24小时内测定。若需长期存放，应冻存于-20以下，避免反复冻融。冻存样本使用前应恢复至室温，轻轻摇动
15、混匀。若样本有沉淀物形成，应离心去除，确定样本未变质方可使用。3、不建议使用明显溶血、脂血或黄疸样本。,样本要求,糖尿病自身抗体检测的重要作用,2、成人糖尿病患者的分型鉴别 LADA的早期临床表现貌似2型糖尿病，临床经常将LADA误诊为2型糖尿病。干预自身免疫以阻止免疫性胰岛细胞破坏或促进胰岛细胞再生修复是LADA的针对性治疗。抗体检测可以协助鉴别LADA和2型糖尿病。及早对LADA进行正确治疗。,1、青少年糖尿病患者的分型鉴别 1型、2型糖尿病在青年人群中发病率相近。糖尿病自身抗体检测有助于快速鉴别糖尿病类型。1型糖尿病发病急，若没有及时采取措施，可能发生酮症酸中毒，严重时危及生命。自身免疫
16、性T1DM与特发性T1DM也应及时鉴别。,糖尿病自身抗体检测的重要作用,3、预判1型糖尿病患者的发病风险，给予针对性干预措施 T1DM患者出现临床症状时，80%的胰岛细胞已经被破坏。自身抗体可在T1DM临床表现数年前出现，可助于评估T1DM的发病风险。对自身抗体持续阳性患者，进行胰岛素治疗，可有效保护胰岛功能，延缓发病4.5-5年。4、高危人群筛查 HLA基因型和1级亲属患病的人群为高危人群，T1DM的发病率相对较高。专家建议应对高危人群进行定期抗体检查，提早做好预防措施。,糖尿病自身抗体的联合检测,1、在“新诊断的1型糖尿病患者干预研究指南”中（ADA），明确规定了临床上确诊1型糖尿病必须在
17、GADA、IAA、IA-2A及ICA这四种糖尿病相关自身抗体中，至少存在一种以上阳性。2、有人认为ICA的检测缺乏稳定性，通常所用的间接免疫荧光法仅能做到半定量，而推荐使用IA-2A 联合GADA 及IAA的筛选组合。3、至少有一种以上胰岛自身抗体阳性是LADA诊断的重要依据。多种抗体联合检测更有助于鉴别LADA和2型糖尿病。 4、IA-2A 联合GADA 及IAA 两种以上抗体阳性具有68 %的阳性预测价值, 80 %敏感性和100 %特异性,青少年1型和2型糖尿病的鉴别要点,竞争产品介绍,国外产品：1.殴蒙（GADA、IA-2A检测试剂盒）2.RSR（GADA、IA-2A、ZnT8-Ab检测试剂盒）3.Medipan Gmbh （GADA、IA-2A检测试剂盒）4.Biomerica（GADA、IAA、ICA检测试剂盒）国内产品：1.安群生物（GADA、IAA检测试剂盒）2.深圳赛尔（GADA、IAA、ICA检测试剂盒）3.北京科美（GADA、IAA、ICA检测试剂盒）,双抗原夹心法,谢谢！,
