1、五丰液相培训小结,上海彩迩文生化科技有限公司,目录：,1.液相使用注意事项2.泵故障及处理3.泵的维护4.检测器故障及处理5.流通池的清洗维护6.过滤头的清洗7.小结,安全注意事项,1.有机溶剂易挥发，务必使环境保持通风，适时打开排风系统，谨防高浓度有机相气体聚集对人体产生危害。,2.处理溶剂时戴防护眼镜，以防溶剂溅到眼睛里，如溶剂飞溅到皮肤上，应立即用大量清水冲洗，严重的情况应立即就医。,仪器注意事项,3.管路中有使用PEEK树脂材料处，尽量不要使用下列流动相：二氯甲烷，三氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，二氯乙酸，二甲基亚砜等，此类流动相可以使树脂部件变脆，引起管路断裂和流动相泄露。（如果采用丙酮含
2、量低于0.5%的水溶液作为流动相，则影响不大。）4.卤离子可以腐蚀不锈钢管路材料，因此应尽量避免诸如HCL,KCL,NaCL，NH4CL等，如必须使用，则分析结束后立即用去离子水冲洗整个管路不小于1小时。（冲洗时不要连接色谱柱）,5.流动相使用前需要脱气，否则在溶剂混合或改变温度、压力时易产生气泡，从而使输液泵产生脉动，检测器产生噪音。,进样针不要弄错,6.液相进样针为平头进样针（外径0.75mm），切记不能错拿尖头进样针，否则会损坏进样阀定子密封，造成不必要的成本。,含缓冲盐流动相的问题,7.使用含缓冲盐溶液的流动相分析前，先用10%甲醇水溶液（或乙腈水溶液），1ml/min的流速，将保存在
3、甲醇（或者乙腈）中的反相色谱柱冲洗30分钟，使反相色谱柱充满10%的甲醇水溶液（或者乙腈水溶液），再更换含有缓冲盐溶液的流动相，稳定后，做样品。做完样品后，用10%甲醇水溶液（或者乙腈水溶液），泵的流速：1ml/min冲洗色谱柱30分钟。再用甲醇（或者乙腈）冲洗系统，并将反相色谱柱和系统保存在甲醇（或者乙腈）中。清洗时间至少为30分钟。,高压恒流泵故障的简易诊断与处理方法,仪器开机无反应，显示屏不亮检查电路，电线，接头，保险丝更换显示屏或返修。,泵易出问题的地方：,带柱后清洗装置,泵无压力,1.无液体出来是否走空？观察泵头管路是否有大气泡，若有则针筒抽液； 入口单向阀红宝石小球与球座之间有异物
4、，使得小球无法正常回落球座或无法与球座严合，导致液体全部回流，此时清洗单向阀即可； 吸滤头或泵头管路堵，可以断开管路，储液瓶高放，看液体是否畅 快流出，若堵，则纯水超声清洗或换。2.泵头漏液、接头漏液、排空阀未关拧紧至不漏或更换接头、管路，关排空阀，检查泵密封圈是否损坏。,泵 头,吸入阀宝石球与球坐粘连，吸入阀不能导通,活塞向后运动,泵 座,排出阀关闭,液流方向,泵吸液过程有故障情况： 吸入阀宝石球粘连,泵腔体内没有液体流入,宝石活塞杆,密封圈,排出阀导通,泵 座,宝石活塞杆,密封圈,吸入阀宝石球与球座之间有杂质，液体反向泄漏,液流方向,泵排液过程有故障情况： 宝石球与球座之间有杂质,反向泄漏
5、液流方向,反向漏液方向,活塞向前运动,泵压力低,压力偏低小漏，找出漏点，拧紧； 密封圈或柱塞杆磨损，更换密封圈、柱塞杆，无操作经验的可考虑返修； 双泵的情况下可考虑是否某个泵无压力，A调100%看压力情况，再换B调100%看压力情况。压力低且不稳，流速不准泵头或管路内有气泡，逐段排查，排气泡；单向阀密封不严，清洗单向阀；密封圈或柱塞杆磨损，更换密封圈、柱塞杆或返修。可用量筒和计时器测量实际流速。,泵 头,吸入阀关闭,泵 座,宝石活塞杆,密封圈,排出阀导通,液流方向（压力下降）,密封圈泄漏产生的故障现象：,密封圈与宝石杆之间存在间隙，导致漏液和压力下降,泵腔体,活塞向前运动,泵压力高,不接柱子压
6、力高管路堵塞，逐段排查堵塞点在哪里，冲洗疏通或更换。接柱子压力高流速是否偏高，柱温是否过低，是否在走梯度，色谱柱柱头筛板堵塞。色谱柱若堵得实在没法用了，可考虑拆下柱头筛板超声清洗，拆柱子时手不要直接接触柱子，谨防柱内填充受热而爆出，反相柱（填充粒径大于1.8um）也可考虑低流速反冲色谱柱，注意：无论是拆筛板还是反冲都有可能对柱子产生重大影响，必须先阅读说明书或咨询色谱柱厂家后再酌情考虑是否操作。其他：压力传感器失灵返修。,压力不稳,梯度压力变化为正常现象。泵头、单向阀或系统内有气泡，排气泡、流动相脱气。单向阀损坏，更换。泵密封损坏，更换。压力在一定范围内上升下降，排除其他原因后，考虑阻尼器失灵
7、，联系厂家确认后，返修。,泵的日常维护,在使用有缓冲盐溶液的流动相后，需要对柱塞杆、密封圈等部件及时清洗，因为在柱塞杆来回运动过程中不可避免地会渗透出部分缓冲溶液，液体挥发干后或遇到有机相会析出，导致柱塞杆和密封圈磨损。所以配有自动柱后清洗功能的仪器则通过电磁阀调节清洗流量，用10%异丙醇水溶液（0.45um滤膜过滤过）进行清洗，若是手动清洗，则分析结束后，用注射器吸取30ml的10%异丙醇水溶液注射清洗两次，以延长元件使用寿命。 如果一定需要拆下泵清洗，则需要将泵头内的柱塞杆缩进去再拆泵，以保护柱塞杆，拆时，手指按着泵头，左右螺丝对称拧松，轻轻拿下，清洗完成后，原样装回，再同样操作拆另外一个
8、泵。 超声清洗单向阀时，请竖直超声，否则有超散单向阀的风险。 柱塞杆密封圈是高压恒流泵易损件之一，在使用中发现实测流量低于设定值，差值逐渐增大，压力波动大而难于达到高压，密封圈泄漏传感器报警等，检查没有其他外部原因适，须及时更换受损的密封圈。 清洗泵头时用清洁绸布或棉球沾蒸馏水或溶剂轻轻擦去泵头、泵座的表面、孔上脏物。请勿用硬物划伤柱塞杆、孔周围表面而破坏密封性。,两种柱后清洗模式：,手动柱后清洗,自动柱后清洗,输入单向阀的拆卸,从输入单向阀上拧下不锈钢输液管手拧接头。用8mm的扳手旋松并取下输入单向阀。,输出单向阀的拆卸,用5/16”的扳手将不锈钢单向阀输出管接头从单向阀上拧下，另一头从排空
9、阀上拧下。（单向阀输出管有左右之分，建议分开拆卸，并做好相应标记）,用8mm的扳手逆时针方向旋松并取下单向阀。,泵头的拆卸,分别拆下单向阀输入、输出管和输入、输出单向阀 用配套的内六角扳手均匀地旋松泵头上二个螺钉(对左侧螺钉旋松约1/4 圈，换到右侧螺钉旋松约1/4 圈)，左右交替均衡旋下二个螺钉。注意：请勿单独旋下一侧螺钉。使泵头倾斜折断柱塞杆。拆之前请将柱塞杆缩至最里面。,用手托住泵头缓慢旋下二个螺钉。平稳地取下泵头放在瓷盘内滤纸上，防止零件丢失。,输入单向阀,输入单向阀,输出单向阀,宝石球座,宝石球,球阀,恒流泵中气泡的排除,（1）首先，检查流动相储液瓶中的溶剂过滤头是否阻塞。具体做法：
10、将输入三通器上的溶剂塑料连接管的卸下，将流动相储液瓶置于高位，利用压差使溶液流出。如果溶剂流的很顺畅，说明溶剂过滤头是好的。如果是一滴一滴的流出，则说明过滤头阻塞，需要超声清洗，复原。,（2）将仪器所配的注射器及塑料连接管插到放空阀的导管上，逆时针旋放开空阀旋钮12圈，抽液5-10mL，将泵的流速设定在每分钟一毫升的流速。启动泵，观察塑料连接管的流动溶液是否还有气泡。如没有气泡说明从过滤头到放空阀这一段已将气泡排除。,（3）将泵关闭，关闭放空阀旋钮，放空泵输出口，将泵的流速设定在3-5mL每分钟，将泵内的阻尼器和压力传感器的气泡赶出，流出溶液10-15mL后将泵关闭。连接上色谱柱，将流速设定在
11、每分钟一毫升，启动泵，观察压力及压力脉动。（4）应用快速降压法赶出气泡：用小堵头将泵的流动相输出口堵上，将流速设定在1毫升/分，将柱前压力升至20Mpa左右，将排空阀快速打开，重复23即可。,紫外检测器故障的简易诊断与处理方法,1.吸光度与样品池光强度值出现脉冲式波动。原因：有气泡通过或附着在流通池，流动相过滤脱气，冲洗流通池；若波动小且无规则，则可能是氘灯突然闪一下导致。2.基线噪声。原因：流通池中有气泡或污染，可不接柱子大流速冲洗，压力不超过3MPa；环境温度或气流不稳，需保持环境稳定；氘灯年限已到；接地线是否正常。3.基线漂移。原因：池窗污染，冲洗去污或更换新；池体有小气泡，冲洗除气泡；
12、检测器温度变化，控制温度稳定；池内原先流动相未置换完全，等待置换完全。4.光强度下降，噪声大。原因：氘灯发光能力下降，需更换；若只是样品池光强度下降，则样品池污染，需冲洗去污。5.出现负峰：检测器输出信号的极性相反；样品的吸收小于流动相，流动相不纯；样品溶剂干扰；示差折光检测器中样品的折射率较低；进样中带入气泡。,检测器清洗：流通池内有气泡或污染物会影响吸光度测量，出现噪声增大、基线漂移严重的现象。需要冲洗流通池，去除气泡或污染物。,1.用纯甲醇作流动相，流速1.0，波长：254nm，记录样品池和参比池光强度值，供冲洗后进行比较。2.关闭泵和检测器，将注射器连接件连接到流通池输入口，在注射器中
13、吸入异丙醇，将异丙醇注入流通池，清洗流通池（可反复数次）。3.在注射器中吸入流动相，注入流通池中，进一步清洗流通池（可反复数次）4.打开检测器，观察光强度值变化和冲洗效果，若光强明显改善，则可将管路重新连接好。5.若上述处理仍无法清除污染，则需送厂处理或更换新的流通池，注：流通池更换需整体拆下，整体安装，非专业人员严禁拆开流通池部件。,检测器维护注意事项,1.每天分析完后要冲洗整个管路，保持流通池干净，定期用强溶剂反相冲洗检测器（断开柱子），以清洗流通池。2.流动相要脱气，防止气泡滞留在流通池内，影响分析结果。3.注意氘灯的保养，不分析时请关氘灯，以延长氘灯使用寿命，最好在需关灯时间超过4小时
14、才关灯，因为频繁地开关等同样缩短使用寿命。,滤头问题,流动相过滤头在日常使用过程中可能会被大家所遗忘，平时流动相都会用0.45um滤膜过滤，所以仪器有问题时也不太可能会第一时间想到它。 其实，滤头作为液相系统的第一道大门是很重要的一部分。滤头在使用过一段时间后可能会变脏，尤其是在水相或含有缓冲盐溶液的流动相里，从而导致泵吸不上液，泵压力高，吸入泵内的液体含有气泡等。,滤头清洗,判断滤头是否脏或堵，先目视是否有异物，再断开与泵连接的管路，储液瓶高放，看液体是否畅快流出。如果过滤头已经堵塞，则没有溶剂或只有很少的溶剂滴出，此时需要清洗滤头了。 不锈钢过滤头（五丰、岛津、waters）清洗时可以用甲
15、醇、异丙醇或纯水超声清洗，而安捷伦的滤头由于是玻璃或陶瓷材料制成，超声可能损坏玻璃过滤头的过滤板，推荐用稀硝酸（35%左右）浸泡，浸泡大约一个小时后，再用水洗净过滤头。 洗干净的滤头先用针筒往里打满流动相，再接到管路上，防止残留空气在里面。,注意事项,1.流动相一定要0.45um滤膜过滤、超声后使用。水要使用超纯水或二次蒸馏水，有机相尽量选择高品质色谱级试剂。2.当使用水或缓冲盐做流动相时，一定要经常更换流动相，水最好每天更换，至少两天换一次，缓冲盐最好现配现用。如果不及时更换容易变质的流动相，很容易滋生微生物，这样会影响基线的稳定，甚至发生过滤头堵塞。3.定期（2个星期左右，视使用情况而定）清洗一下滤头。,结束感言,虽然培训的时间较短，但是培训老师丰富的经验和大量的实例分析让我们学员收益良多，根据授课老师所讲内容结合平时工作中遇到问题，总结了这份小结，虽然是五丰液相培训，但其中的原理和故障处理还是有可借鉴之处，大家可以参考一下，如内容上有不准确的地方欢迎指出，大家相互交流心得体会。 液相色谱仪是精密的微量分析仪器，要使其功能充分发挥离不开大家悉心的呵护。,
