1、1文件编号：GBHLAB/WSWSOP001东莞市高埗医院作业指导书 第 1 页 共 1 页第 1 版 第 0 次修改主题：危象值三级报告制度 颁布日期：2011 年 11 月危象值三级报告制度1 目的规范危象值三级报告制度。2 适用范围适用于血液、CSF、胆汁和胸腹水等无菌部位标本出现有细菌生长时的报告制度。3 职责检验科微生物组技术人员负责危象值三级报告的及时性与记录。4 危重病人的三级报告程序第一级：告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；第二级：报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；第三级：报告正式鉴定和药敏试验结果。2文件编号：GBHLAB/WSWSOP0
2、02东莞市高埗医院作业指导书 第 1 页 共 3 页第 1 版 第 0 次修改主题：标本的采集、运送、 颁布日期：2011 年 11 月保存和处理 标本的采集、运送、保存和处理1 目的正确采集和处理标本是实验室取得正确结果的前提，必须予以重视。但对标本采集的方法和时间，标本的来源，实验室常不能加以控制，实验室人员有责任通过各种方式，指导医师和护士正确采集标本。特制定以下原则，以便统一标准执行。2 适用范围适用于检验科人员对临床送检标本的合格判断与指导。3 职责检验科微生物组技术人员负责核对标本是否合格及标本处理与接种。4 注意事项41 标本管理的安全警示411 所有标本的采集、运送和处理应在无
3、菌操作，防止污染原则下认真进行。412 已采集原始标本都应置于防漏、密封的容器中运送，含有明显区分各部门文字标志。413 带针头的注射器运送标本到实验室，用无菌试管或防护装置套住注射针，再置于防漏塑料袋中运送。42 标本的选择和采集421 避免来自寄生菌的污染，应当保证每份标本代表感染过程。健康宿主在感染的许多部位也可出现的正常菌丛，主要来自皮肤、黏膜和呼吸道，它若过早、过度生长，掩蔽了真正的病原菌，干扰培养结果解释。422 选择正确的解剖部位、合适时间、合乎规程技术，采集标本。423 活组织或针筒抽取是厌氧菌培养首选采集标本方法，但绝不可冷冻，宁可在室温中保存。424 采集足够量标本，材料不
4、足可能产生假阴性结果。425 每份标本都应标记患者姓名、送检号码、材料来源、具体部位、日期、时间以及相关临床信息。426 标本应置于有特殊标记、有助疑似病原菌生存、不易泄漏及防止潜在性生物危险的容器中。43 标本运送3431 已采集标本，常规细菌学检验，不超过 1 小时送交实验室，延迟运送影响病原菌检出。432 常规性细菌培养标本保存在 4也不能超过 24 小时。433 包括厌氧菌培养的临床细菌检验标本，运送时间与原始标本的量有关，标本量少应加快运送，可在 1530min 内送达。不能及时运送组织标本必须保存在厌氧环境条件下，25，可以保存 2024 小时。434 如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌
5、、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。脑脊髓液、生殖道、眼睛、内耳标本绝不可以冷藏。 5 标本采集及保存要求51 下呼吸道分泌物（痰液）令患者早上起床后用清水濑口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中，及时送检。52 尿液（中段尿）导尿法 、中段尿采集法、肾盂尿采集法 、膀胱穿刺尿采集法。护理人员协助采取中段尿约 3ml 入无菌杯中，及时送检。53 粪便取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中，如为稀水便，可直接收集于玻璃管中，及时送检。54 眼、耳、鼻、喉拭子将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份） ，然后采取可疑部
6、位的分泌物，倒悬于无菌试管内,及时送检。55 脓液用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取一些，然后将棉拭置于无菌试管中，及时送检。56 血液a)凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗生素前采血，如已使用抗生素，应尽量选择抗生素在体内浓度最低时采血，应在病人第二次使用抗生素之前采集血培养标本。当然在病人发热或寒颤时采集也可。b)成人每次采血 510ml，小儿采血 23ml；c)严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。d)从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，同时要及时送检。57 穿刺液：胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液严格无菌抽
7、取后，注入含肝素抗凝的无菌试管中，轻轻颠倒试管 10 余次，使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的，或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。58 胆汁由专科医生以无菌方法取引流液 10ml 注入无菌试管。59 脑脊液以无菌方法取脑脊液 3-5ml，置无菌试管内，常温保存送检，如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内，及时送检。510 生殖器官标本阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。如疑为淋病4奈瑟菌感染，做培养检查时，采集的标本应床旁接种并及时放入孵箱培养。511 烧伤标本以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中.512 支原体（解脲、人型）培养+药敏的标本采集a)
8、支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应尽快接种支原体运送培养基送检。b)男性：用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内 2.5-3cm。6 细菌结果发出时间 61 一般标本的培养+药敏时间：3-4 天（不含当天） 。 62 血液标本：7 天(有菌生长即电话报告 ). 63 支原体培养+药敏：2 天64 衣原体抗原检测：1 天65 真菌培养+药敏：2 天( 只培养鉴定)，3 天(含药敏)。 66 厌氧菌培养：6 天(无菌生长 )，10-14 天( 有菌生长)7 标本拒收标准51 支原体培养、鉴定、计数、药敏操作：若送检标本不是运送培养基送检则为不合格标本。52 找抗酸杆菌：穿刺液标本如发现严重
9、凝固则拒收。53 脑脊液培养：如标本为非无菌管采集则拒收。54 中段尿培养：如标本为非无菌管采集则拒收。55 下呼吸道标本培养：挑取痰标本直接涂片镜检，WBC10/LP，上皮细胞25/LP不适合做细菌培养。56 脓液及创伤分泌物培养：如标本为非无菌管采集则拒收。57 穿刺液培养：如标本为非无菌管采集则拒收。58 生殖道分泌物培养：如为淋球菌培养没有直接接种到淋球菌培养基上则拒收。59 各类培养标本原则上都要求无菌采集并及时送检、及时接种、及时培养，不能保存。除非特殊情况可置于冰箱保存，对分离怕冷的细菌时，应注意标本的保暖。8 相关性文件全国临床检验操作规程第 3 版5文件编号：GBHLAB/W
10、SWSOP003东莞市高埗医院作业指导书 第 1 页 共 2 页第 1 版 第 0 次修改主题：血液及骨髓标本的处理 颁布日期：2011 年 11 月血液及骨髓标本的处理1 目的规范血液及骨髓标本的采集与处理。2 适用范围适用于检验科人员指导临床科室血液及骨髓标本的正确采集，接收后的处理。3 职责检验科微生物组技术人员负责指导临床正确采集和标本的验收及处理。4 骨髓无菌操作抽取 12ml，注入双相培养瓶（与血液做法相符）5 血液a)凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗生素前采血，如已使用抗生素，应尽量选择抗生素在体内浓度最低时采血，应在病人第二次使用抗生素之前采集血培养标本
11、。当然在病人发热或寒颤时采集也可。b)成人每次采血 510ml，小儿采血 23ml；c)严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。d)从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，同时要及时送检。6 操作步骤取标本注入双相血培养瓶后立即送实验室，放35孵育，送实验室之前，不可放冰箱暂存。实验室接到送检的血培养瓶后，登记，编号，写上日期后摇匀，每天观察是否长菌，按以下方法处理：6.1 血培养瓶经1218小时35孵育后，在血平板或巧克力平板上盲目传种一次。这种方法可提早检出阳性标本6.2 盲目传种后，培养瓶继续孵育至第7天，每日早晨取出检查有无生长，无菌要摇匀，以
12、下几种情况有助于发现阳性标本66.2.1 均匀混浊，发酵葡萄糖产生气泡大多数为革兰氏阴性杆菌。6.2.2 微混浊有绿色变化：肺炎链球菌。6.2.3 血球层上面出现颗粒状生长，有自下而上的溶血：溶血性链球菌。6.2.4 混浊瓶有胶冻状凝固：病原性葡萄球菌。6.2.5 表面有菌膜，膜下呈绿色混浊：枯莫杆菌/假单胞菌。6.3 肉眼见有细菌生长，做如下处理6.3.1 取生长物涂片，做革兰氏染色；电话报告给临床。6.3.2 接种血平板、巧克力等分纯。6.3.3 药敏试验及生化鉴定。6.4 分离培养：培养瓶疑有细菌生长时，应随时作分离培养，生化鉴定及药敏；无细菌生长表现的培养瓶，在观察的7天中，最少应作2
13、次分离培养。未见生长，发“培养七天无菌生长”报告7 常见的病原菌7.1 革兰阳性菌： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌、A群B群链球菌、草绿色链球菌、念珠菌、炭疽芽胞杆菌、厌氧链球菌、产气荚膜梭菌、丙酸杆菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、产单核李斯特菌 7.2 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌、伤寒及其他沙门菌、沙雷菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、鼠疫耶氏菌、假单胞菌属、不动杆菌、流感嗜血杆菌、布氏杆菌属、野兔热弗朗西斯菌、伯克霍尔德菌、胎儿弯曲菌、拟杆菌属、芽胞梭菌属8 注意点8.1 血液标本应尽可能抽取患者动、静脉血管中血液8.2 血液标本采集自留置管、中心静脉导管内，应在申请
14、检验单上注明8.3 双相血液培养瓶不要误认为瓶内琼脂斜面上出现菌落提示细菌生长，应当每日观察液体培养基层，出现前述现象，即予移种处理8.4 双相血液培养瓶中琼脂斜面上出现菌落，需经革兰染色证实为单一种形态、染色的细菌才可用于鉴定及药敏8.5 血液标本在采集、接种运送过程中考虑有潜在性被污染可能，尤其在静脉穿刺术中，皮肤消毒应严格按规程操作，一般污染率应少于 2%3%，发现高污染率立即进行调查并改进8.6 常见污染菌如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌、芽胞杆菌属菌种、丙酸杆菌属菌种，若单份培养瓶出现上述菌种生长，象征污染的可能，如果是多份，不同部位检出上述菌种，提示有临床意义的菌血症8.7 菌血症患
15、者中有 5% 10%是多菌性菌血症，进行次代培养，应提供适用于肠道的，非发酵菌、需氧性、厌氧性和苛养性细菌生长培养基，以及基培养条件，以免遗漏9 相关性文件7全国临床检验操作规程第 3 版文件编号：GBHLAB/WSWSOP004东莞市高埗医院作业指导书 第 1 页 共 2 页第 1 版 第 0 次修改主题：脑脊液标本的处理 颁布日期：2011 年 11 月脑脊液标本的处理1 目的规范脑脊液标本的采集。2 适用范围适用于检验科人员指导临床科室脑脊液标本的正确采集，接收后的处理。3 职责检验科微生物组技术人员负责指导临床正确采集和标本的验收及处理。4 标本采集 以无菌方法取脑脊液3-5ml，置无
16、菌试管内，15分钟内送检，绝不可冷藏；如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内，及时送检；有3支管者取第1管做培养；如标本为非无菌管采集则拒收。每种检验需要最小量：细菌培养1ml，真菌2ml，抗酸杆菌2ml 。5 检验步骤51 澄清者用无菌操作倒入肉汤增菌或3000r/min离心10-15分，取沉渣增菌，48h后无菌者报告“无菌生长” 。5.2 混浊者在增菌的同时，离心取沉渣涂片并接种血平板，涂片找细菌，抗酸杆菌或新型隐球菌。5.3 常用血平板和巧克力平板三区划线不用烧环，置35 CO2环境中培养1824小时，巧克力平板CO2环境培养，有利于检出脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及嗜血杆菌；血平板CO2环境培
17、养，易于识别-溶血链球菌和肺炎链球菌；接钟中国蓝平板以分离、鉴别革兰阴性杆菌，作特殊细菌培养应选择专用培养基。6 报告结果 有菌生长者先作危象值报告，涂片有菌者可报告“发现革兰氏性杆菌/球菌”或“发现抗酸杆菌”或“墨汁染色发现新型隐球菌” 。待药敏试验可观察到便尽早告知药敏。培养两天无菌报“无细菌生长” 。87 常见病原菌 7.1 革兰阳性菌： 金黄色葡萄球菌、A群B群链球菌、肺炎链球菌、消化链球菌、炭疽芽胞杆菌、结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、新型隐球菌、白色念珠菌 7.2 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌属、假单胞菌属、脑膜败血性金黄杆菌、无色杆菌属、拟杆菌属8 相
18、关性文件全国临床检验操作规程第 3 版9文件编号：GBHLAB/WSWSOP005东莞市高埗医院作业指导书 第 1 页 共 2 页第 1 版 第 0 次修改主题：尿液标本的处理 颁布日期：2011 年 11 月尿液标本的处理1 目的规范尿液标本的采集。2 适用范围适用于检验科人员指导临床科室尿液标本的正确采集，接收后的处理。3 职责检验科微生物组技术人员负责指导临床正确采集和标本的验收及处理。4 采集指征4.1 有典型的尿路感染症状；4.2 肉眼脓尿或血尿；4.3 尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性；4.4 不明原因的发热，无其他局部症状；4.5 留置导尿管的患者出现发热；4.6 膀胱排空功
19、能受损；4.7 泌尿系统疾病手术前。5 标本收集 5.1 正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养最大的问题是杂菌污染。正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见的病原菌。因此要作好尿液细菌学检查，首先应注意标本收集问题。取经尿道排出的中段尿，细菌数不会超过10 45/ml。5.2 中段尿采集：是临床上最常用的方法。女病人先用肥皂水或0.1%高锰酸钾水溶液冲洗外阴部及尿道口,用无菌纱布擦拭,最后用手指将阴唇分开排尿;男病人应翻转包皮冲洗，用肥皂水或2红汞或0.1%新洁尔灭消毒尿道口，再用无菌纱布或干棉球拭干，叫病人排尿。将尿液分成三段，第一段排掉，收集中段尿35ml留入试管
20、中，立即加塞盖好送检。5.3 婴儿则先消毒其阴部，将无菌小瓶直接对准尿道以胶布粘上固定于皮肤，待排尿后立即送检。5.4 导尿管采集尿液：一般用无菌导尿管取得尿液1015ml，盛3-5ml于无菌试管中，不10能混入消毒剂，否则影响细菌生长。虽该可减少污染，但由于导尿有将微生物引入膀胱的危险，因此除非必要，应避免用此法。5.5 对于留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用无菌注射器斜穿管壁抽吸尿液，或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。5.6 做结核菌培养的尿液标本，应收集24小时全部尿液，并将沉淀部分盛于洁净瓶内送检。5.7 婴幼儿
21、中段尿采集困难或培养结果与病情不符时，可经耻骨上皮肤穿刺采集无污染的膀胱内尿液。5.8 送检标本以晨尿为佳，但室温较高时，应采集即时尿液，但尿液在膀胱内至少置留了4小时以上。6 检验步骤61 尿定量培养 采用接种环涂沫法：使用特制的接种环（直径6mm） ，每接种环含1/100ml或1/1000ml ，使接种环沾满尿液，接种到血平板三区划线不用烧环。在分离培养基上分离培养，生长的菌落数乘以100倍或1000倍，等于每ml尿中的菌数。如菌落生长过多不易计数时，则报告大于10 5/ml。62 G+10 4/ml，G 10 5/ml须做药敏鉴定。63 作淋菌培养不用计数，取沉渣（3000rmin1015mins ） ，接种专用培养基。7 报告结果有菌生长者做鉴定及药敏，培养两天无菌报“无细菌生长” 。8 常见病原菌8.1 革兰阳性菌： 金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌属、链球菌属、棒状杆菌属、分枝杆菌属、真菌 8.2 革兰阴性菌：淋病奈瑟菌、肺炎克雷伯菌、沙雷菌属、大肠埃希菌、变形杆菌属、肠杆菌属、沙门菌属、假单胞菌属9 相关性文件全国临床检验操作规程第 3 版
