1、1专题 1 基因工程第 1 节 DNA 重组技术的基本工具1. 基因工程的目的是什么，是为了获取目的基因吗？不是。是为了获得更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。2. 基因工程的产物分别叫什么名称？ 转基因植物、转基因动物、转基因微生物3. 基因工程是什么技术？ DNA 重组技术4. 基因工程的操作对象、操作环境、操作水平转基因植物、转基因动物、转基因微5. DNA 重组技术需要哪三种工具？ 转基因植物、转基因动物、转基因微6. 限制酶的全称、限制酶是人工合成的，还是自然界原本就有，在哪儿有？限制性核酸内切酶、主要分布在原核生物中7. 限制酶作用的对象和作用的具体部位 双链 DNA 的磷酸二
2、酯键8. 限制酶是把双链 DNA 分子切割成两个单链，还是切割成两个或若干个双链 DNA 片段后者者者者者者者者9. 酶都具有专一性，限制酶的专一性体现在哪（限制酶的特点是什么）识别双链 DNA 分子的一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。10. 限制酶的作用是什么? 切割 DNA11. 限制酶作用的结果是什么 产生两个或若干个 DNA 片段12. 限制酶切割产生的末端有那两种形式 黏性末端和平末端13. 限制酶识别的核苷酸序列具有反向对称重复排列的特点，通常情况下，在限制酶识别的序列中存在中轴线。如果限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 的两条链分别切开时，产生什么末端？如
3、果限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生什么末端coli DNA 连接酶，414. 用同一种限制酶切割不同的 DNA 分子，产生的黏性末端相同吗? 相同15. DNA 连接酶作用的对象 双链 DNA 片段的磷酸二酯键16. DNA 连接酶是把 DNA 单链连接成一个 DNA 分子呢，还是把两个或多个双链片段连接成一个 DNA 分子 后者17. 基因工程中所用的 DNA 连接酶有哪两种 coli DNA 连接酶，4DNA 连接酶18. coli DNA 连接酶作用于哪种类型的末端 黏性末端19. 4DNA 连接酶作用于哪种类型的末端coli DNA 连接酶，4DNA 连接20. 据图判断，将
4、图中单个核苷酸连接起来使用什么酶，将 DNA 片段连接起来使用什么酶，在图中分别作出标记 oli DNA 连接酶，4D21. DNA 连接酶恢复的是解旋酶切开的键，还是限制酶切开的键_22. 一段 DNA 分子能直接送入受体细胞吗_23. 被称为“分子运输车”的是什么物质_24. 常用的载体是什么_25. 关于质粒要明确的知识点质粒只存在于什么生物体 细菌或酵母菌引物 脱氧核苷酸模板DNA聚合酶作用位置2质粒的化学本质是什么 DNA质粒是双链还是单链 双链质粒什么形状 环状质粒上有基因吗 有为什么说质粒是裸露的 因为没有蛋白质，只有 DNA26. 质粒与目的基因构建的重组质粒（又叫做重组 DN
5、A 分子，基因表达载体）在受体细胞中有哪 2 种存在形式_27. 构建重组质粒必须同时使用哪 2 种酶_28. 具备哪 4 个条件才能充当“分子运输车”能在宿主细胞内稳定保存因连接；有标记基因，以便进行筛选；对受体细胞无害。29. “分子运输车”有哪 3 种_30. 天然质粒能直接用作载体吗_第 2 节 基因工程的基本操作程序31. 基因工程四步曲的名称：_32. 获取目的基因常用方法有哪三种：_33. 目的基因是什么基因：_34. 如果对目的基因的碱基序列完全不知，采用哪种方法获取目的基因_35. 如果目的基因的核苷酸序列部分已知，采用哪种方法获取目的基因利用 PCR 技术扩增目的基因36.
6、 如果基因比较小，核苷酸序列又已知，采用哪种方法获取目的基因_37. 构建基因组文库，必须使用哪两种酶：限制酶、DNA 连接酶38. 构建 cDNA 文库，需要使用哪些酶：反转录酶、DNA 聚合酶39. 由 mRNA 反转录形成 cDNA 的过程如下图，请在空白处填入恰当的名称：40. 构建基因组文库时，从生物细胞中提取的物质，和 cDNA 文库提取的物质一样吗不一样，基因组文库构建时，从生物细胞中提取全部 DNA。41. 为什么 cDNA 文库比基因组文库小（为什么说 cDNA 只保留生物的部分基因）因为基因表达具有选择性某个时期只有部分基因转录成 mRNA，而不是全部。42. 如果想知道生
7、物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，需要构建哪种基因文库？_43. PCR 技术是什么含义：_44. PCR 技术操作的前提是什么：_45. 使用 PCR 技术的目的是什么：_46. PCR 技术操作的条件是什么：_47. PCR 技术操作的环境是什么：_48. 在生物体外，95高温下，双链 DNA 断裂成片段还是解旋成单链呢？如果在生物体内，常温下，使双链 DNA 解旋成单链，怎么操作？ 单链、解旋酶解旋49. PCR 技术利用什么原理：_反转录酶 DNA聚合酶单链 RNARNA链单链 DNA 双链 DNA核酸酶 HDNA链杂交双链350. PCR 反应体系的温度降到 5560会出现
8、什么结果：_51. PCR 使用的 Taq 酶具有的显著特征是什么：_52. DNA 聚合酶在没有模板链和引物的条件下，能把游离的单个核苷酸连接成长链吗？不能（DNA 聚合酶是一种模板链指导下的酶）53. 如果在 PCR 扩增仪中放置一个 DNA 分子，经过 30 次循环，可以产生多少个 DNA 分子 _54. 基因工程四部曲的核心步骤是什么第二步，基因表达载体的构建55. “将目的基因导入受体细胞” ，它的意思是指目的基因直接导入受体细胞吗不是，利用基因表达载体将目的基因导入受体细胞56. 为什么不能将目的基因直接导入受体细胞目的基因在受体细胞中不能维持稳定，不能复制，不能表达57. 怎样使
9、目的基因免于被受体细胞的防御系统摧毁构建基因表达载体58. 构建基因表达载体的目的是什么使目的基因在受体细胞中稳定存在，复制和表达59. 将目的基因插入质粒后，会影响质粒的复制吗？对质粒中原有基因的表达会有影响吗?_60. 基因表达载体包括哪几个组成部分_61. 启动子是与 RNA 聚合酶结合的识别位点，还是与 DNA 聚合酶结合的识别位点， 是控制复制的开始，还是控制转录的开始与 RNA 聚合酶结合的识别位点，是控制转录的开始62. 终止子是控制复制的结束，还是控制转录的结束_63. 标记基因通常是抗生素基因，还是抗生素抗性基因，它有什么功能是抗生素抗性受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目
10、的基因的细胞筛选出来64. 基因工程的受体细胞有哪三种，目的基因来源有哪三种植物细胞、动物细胞、微生物细胞；植物细胞、动物细胞、微生物细胞65. 如果目的基因来自植物或动物细胞，受体细胞是细菌，那么目的基因能够在受体细胞中表达的理论依据是什么_66. 如果目的基因控制合成的产物是糖蛋白，那么受体细胞不能是细菌，为什么糖蛋白是在内质网只真核细胞中，细菌中没有，因此不能用细菌产生糖蛋白67. 受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法就不同，如果受体细胞是植物体细胞，可以采用哪三种方法？农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法68. 如果受体细胞是动物细胞，采用什么方法？_69. 如果受体细胞是细菌等
11、微生物细胞，采用什么方法？_70. 动物的受体细胞通常采用受精卵，而不是体细胞；植物的受体细胞，通常是体细胞（受 精卵也可） ，为什么？因为植物的体细胞仍胞全能性有很大的局限性，动物的受精卵全能性最强71. 80%转基因植物都采用什么转基因方法？_72. 农杆菌转化法适用于哪些植物？_73. 插入到 T-DNA 中的目的基因以什么方式存在于植物细胞中（在中选择）_4随 Ti 质粒独立存在于植物细胞中 随 T-DNA 整合到植物细胞染色体 DNA 上74. 早期的基因工程，常用原核生物作为受体细胞，为什么繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少75. 细菌作为受体细胞，必须经过怎样的处理用 Ca2+
12、处理细胞使细收周围环 A 分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞76. 重组质粒，是通过显微注射的方法导入受体细胞吗，怎么导入不是，将基因表于缓冲一定温度下，促进感受态细胞吸收 DNA，完成转化5专题 2 基因工程第 3 节 DNA 重组技术的基本工具不是。是为了获得更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。转基因植物、转基因动物、转基因微生物DNA 重组技术DNA 分子、生物体外、分子水平限制酶、DNA 连接酶、基因载体（载体）限制性核酸内切酶、主要分布在原核生物中双链 DNA 的磷酸二酯键后者识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。切割
13、 DNA产生两个或若干个 DNA 片段黏性末端和平末端黏性末端和平末端相同双链 DNA 片段的磷酸二酯键后者coli DNA 连接酶，4DNA 连接酶黏性末端平末端和黏性末端，但连接平末端之间的效率比较低。DNA 聚合酶，DNA 连接酶后者不能载体（基因载体）质粒细菌或酵母菌DNA双链环状有因为没有蛋白质，只有 DNA独立在受体细胞中进行自我复制，整合到染色体 DNA 上，随染色体 DNA 进行同步复制。限制酶、DNA 连接酶能在宿主细胞内稳定保存并大量复；有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接；有标记基因，以便进行筛选；对受体细胞无害。质粒， 噬菌体的衍生物，动植物病毒否，需要人工改造第
14、 4 节 基因工程的基本操作程序目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。从基因文库中获取目的基因、利用 PCR 技术扩增目的基因、人工合成目的基因主要是指能编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。从基因文库中获取目的基因利用 PCR 技术扩增目的基因人工合成目的基因限制酶、DNA 连接酶逆转录酶、DNA 聚合酶、限制酶、DNA 连接酶6反转录酶、DNA 聚合酶不一样，基因组文库构建时，从生物细胞中提取全部 DNA。cDNA 文库构建时，从生物细胞中提取 mRNA因为基因表达具有选择性的特点，所以，某种生物发育的某个时期只有部分基因转录成m
15、RNA，而不是全部。cDNA 文库是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术要有一段已知目的基因的核苷酸序列 大量扩增目的基因模板、原料、引物、Taq 酶（热稳定 DNA 聚合酶）生物体外单链、解旋酶解旋DNA 双链复制的原理引物与单链相应互补序列结合耐高温不能（DNA 聚合酶是一种模板链指导下的酶）230第二步，基因表达载体的构建不是，利用基因表达载体将目的基因导入受体细胞目的基因在受体细胞中不能维持稳定，不能复制，不能表达构建基因表达载体使目的基因在受体细胞中稳定存在，复制和表达不会，有可能。如果限制酶识别的核苷酸序列恰好在某个基因中，由于该基因被限制酶切断结构不完整，而无法表达
16、目的基因、标记基因、启动子、终止子与 RNA 聚合酶结合的识别位点，是控制转录的开始是控制转录的结束是抗生素抗性基因，是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来植物细胞、动物细胞、微生物细胞；植物细胞、动物细胞、微生物细胞生物体共用一套遗传密码糖蛋白是在内质网和高尔基体上合成的，这两种细胞器只存在于真核细胞中，细菌中没有，因此不能用细菌产生糖蛋白农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞转化法因为植物的体细胞仍具有全能性，动物的体细胞全能性有很大的局限性，动物的受精卵全能性最强农杆菌转化法双子叶植物和裸子植物，不适用单子叶植物（水稻小麦玉米）繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少用 Ca2+处理细胞使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞7不是，将基因表达载体溶于缓冲液中，与感受态细胞混合，在一定温度下，促进感受态细胞吸收 DNA，完成转化
