1、第九章,常见病原体检测,第一节 标本采集运送,原则：无菌操作、防止污染。不接触消毒剂和抗菌药、立即送检。,1、血液标本,在病人发热初期、高峰期间采集，且在应用抗菌药前。SPS无菌瓶怀疑败血症、毒血症、脓毒血症，在发热期间24小时内多部位多量采血,2、尿液标本,杂菌多，要求晨起中段尿或导尿管无菌操作。,3、呼吸道标本 痰液和鼻咽拭子均要求晨起清水漱口后采集4、粪便标本 取粘液脓血部位送检，怀疑2号病用碱性蛋白胨保养送检。5、脑脊液应及时送检或床边接种，同时做血培养。体腔积液，采量多，做血培养。,6、泌尿生殖系标本 在无菌操作下采样7、创伤、组织、脓肿标本 注意防止皮肤表面污染菌混入，脓肿可穿刺采
2、样。,二、常用检查方法,1、直接显微镜检查 标本直接或离心浓缩沉淀后涂片染色用显微镜观察形态,2、抗原抗体检测 见免疫学检查3、核酸检查（PCR、基因芯片）,4、细菌分离培养,依据可疑细菌培养特性，选择合适的培养基进行培养或分离培养；根据菌落形态、生化反应、染色作出鉴定，有时进一步做药物敏感试验,第二节 病原体耐药性检测,耐药机制（略）药敏试验 药敏试验是测定抗生素在体外抑制细菌生长能力的试验，目的是选择最佳抗生素便于治疗,将含有定量药物的纸片贴在接种测试菌的琼脂平板上孵育24h，根据抑菌圈大小判定是否敏感或耐药。,1、KB纸片琼脂扩散法,药敏结果为临床提供参考意见 “敏感”或“中度敏感” 、
3、“耐药” 选择？药敏试验须先进行细菌培养、分离纯化，时间长。医生可先试用一些药，,注意事项,耐甲氧西林金葡菌MRSA、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌MRSCoN是目前院内感染的重要病原菌。早期进行细菌培养。PCR检测耐药基因,二、耐药菌监测试验,第三节 感染性病原体检测 （自学） 第四节 病毒性肝炎血清学标志检测,病毒性肝炎有7型：HAV HBV HCV HDV HEV HGV TTV甲、丙、丁、戊四型肝炎均会产生特异抗体，IgM型抗体阳性示急性感染或病毒在复制；IgG型抗体阳性示继往感染，传染性降低。抗HAVIgG属保护性抗体，可终生阳性。,抗HCV：输血后肝炎,抗HDV检测须依赖乙肝病毒存在
4、戊肝抗体检查,肝炎病毒和病毒性肝炎的特征 病毒特征 肝炎特征类型 直径(nm) 核酸 所致肝脏病 感染途径 潜伏期 急肝死亡率甲型肝炎 27-32 RNA 急性肝炎 经口 30天 0.1-0.2%乙型肝炎 42-47 DNA 急性肝炎 非经口 60-70天 约1% 慢性肝炎 肝硬化。肝癌丙型肝炎 30-60 RNA 同上 非 经口 50天 不到1%丁型肝炎 35-37 RNA 同上 非经口 70天 1-2%戊型肝炎 27-34 RNA 急性肝炎 经口 40天 1-2%,乙肝血清学标志,HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb HBcAb即“二对半”,HBsAg（+）示急慢性乙肝或携带者，
5、具有传染性 ? ?HBsAb（+）示继往感染，现已恢复。HBsAb属保护性抗体 有中和作用。HBeAg（+）示病毒在复制，有强传染性。且可胎传。HBeAb（+）示病毒复制减少，传染性降低。一般认为HBeAb无保护性。HBcAb（+）示病毒感染且复制，具有传染性（特别是IgM阳性）。HBcAb无保护性。,“大三阳”即HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+），“小三阳”即HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）。乙肝标志在不同病程中呈现不同的变化。抗原阴转、表面抗体阳性示为好现象。,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-Hbe 抗-HBc 临床意义 过去和现在均未感染HBV +
6、曾感染HBV，急性感染恢复期 + + 同上 + HBV感染已康复 + + + 既往感染，急性HBV感染恢复期 + 同上 + + 急性HBV感染，慢性携带者 + + + 急性HBV感染，趋向恢复 + + + 急性或慢性乙肝，传染性强 + 急性HBV感染早期 + 急性HBV感染早期 + + 同上 + + + 急性感染中期 + + + + 急性感染趋向恢复 + + 同上 + 同上 + + HBV感染已恢复,第五节 STD病原体检测 P437/458,病原体：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、 淋球菌、HIV、HPV、真菌、原虫,WHO列入20余种（含病毒性肝炎）,我国列入的STD有8种：梅毒、淋病、艾滋病
7、、生殖器疱疹、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、性病性肉芽肿、,1、艾滋病,AIDS定义：病死率高目前无特效药，无预防疫苗,26,HIV检测：病毒标志检测：分离病毒组分免疫标志检测：抗HIV-1.2、P24非特异性检测：CD4、T细胞亚群,27,28,初筛（ELISA、IFA、RIA） 确证：免疫印迹试验,至少同时测两种抗体(P24、gp120)阳性,方可判断HIV感染,HIV抗体确认实验结果,典型的HIV-2血清阳性反应,初筛检测阳性标本,两种初筛试剂,阴性报告,阴性报告,阴性反应,一阴一阳,阳性反应,免疫印迹法WB-1/2混合型,复核,报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸,阴性反应,
8、可疑反应,HIV-2 阳性反应,免疫印迹法WB-2,阴性报告,出现gp36,阴性反应,可疑反应,HIV-1 阳性报告,HIV-1 阳性反应,每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性,HIV抗体确认实验流程图,2、梅毒,病原体为螺旋体，传播途径也是性接触、血液、母婴。血清学检查 有RPR、USR、TRUST、TPPA等。阳性为梅毒感染，须用TPPA或暗视野螺旋体检查进行确定,3、淋病,病原体为G-双球菌，传播途径为性接触和胎传。直接涂片或厌氧分离培养找到G- 双球菌可确诊为淋病PCR快速特异,第十章 其它检测包括基因诊断、流式细胞术、染色体检查,基因诊断定义 以DNA、RNA为原料，检查目标基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断 常用技术有： 核酸分子杂交、PCR、限制性片段长度多肽性分析、DNA测序等,应用范围 感染性疾病：乙肝、丙肝、结核菌、淋菌基因突变 ： 如血友病、血红蛋白分子肿瘤相关基因： ras癌基因 、 抑癌基因p53法医鉴定 如亲子关系、DNA测序,流式细胞术与标记免疫学结合应用于肿瘤及血液病诊治染色体检查多应用于XYY综合征、白细胞诊治。,重点提示标本采集运送原则药敏试验定义、选择甲乙丙肝炎病毒检测意义STD病原体检查意义,The end!,
