1、生物治疗中心 刘焕,肿瘤自体免疫细胞治疗,主要内容,细胞治疗基本原理免疫细胞和细胞群抗癌谱细胞制备流程细胞治疗适应和禁忌症,生物治疗是指通过应用各种生物制剂和手段，调节和增强机体自身免疫和抗癌能力，达到抑制和杀灭癌细胞的一种新型癌症治疗方法。1985年起，美国NIH就把肿瘤的生物治疗正式列入肿瘤综合治疗的第四大模式。2000年在美国举行的“国际肿瘤生物治疗及基因治疗年会”会议总结报告曾指出：“生物治疗是目前知道的唯一的一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的世纪。”,肿瘤细胞免疫治疗的基本理论1、免疫监视学说当组织内有癌变细胞时，大量免疫细胞（如NK、 、 CD4+ 、 CD
2、8+）识别并将其清除 肿瘤细胞发生变异并逐渐耐受机体的杀伤作用 一段时间后产生大量的肿瘤变异体 逃脱机体杀伤的变异体株不断增殖，募集调节性细胞维持免疫耐受，成为肿瘤。,2、免疫雕刻在肿瘤发生过程中的作用肿瘤往往带有其起源免疫环境的印迹，“免疫印迹”导致产生能更好地承受机体免疫系统抗肿瘤作用的肿瘤细胞，在这个过程中免疫原性高的肿瘤细胞被清除，遗留下来的是那些能够在有免疫能力的个体中生存的变异体称为免疫系统对肿瘤的免疫雕刻。,3、肿瘤的免疫编辑免疫清除 如果机体免疫系统能够成功的清除发展中的肿瘤，该过程称为“完全的编辑过程”。免疫平衡 如果免疫细胞和细胞因子不能完全杀伤肿瘤细胞，免疫系统和肿瘤细胞
3、的相互作用进入动态平衡过程，称为免疫平衡。免疫平衡的过程可能是肿瘤免疫编辑中时间最长的阶段，有时甚至长达数年。,免疫逃逸残留的肿瘤细胞通过遗传学或表达遗传学变化的结果是获得对免疫监测和免疫清除的不敏感性，并开始具有不受控制的自主增殖能力，称为免疫逃逸。此时，免疫系统不仅对肿瘤无能为力，而且出现免疫细胞或免疫因子促进肿瘤细胞生长和转移的可能性。,肿瘤免疫逃逸机制1、淋巴细胞因素T辅助细胞缺乏抗肿瘤T细胞数量不足T细胞的肿瘤细胞亲和性不足T细胞耐受性T细胞传导信号下调T细胞与肿瘤细胞接触时发生凋亡T细胞不能进入肿瘤基质Treg细胞的抑制,2、肿瘤细胞因素肿瘤抗原表达不足HLA表达不足肿瘤产生局部免
4、疫抑制因子缺乏凋亡和破坏途径肿瘤相关免疫抑制细胞的免疫抑制作用,免疫细胞和细胞群抗癌谱1、NK细胞：对不表达MHC分子的肿瘤效果好2、T细胞：各种肿瘤，对呼吸系统、消化系统和生殖系统以及部分血液恶性疾病疗效好3、NKT细胞：对消化系统尤其是肝癌和呼吸系统肿瘤以及头颈部肿瘤效果好4、树突状细胞：成熟DC可与各种细胞联合应用，增强抗肿瘤免疫效果5、CIK细胞：各种肿瘤，对低表达MHC分子更有效6、树突状细胞疫苗：可以预防和治疗相应的各种肿瘤7、CD3AK细胞：免疫原性较强的肿瘤（具有T细胞受体（TCR）除外）8、巨噬细胞：型M具有一定的抗肿瘤作用，可与其他免疫细胞联合应用,1、NK细胞表型鉴定NK
5、细胞具有表面分子标记，其主要表面标志是CD16和CD56。因此，可以通过CD16和CD56将其从其他淋巴细胞中区分开来进行检测。 NK细胞为CD3-CD19-CD16+CD56+。前提为造血干细胞。主要分布在外周血、脾和肝。NK细胞缺陷的鼠易发淋巴瘤。,NK细胞瑞吉氏染色图片,2003年，美国匹兹堡大学肿瘤研究所Barry等人用NK细胞对15例转移性乳腺癌进行回输，结果4例完全缓解，病人能耐受此项治疗，无毒副作用。 2004年，德国法兰克福大学医院Koehl等人用NK细胞+IL-2对3例急性淋巴细胞白血病干细胞移植病人进行治疗，结果患儿能充分耐受此治疗。 2005年，美国明尼阿波利大学肿瘤中心
6、Miller等人用NK细胞联合环磷酰胺和氟达拉滨治疗19例急性粒细胞型白血病结果有5例出现血液学完全缓解。 2008年，美国芝加哥Risb大学医学中心Arai等人用同种异基因细胞系NK-92治疗12例晚期肾癌和黑色素瘤病人，结果1例完全缓解，1例稳定，1例为混合反应。,2、T细胞表型鉴定 含有肽链的T细胞称为T细胞，主要分布在皮肤表皮和黏膜上皮，是介于固有免疫和适应性免疫之间的MHC非限制性T细胞，T细胞能识别非肽类分子包括CD1分子呈递的糖脂、某些病毒的糖蛋白，分枝杆菌的磷酸糖和核苷酸衍生物、HSP等。通过释放穿孔素、颗粒酶及Fas/FasL途径杀伤肿瘤细胞 。,皮肤、小肠、肺等粘膜及皮下组
7、织。对多种肿瘤系包括NK细胞敏感和NK细胞抵抗的肿瘤细胞具有杀伤溶解作用。,T细胞瑞吉氏染色图片,2007年，日本东京女子医学大学泌尿科Kobayashi等人用自身T细胞治疗7例进展期肺癌，治疗后患者T细胞明显增多，治疗无明显毒副作用。 2008年，法国Bennouna等人用自身T细胞（8109）+IL-2治疗10例转移性肾癌患者，6例患者治疗后25.7周内病情稳定，患者除了出现感冒样症状外无明显毒副作用。,3、NKT细胞表型鉴定 自然杀伤性T细胞(natural killer T cells，NKT细胞)是免疫细胞中一个具有特定标志的T 细胞亚群。 NKT 细胞表面既表达T 细胞表面标志，如
8、CD3、TCR( 小鼠为V14V8，人类为V24V11), 又表达NK 细胞的表面标志，如NK1.1、CD16、CD122 等；,4、树突状细胞（dendritic cell, DC）DC是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞，是机体免疫系统的控制者，当体内有细胞发生恶变时，将这些信息及时传递给免疫系统，将恶变细胞从体内清除出去。但由于体内DC含量少，难以满足临床应用的需要，因此获得大量成熟的DC是临床应用的基础。,融合蛋白致敏的人树突状细胞,应用负载肿瘤抗原的树突状细胞能够1、激发机体产生肿瘤特异性CTL2、有效地杀伤肿瘤细胞3、建立持久的抗肿瘤的特异性免疫应答,5、细胞因子诱导的杀伤细胞（Cy
9、tokine-induced killer cell, CIK）由-IFN、TNFa 、CD3单抗、IL-1、IL-2等在体外诱导并大量扩增的具有杀伤肿瘤活性的细胞NK样T淋巴细胞1991年斯坦福骨髓移植中心首先报道1994年Schmidt-wolf报道了体外大量增殖CIK细胞的方法。是目前国际上广泛应用的肿瘤免疫治疗手段Lancet 2000:356:802 76例肝癌术后复发率降低,,CIK细胞杀伤肿瘤的作用机制,CIK细胞,细胞培养实验场所,细胞培养场所条件: 符合GMP要求 按照品质管理架构之模式管理。,GMP细胞培养/治疗流程 实验室管理流程 生物安全实验流程 消毒程序与周期流程 维
10、护和性能验证程序,设备3Q品质验证 设备清洁和维护保养 试剂、耗材的外购品质检测流程,最终细胞产品检测流程: 用常规方法进行细菌和真菌培养试验 用鲎试剂法进行内毒素检测 用功能性杀瘤实验法进行杀伤活性检测 用流式细胞仪进行表面标记检测 用常规方法检测细胞总数、细胞存活率、特定生物活性效价,分离单个核细胞,离心分离后的白膜层,分离后的细胞转入培养袋,将细胞放入培养箱,观察细胞,细胞培养期间取样检测,送检样本相关检测项目细菌、真菌培养肺炎、解脲支原体革兰氏染色细胞计数检测,提交成熟及合格的细胞制剂,适应症,主要用于恶性黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、各种肺
11、癌、喉癌、鼻咽癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等实体瘤手术后防止复发。也可以用于多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤和白血病等血液系统恶性肿瘤缓解期进一步预防复发；还可以用于上述实体瘤缓解期进一步巩固治疗或上述晚期肿瘤配合放化疗、介入治疗、热疗等方法，达到延长生存期、提高生活质量和控制肿瘤进展的目的。,禁忌症, 年龄小于6岁 怀孕或哺乳期妇女 器官功能衰竭者 脏器移植者 严重自身免疫性疾病患者，并长期使用或正在使用免 疫抑制药物的自身免疫性疾病患者 不可控制的感染性疾病 对本治疗中所用生物试剂过敏者 无法抽取血液的肿瘤病人 T细胞肿瘤病人 精神疾病者，发生急性肝炎或其他急性感染病活动期 因患者病情恶化、或患者产生无法忍受的副作用,谢谢大家！,
