1、第十八章 分枝杆菌属(Mycobacterium),病原生物学教研室 王 岚,概述,抗酸杆菌（acid-fast bacillus）致病性与菌体成分有关；与人类疾病有关： 结核分枝杆菌 牛型分枝杆菌 麻风分枝杆菌引起慢性疾病,Case,患者，女，19岁。就诊时主诉：近一个多月来咳嗽，痰中时有血丝，痰少，多为干咳，无胸痛，但有明显乏力，消瘦，食欲不振，盗汗，自觉午后微热，心悸。查体：T38 ，慢性病容。实验室检查：血白细胞12 109/L，血沉为70mm/h。X线透视右肺尖有小块阴影，边缘模糊。取咳痰行抗酸染色，镜下可见红色细长弯曲的杆菌。,Questions,1.引起本病最可能的病菌是什么？2
2、.还需做哪些微生物学检查以确定诊断？3.该菌的致病物质是什么？所致疾病怎样进行特异性预防？,结核分枝杆菌(M. tuberculosis/ tubercle bacilli , TB),结核病的病原菌1886年德国细菌学家 Koch 证明全球性卫生问题是艾滋病高发区人群的首要死因世界防治结核病日3月24日,一、生物学性状,形态与染色 1. 细长略弯曲； 2.有时呈分枝状； 3.无芽胞、鞭毛。,荚膜 - 电镜下可见； - 保护作用。,齐-尼氏抗酸染色(Ziehl-Neelsen acid fast stain),方法：以5石炭酸复红加温染色，再用3盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染。结果：分枝杆菌呈红
3、色，其他细菌和背景物质为蓝色。,培养特性 1. 专性需氧； 2. 生长缓慢，代时18小时； 3. 罗氏培养基： 含血清、蛋黄、甘油、马铃薯、天门冬素、无机盐类以及孔雀绿等。 4. 固体培养基： 颗粒、结节、菜花状菌落，乳白或米黄，不透明。,表面生长,Surface growth pellicle,变异性,形态变异： Much颗粒毒力变异： BCG(Bacilli Calmette-Guerin) 1908年，Calmette和Guerin将有毒的牛分枝杆菌培养在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中，经13年230次传代而获得的减毒活疫苗株，用于预防结核病。 耐药性变异,二、致病性与免疫性, 致病物质
4、 无芽胞、鞭毛；不产生内、外毒素及侵袭性酶。,1.脂质,分枝菌酸（mycolic acid） 抗酸性；索状因子 （Cord factor ） 抑制白细胞游走，引起慢性肉芽肿；磷脂（Phosphatide） 形成结核结节与干酪样坏死；蜡质D（wax-D） 引起型超敏反应 ； 硫酸脑苷脂（Sulfatide） 使结核杆菌易于在吞噬细胞中存活。,2. 蛋白质： 与蜡质D结合引起 型超敏反应 ，并参与结核结节的形成；3. 多糖：结核杆菌在 巨噬细胞内持续生存；4. 荚膜：保护。,所致疾病,感染方式： 呼吸道、消化道、破损的皮肤黏膜；引起结核病，以肺结核最常见。,1.肺部感染 原发感染 继发感染2.肺外
5、感染,原发感染：儿童继发感染：成年人（25岁）,1.肺部感染-好发人群,原发综合征 原发灶：肺泡渗出性炎性反应； 肺门淋巴结肿大 淋巴管炎 X线胸片显示哑铃状阴影纤维化和钙化自愈 ；结核杆菌携带者。,（1）原发感染,右肺上部“哑铃状阴影”,（2）继发感染,原发病灶潜伏的结核杆菌再度大量繁殖特点：病灶局限；主要表现为引起慢性肉芽肿性炎症；引起开放性肺结核（干酪性坏死、空洞）,Large caseating tubercle,Miliary tubercles,HUMAN LUNG,HUMAN LUNG,原发感染与继发感染的区别,2.肺外感染,结核杆菌经血液、淋巴液扩散侵入肺外组织器官： 脑、肾、
6、骨、关节等。全身粟粒性结核肠结核、皮肤结核等。,免疫性与超敏反应,1.免疫性：细胞免疫 感染免疫 ：又称有菌免疫。即当结核分枝杆菌或其组分存在体内时，机体才有免疫力；一旦当该菌或其成分在体内完全消失时，免疫力也随之消失。,2.免疫与超敏反应,郭霍现象（Koch phenomenon）意义： TB感染时，细胞免疫与迟发型超敏反应同时存在。物质基础： 结核菌素蛋白 + 蜡质D 超敏反应 rRNA 免疫性,以前感染过或免疫豚鼠,正常豚鼠,24-48小时,10-14天,局部红肿、浅溃疡,局部红肿、溃疡,不扩散，脱落后自行愈合,坏死，经久不愈,有毒TB菌,全身扩散,皮下,郭霍现象,3. 结核菌素试验（T
7、uberculin skin test）,概念 应用结核菌素进行皮肤试验，来测定机体对结核分枝杆菌是否能发生迟发型超敏反应的一种试验。以判断机体对结核分枝杆菌有无免疫力。,结核菌素试剂,（1）旧结核菌素 ( old tuberculin, OT)： 将结核分枝杆菌接种于甘油肉汤培养基 , 培养 4-8 周后加热、浓缩过滤制成。其中主要成分是结核菌蛋白 。,（2）纯蛋白衍生物 （purified protein derivative, PPD）：是 OT 经三氯醋酸沉淀后的纯化物。 两种：PPD-C由人结核分枝杆菌提取； BCG-PPD用 BCG 制成。,方法：取 PPD-C 和 BCG-PPD
8、 各 5 单位 , 分别注入两前臂皮内 ( 目前仍有沿用单侧注射 PPD 的方法 )， 48-72h 后观察结果。,结果判定：D5mm - 阴性D= 6-14mm-阳性D15mm-强阳性两侧红肿中 , 若 PPD-C 侧大于 BCG-PPD 侧时为感染 , 反之则为卡介苗接种所致 ;,结果分析 阳性：机体已感染过结核分枝杆菌或BCG 接种成功 , 但不一定有结核病。 强阳性：可能有活动性结核，应进一步做 其他检查。 阴性：未感染或未接种BCG 原发感染的早期； 老年人 ； 严重结核病患者； 获得性免疫功能低下（AIDS）,三、微生物学检查法,1 .标本采集、集菌2. 涂片镜检Ziehl-Nee
9、lsen 抗酸染色法：若发现抗酸菌 , 可作初步诊断。金胺染色：提高检出率，荧光显微镜下观察到金黄色荧光。,3.分离培养4.细菌学基因诊断 聚合酶链反应 (PCR) 扩增技术快速鉴定结核分枝杆菌 DNA。5.血清学检查：抗-TB抗体6.动物试验,四、防治原则,预防：新生儿接种卡介苗 发现、治疗痰菌阳性患者,浙江“萎缩婴儿”事件,治疗原则：早期、规律、全程、适量、联合常用药物：异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、链霉素、乙胺丁醇、对氨基水杨酸钠等；药敏试验,世界上1/3人感染，70%在亚洲,麻风分枝杆菌（Mycobacterium leprae）,总 结,1. 结核分枝杆菌的染色法及培养特性？2. 什么是BCG？3. 结核分枝杆菌的致病物质？4. 什么是感染免疫？郭霍现象说明什么？5. 结核菌素试验的原理、方法、结果及结果分析？,?,
