1、蓉生 BCG-PPD 的相关知识及应用,童年立志：把 踢出地球,先了解几个问题,1、结核病的严重性：2011年3月21日，卫生部发布了“全国第五次结核病流行病学现场调查结果”,数据表明，中国现在超过500万名结核病活动性患者，而感染结核病菌的人数则超过5亿人。“结核病离我们并不遥远”，钱秉中说，“只要你呼吸，你就有可能感染结核病”。(3月24日世界结核病防治日)2、卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）是检测结核杆菌感染的体内诊断试剂（试剂分为体内、体外），国药准字S号，（S生物制品；H化学药品；Z中药）不是疫苗，是生物制品，公司有生物制品资质就可以经营，按生物制品的要求进行管理、冷链运输和储存
2、。,3、卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）和结核菌素纯蛋白衍生物的区别： 卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）系用卡介菌（卡介苗-减毒牛型结核分枝杆菌）经培养、杀菌、过滤除去菌体后纯化制成的纯蛋白衍生物，用于结核病的临床诊断、卡介苗接种对象的选择及卡介苗接种后机体免疫反应的监测。也称牛型-PPD，成都所生产。 BCG-PPD主要用于12周卡介苗阳转率的考核及流行病学的调查（学校）、结核病人的诊断。 结核菌素纯蛋白衍生物（TB-PPD）系用结核分枝杆菌（结核病人分泌物）经培养、杀菌、过滤除去菌体后纯化制成的纯蛋白衍生物，用于结核病的临床诊断、卡介苗接种对象的选择及卡介苗接种后机体免疫反应的监测
3、。也称人型-PPD（H-PPD），北京祥瑞有可能今年年底出产品 BCG:卡介苗、TB:结核菌、PPD：纯蛋白衍生物,4、理解同源性的观点： 70年代有关学者提出了卡介菌菌型同源性的观点，即各种菌型提取的纯蛋白衍生物具有交叉反应，但对某一类结核杆菌的检测，同一菌型的纯蛋白衍生物（PPD）特异性较好，但副反应较大。,BCG-PPD BCG 交叉反应点同源性观点：卡介苗接种考核特异性更好,5、BCG-PPD试验操作方法为孟都氏法（孟都氏法：前臂掌侧中部皮肤用75%酒精棉球消毒（不用碘酒，以免出现假阳性反应），待干后，用1ml注射器皮内注射0.1ml的BCG-PPD）并在48至72小时后观察结果。 B
4、CG-PPD皮肤试验反应呈阳性属第型（迟发型）免疫变态反应。（接种疫苗从抗原到抗体的免疫过程也是一个免疫变态反应）,一、结核病的概况二、国家对结核病防控的重视和支持三、结核病的检查方法四、蓉生BCG-PPD效价研究五、蓉生BCG-PPD 6 大优势六、蓉生BCG-PPD的应用及诊断标准七、蓉生BCG-PPD的包装情况八、实操经验,一、结核病的概况,结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，人体的许多脏器都可以发生，其中以肺部最常见，肺结核分为原发性肺结核（I型）、血行播散型肺结核（II型），浸润型肺结核（III型），慢纤维空洞型肺结核（IV型）、结核性胸膜炎（V型）等。活动性结核病人-有症状、有
5、传染性。 感染了结核杆菌的人，一生中约有5%-10%的几率发病。结核病是全世界由单一致病菌导致死亡最多的疾病，是全球关注的重大公共卫生问题之一。（每年传染病中结核病的死亡人数最多，狂犬病的死亡率最高）,国际数据,根据世界卫生组织2010年全球结核病报告：2010年全球新发结核病患者940万，全球有活动性肺结核病人在2500万以上，每年约有170万结核病患者死亡，其中约有38万患者感染了艾滋病病毒。印度、中国、印度尼西亚、尼日利亚和南非等五国的新发病结核病人数位居全球前五名。,我国结核病患者居世界第二位,全国结核病防治规划指出：我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病患病人数居世界第二位。2
6、009年全国结核病流行病学调查结果显示，中国现有活动性肺结核患者约500多万，每年新发活动性肺结核约130多万例，每年约有13万人死于结核病，严重危害了人民群众的身体健康，已成为重大的公共卫生问题和社会问题。国务院要求各级政府加强对结核病防治工作的领导，制定本地区结核病防治规划及年度实施计划，并给予必要的人力、物力、财力投入支持，做到早发现、早治疗，严防结核病在人群中的感染和暴发流行。,二、国家对结核病防控的重视和支持,传染病防治法结核病防治管理办法全国结核病防治规划关于加强学校结核病防治工作的通知 卫疾控发2003187号中小学生健康体检管理办法 卫医发200837号学校结核病防控工作规范（
7、试行） 卫办疾控发 2010133号,关于加强学校结核病防治工作的通知 卫疾控发2003187号 各省、自治区、直辖市卫生厅局、教育厅（教委），新疆生产建设兵团卫生局、教委： 2003年3月份以来，我国部分省份的学校发生了结核病的暴发流行。疫情的发生，引起了国务院领导的高度重视，要求有关部门要加强学校的结核病防治工作。学生是一个特殊的群体，人员密度大、相互接触较为密切，一旦发生结核病疫情，如处理不及时，易造成暴发流行。为了落实国务院领导的指示精神，加强学校结核病防治工作，控制学校结核病重大疫情的发生，保障学校师生的身体健康，维护学校正常的教学秩序,卫生部、教育部联合发布,二、建立学生健康体检制
8、度，及时发现结核病等传染病患者。认真做好新生入校体检和每年的教职员工健康检查工作，并将结核病检查列入大、中、小学及幼儿园学生以及教职员工健康检查的主要内容。为保证结核病检查质量，由学校所在地卫生行政部门指定经认可的医疗或预防保健机构具体承担结核病检查工作。各级教育、卫生行政部门要定期对学生健康体检的实施情况进行检查和指导。 三、要做好在校学生的结核病治疗和管理工作。对确诊的传染性肺结核病人要实行休学，在家隔离治疗，由家庭所在地结核病防治机构负责病人的治疗和管理，传染性消失后，凭结核病防治机构的诊断证明方可复学；非传染性病人在治疗期间可以继续上学，其治疗由当地结核病防治机构负责，或在当地结核病防
9、治机构的指导下，由校医负责，执行“监督化疗”，确保规则用药。,关于加强学校结核病防治工作的通知卫疾控发2003187号,关于印发中小学生健康体检管理办法的通知卫医发200837号 各省、自治区、直辖市卫生厅局、教育厅(教委),新疆生产建设兵团卫生局、教育局: 为贯彻落实中共中央国务院关于加强青少年体育增强青少年体质的意见精神,做好中小学生健康体检的管理工作,根据学校卫生工作条例、国家学校体育卫生条件试行基本标准、预防性健康检查管理办法等有关规定要求,卫生部、教育部联合制定了中小学生健康体检管理办法。现印发给你们,请遵照执行。 本通知自印发之日起施行。 二八年六月二十七日,卫生部、教育部联合发布
10、,二、健康体检项目(一)病史询问。(二)体检项目。1.内科常规检查:心、肺、肝、脾;2.眼科检查:视力、沙眼、结膜炎;3.口腔科检查:牙齿、牙周;4.外科检查:头部、颈部、胸部、脊柱、四肢、皮肤、淋巴结;5.形体指标检查:身高、体重;6.生理功能指标检查:血压;7.实验室检查:(1)结核菌素试验*;（卡介菌纯蛋白衍生物BCG-PPD试验）(2)肝功能*:谷丙转氨酶、胆红素。注:“*”小学、初中入学新生必检项目;,关于印发中小学生健康体检管理办法的通知卫医发200837号,卫生部、教育部联合发布,关于印发学校结核病防控工作规范（试行）的通知卫办疾控发2010133号各省、自治区、直辖市卫生厅局、
11、教育厅（教委），新疆生产建设兵团卫生局、教育局：根据传染病防治法和突发公共卫生事件应急条例的规定，为加强学校结核病防控工作，卫生部会同教育部制定了学校结核病防控工作规范（试行）。现印发给你们，请遵照执行。 二一年七月,关于印发学校结核病防控工作规范（试行）的通知 卫办疾控发2010133号,二、学校结核病常规预防措施 （一）疾病预防控制机构措施。 1.对学校进行业务技术培训，协助开展健康教育。与教育行政部门共同开展对学校校医、卫生保健教师的业务培训，协助学校开展结核病防治知识的健康教育和卫生宣传工作，定期对辖区学校结核病防控工作进行督导检查和技术指导。 2.为学校师生健康体检提供技术支持和指导
12、。幼儿园、小学、初中新生入学体检需查看卡介苗（BCG）卡痕，并询问是否有结核病密切接触史和肺结核可疑症状，对有结核病密切接触史者开展结核菌素（PPD）皮肤试验；高中和大学新生入学体检和教师常规体检需询问是否有结核病密切接触史和肺结核可疑症状。对体检发现的PPD试验强阳性者（硬结平均直径15mm或有水疱）、可疑症状者或胸部X线检查异常者进行3次痰涂片检查，对痰涂片检查阳性者进行痰培养和抗结核药物敏感性试验。,三、结核病常见的几种检查方法,结核菌素试验（BCG-PPD试验、 TB-PPD试验）（ BCG-PPD试验:最安全、及时、灵敏、特异、 经济、方便）痰的检查（时间长、费用高、操作复杂）胸部X
13、线检查（ X线对身体有危害，卫生部已明文规定：15岁以下的青少年体检时不做X线检查）血沉检查（费用高、操作复杂）,卡介菌纯蛋白衍生物的效价研究,卫生部结核病专家咨询委员会委员中国防痨协会副理事长中华医学会结核病学会副主任委员,钟球 主任医师,成都生物制品研究所党委书记,晏子厚 研究员,一、目前PPD使用争论的问题,BCG-PPD阳性是否结核菌感染？BCG-PPD和TB-PPD 是否等效？,二、结核菌素试验,结核分枝杆菌分为人型、牛型、非州型及田鼠型。前两型（尤以人型标准菌株 H37 RV）为人类结核病的主要病原菌。人型和牛型菌形态相似，对豚鼠皆有强致病力，但人型菌对家兔致病力远较牛型菌为弱。人
14、型菌可产生大量烟酸，而牛型菌则烟酸试验阴性。,结核菌素的历史1882年，德国学者Robert Koch通过染色法 首先发现了结核杆菌。1890年Robert Koch将结核杆菌的代谢产物（Old Tuberculin 即旧结核菌素）提取了出来。目的是用于结核病的治疗，结果令人失望。开始研究其临床辅助诊断的应用。,旧结素（old tuberculin，OT）皮试OT是从生长过结核菌的液体培养基中提练出来的结核菌代谢产物，主 要含有结核蛋白。使用时用12000 的OT稀释液0.1ml（5IU），在左前臂屈侧作皮内注射，经48 72 h 测量皮肤硬结直径，5mm为阴性，59 mm为弱阳性，1019m
15、m为阳性反应，20mm以上或局部发生水泡与坏死者为强阳性反应。,结素的纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）结素的纯蛋白衍化物为纯结素，不产生非特异性反应。PPD-RT23是由丹麦制造供应世界许多国家使用，用于结核病流行病学调查。,我国的PPD来源人型结核菌制成PPD（PPD-C）。卡介苗制成BCG-PPD。0.1ml为5IU，用于临床诊断，硬结平均直径5mm为阳性反应。,三、BCG-PPD的研制,卡介苗的产生1902年Nocard从牛体中分离出一株牛型结核杆菌。法国巴斯德研究院的 (Calmette-Gurin)二位学者发现向培养这株结核杆菌的甘油培养
16、基中加入牛胆汁，则在培养期间杆菌的形态发生变化，并逐渐缓慢地丧失其毒性。,他们从1906年开始采用这种方法，约2-3周传代一次，前后共计13年传了230代，终于获得了一株毒力稳定的减毒株，即今天的卡介苗（BCG)。,四、国外PPD研制现状,PPD已有半个多世纪的研制历史，1928年始于美国，1934 年Seibert 描述了PPD的制备方法，即用PH中性50%的饱和硫酸铵（AS)再次沉淀OT的制备方法，并用于临床。,1941年Seibert和Glenn用AS从结核杆菌的超滤浓缩后的培养滤液中直接沉淀PPD。广泛研制则始于五十年代。,世界上PPD有人型、牛型（强毒株）、BCG等，还有非典型分支杆
17、菌(AMB共41种）。目前人型PPD的国家有美国、丹麦、法国、加拿大、日本、英国等，大多数发展中国家均从丹麦获得PPD。,PPD-RT23是由WHO、UNICEF 委托丹麦NIH (国立血清所）生产的由七株人型强毒结核杆菌共生产的77个亚批合并而成。,H-PPD始于1980年的中国药品生物制品检定所。80年代中期中国药品生物制品检定所及成都生物制品研究所开始研制BCG-PPD。90年代中后期中国药品生物制品检定所进行了非典型分支杆菌的PPD的研制。,六、选择BCG-PPD的原因,BCG接种需效果考核特异、敏感、效期适宜的配套皮肤反应试剂。国际上现已淘汰OT，而PPDRT23及H-PPD（人型）
18、的效果不够理想。在1975、1983年国际生物标准协会就 PPD的菌型同源型的观点。,BCG是人们认识最清、最标化、应用最广泛的分支杆菌。热休克蛋白HSP60或HSP70是PPD的主要抗原成分，具有较好的交叉反应效果，可作为T B流调及TB患者的临床辅助诊断。BCG-PPD的提取对于制造者是比较安全的。,七、BCG-PPD和TB-PPD的效价研究,对象与方法实验的对象：对BCG-PPD敏感人群。实验选定为临床确诊的结核病患者。根据中国生物制品规程要求，BCG-PPD与标准品TB-PPD设对照比较，要连续抽取 3 批产品分组实验，每组不少于15例。本次抽取4 批产品做样品，试验总人数为68人，试
19、验分4组，每组人数1520人。,试剂选用BCG-PPD试验品：由成都生物制品研究所提供的检定合格的样品，批号分别为97-4，97-5，98-1，98-2，规格均为原液（浓缩品），其中蛋白浓度分别为94.18%（1.469mg/ml）、97.47%（2.535mg/ml）、95.40%（1.556mg/ml）、96.14%（2.150mg/ml）。试验时各批浓缩品均用合格的灭菌PBS稀释至50IU/ml，30min内用于人体。,TB-PPD标准品：由中国药品生物制品检定所提供，批号为0010071，规格为50 IU/ml，效期内使用。编码：TB-PPD，批号00010071A；BCG-PPD试验
20、品，批号97-4B，批号97-5C，批号98-1D，批号98-2E。,实施方法：采用同体双臂皮试观察法，用一次性注射器于观察者左右前臂掌测中央处分别作皮内注射0.1 ml（含5IU）的BCG-PPD实验样品及TB-PPD标准品，72h后测量反应结果。,测量标准：以毫米为单位（mm），（测量硬结反应和红晕反应的最大横径最大纵径）2平均直径。实验记录：局部反应硬结的纵横直径。红晕反应的纵横直径。有无异常反应。,结 果通过4组的测量，包括硬结及红晕反应的平均直径、阳性率（硬结反应和红晕反应直径5 mm为阳性）、两臂反应的直径对比、反应一致性统计。四批BCG-PPD与TB-PPD实验结果以硬结为准，经
21、统计学处理无显著性差异（P0.05）。,表1 四批BCG-PPD与TB-PPD的对照试验结果,表2 四批BCG-PPD与TB-PPD硬结反应符合率,表3 BCG-PPD与TB-PPD在四组TB患者的效价比较,结 论,BCG-PPD和TB-PPD二者在硬结及红晕反应平均直径、阳性均径及标准差等方面结果非常接近。 BCG-PPD与标准品TB-PPD硬结反应符合率均为100%，说明二者的临床使用反应结果是一致的（见表2）。,BCG-PPD与标准品TB-PPD平均反应直径及阳性平均反应直径之比均在 10.2范围内，符合中国生物制品规程要求，说明BCG-PPD与TB-PPD反应效价是一致的（见表3），都
22、可用于结核病流行病学调查。,试验发现试验品BCG- PPD（97-4、97-5、98-1）硬结反应平均直径均略小于标准品TB-PPD硬结平均 反应直径，这一结果与菌型同源性原理观点是一致的。,在考核新生儿接种卡介苗后的阳转率方面，BCG-P PD硬结平均反应直径均略高于TB-PPD。所以，BCG-PPD作为从BCG中提取的PPD，用于新生儿接种卡介苗后的转阳考核效果也是最佳的。,蓉生 BCG-PPD,检查结核杆菌感染的最佳选择,五、蓉生BCG-PPD 6 大优势,1、原料：减毒牛型结核分枝杆菌。卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）系从减毒牛型结核分枝杆菌（卡介苗）培养虑液中提取的一种具有免疫反
23、应原活性物质，可引起卡介苗免疫接种者和结核杆菌感染者特异的皮肤反应（卡介苗的产生：1902年Nocard从牛体中分离出一株牛型结核杆菌，后人历时了13年，经过了230余代，终于获得了一株毒力稳定的减毒株，即今天的卡介苗（BCG）减毒牛型结核分枝杆菌）。,蓉生BCG-PPD 6 大优势,2、特异性高：BCG-PPD人体应用观察研究（四川医学1997年第18卷）、BCG-PPD皮试研究（预防医学情报杂志2000年第16卷第二期）表明：BCG-PPD在婴儿BCG接种考核方面，特异性高于结核菌素纯蛋白衍化物（人型-PPD）,在结核（TB）自然感染流调、结核（TB）患者临床诊断方面更安全、更准确。 3、
24、副反应小：系从减毒牛型结核分枝杆菌（BCG）培养滤液中提取，BCG是人们认识最清楚、最标化、应用最广泛的分枝杆菌，BCG-PPD的提取工艺对于制造者和使用者最安全、副反应最小。,蓉生BCG-PPD 6 大优势,4、人体测定:蓉生 BCG-PPD 动物试验合格后，必须再进行人体测定（15人以上），并无一例异常反应者为合格，成品按中华人民共和国药典（2010年版）质量标准检定合格后方可出厂使用，确保质量。 5、第三代PPD:在旧结核素（OT）、结核菌素纯蛋白衍化物（人型-PPD）的基础上，从用料、工艺、检测方法、标准进行全面研究、改进，属最新一代PPD，质量好、安全、及时、灵敏、特异，是大力推广使
25、用的诊断试剂，已得到国内专家、医务人员、患者的一致认可。（一代-OT、二代-人型PPD、三代-BCG-PPD） 6、品牌好：成都生研所是中国生物技术集团总公司属下六大生研所之一，是国家指定研究、生产卡介苗、PPD系列产品的现代化高科技企业，具有完善、迅速、高素质的副反应处理体系。,六、蓉生BCG-PPD的应用及诊断标准,BCG-PPD作用与用途：对已受结核杆菌感染或曾接种卡介苗已产生免疫力的机体，能引起特异的皮肤变态反应。 供结核病的临床诊断、中小学新生入学体检、流行病调查、卡介苗接种对象的选择及卡介苗接种后机体免疫反应效果监测使用。,BCG-PPD用法：标准剂量是5IU BCG-PPD（0.
26、1毫升)，采取孟都氏法进行皮内注射并在48至72小时后观察结果。一个曾经暴露在病菌的人会显示出免疫反应。 PPD测试的结果通过硬结（明显突起的硬化区）的直径（垂直于手臂）来反映。如果不存在任何硬结，结果应记录为0 mm。皮肤的红斑不应加以测量。 孟都氏注射法要求与操作: 前臂掌侧中部皮肤用75%酒精棉球消毒（不用碘酒，以免出现假阳性反应），待干后，用1ml注射器皮内注射0.1ml。每注射1人更换1次消毒针头。注射时针口向上，平刺入皮内，不应过深。注射后应在注射部有小白泡隆起，注射液不得从针口漏出。,PPD观察方法与判断标准：硬结平均直径如小于5mm为阴性，大于等于5mm小于20mm为阳性反应5
27、-9mm为弱阳性(+)，10-19mm为阳性(+)，20mm以上(+)或局部有水疱、坏死、淋巴管炎均为强阳性。PPD试验除引起局部反应外，偶可引起全身反应，但较前者少见。 阴性（-）：硬结平均直径如小于5mm； 弱阳性（+）：硬结平均直径5-9mm； 阳性(+)：硬结平均直径10-19mm； 强阳性（+）：硬结平均直径20mm以上。,七、蓉生BCG-PPD的包装情况,5IU/0.1ml/人份 50IU/1ml/10人份/支 10支/盒 1000支/件,八、实操性,一、客户群体1、医院结核病人的诊断2、CDC、结防所卡介苗12周阳转的考核、 流行病的调查二、流行病的调查（参照疫苗定点接种的方法）1、争取政府政策性支持，发文件和转发上级文件，如山东、安徽、广东、广东湛江2、让地市、县向当地物价局申报皮试试验的收费价格（6-15元/人份）3、规避风险，淡化商业氛围，4、宣传检测的意义，早发现、早治疗，（告知如PPD试验阳性者，X光拍片、痰检、结核病 药物免费）5、知情、自愿、自费；要不要告知书？如要，冠名发告知书6、利益分配7、专业人员到位和高度重视8、预防群体性反应，避免空腹和排队检测实操性最关键是利用好文件，争取当地重新项目报价！,龙成人真诚与您携手共进、 和谐发展、成就事业！,平安,幸福,
