1、第二十一章 革兰氏阳性无芽胞杆菌第二十二章 G+形成芽孢的细菌李氏杆菌和猪丹毒丝杆菌所引起的疾病是临床上常见多发病。前者的代表种为产单核细胞李氏杆菌是一种胞内寄生菌，产生溶血素，可用增菌法鉴出。后者是常见的猪病的重要病原性细菌，自然界中分布十分广泛，明胶穿刺培养成试管刷状。炭疽杆菌是炭疽的病原，该病有重要的公共卫生意义。该菌在形态上有双重性，以其荚膜和毒素致病，该菌的微生物学诊断十分重要。致病性梭菌很多，它们在形态、培养特点、所致疾病方面各有特点，但多以毒力强大的外毒素致病，其中以气肿疽梭菌、腐败梭菌、诺维氏梭菌较为重要。,章节题目：第21章 革蓝氏阳性无芽孢杆菌 第22章 革蓝氏阳性产芽孢杆
2、菌 目的要求：掌握坏死杆菌、李氏杆菌、猪丹毒丝杆菌和炭疽杆菌的重要特性；重要病原性梭菌的异同点 了解肾杆菌的主要特性 本节重点：坏死杆菌、李氏杆菌、猪丹毒丝杆菌和炭疽杆菌的重要特性本节难点：无,第十二章 革兰氏阳性无芽胞杆菌有3个属：李氏杆菌属丹毒丝菌属肾杆菌属,第一节 李氏杆菌属本属细菌为G+杆菌需氧或兼性厌氧无芽胞无荚膜2025下能运动37不运动,有7个种：产单核细胞李氏杆菌伊氏李氏杆菌韦氏李氏杆菌塞氏李氏杆菌格氏李氏杆菌：不致病莫氏李氏杆菌：不致病,产单核细胞李氏杆菌 一、所致疾病：细胞内寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表现为败血症或肝脏坏死 ，成年牛间表现为神经症状的“转圈病”，母畜可致流
3、产。孕妇可致流产，儿童出现神经症状，兽医易患皮肤型李氏杆菌病。,产单核细胞李氏杆菌 二、形态及染色特点：G+规则的短杆菌，呈“发渣”状，两端钝圆，有时排列成V型，20-25下培养产生4根周身鞭毛，37下一根鞭毛，无芽孢，无荚膜。,三、培养及生化特性普通培养基上可生长，但加入血液或血清生长更佳，4下可缓慢增殖（特点）。1血清琼脂：圆形，光滑透明，淡蓝色小菌落。2血平板：型狭窄溶血环。棒状杆菌和丹毒杆菌为溶血。,三、培养及生化特性3肉汤：均匀浑浊，时间久可形成粘稠 沉淀，无菌环，无菌膜。4明胶穿刺：沿穿刺线生长，呈倒立树 木状，不液化明胶。5生化特点：发酵糖产酸不产气，其他具体看书。,四、微生物学
4、诊断1分离培养及鉴定取患畜血液，脑组织研磨液，加入50ml胰蛋白胨肉汤中3724h划线含有5%绵羊血的胰蛋白胨琼脂是否有溶血及淡蓝色小菌落。,四、微生物学诊断1分离培养及鉴定挑取特征性菌落作纯培养后，用纯培养物作以下试验：染色：G+短杆菌。溶血性检查：溶血，2025运动。生化试验：略动物致病试验：肉汤培养物鸽子胸肌注射1ml，豚鼠皮下1ml，2-5d内鸽子死亡，豚鼠死亡。,2血清学检查：凝集反应。病羊，牛，猪血清凝集价达12501500。马：1100012500流产牛：180011600五、免疫防治1灭活强毒菌株免疫小鼠产生数月坚强免疫力。2免疫能通过淋巴细胞被动转移，但不能通过血清 被动转移
5、。,第二节 丹毒丝菌属只有1个种，即：猪丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）一、所致疾病1引起312月龄猪丹毒，34周岁羔羊慢性多发性关节炎，鸡，火鸡衰弱和下痢、鸭的败血症并侵害输卵管。,第二节 丹毒丝菌属一、所致疾病2实验动物以小鼠和鸽子最易感，家兔和豚鼠抵抗力强。3人感染后发生皮肤病变称“类丹毒”，病状与人的丹毒病相似，人的丹毒病由化脓性链球菌属致。,猪丹毒病理,一、发病机理,二、病理变化（如图）,（一）、急性败血型,（二）、亚急性疹块型,（三）、慢性型,1、猪丹毒心内膜炎,2、慢性猪丹毒关节炎,3、皮肤坏死,二、形态及染色特征G+直或稍弯曲的细杆菌,单在或V形排列在慢性病猪的心内膜中呈长丝状，无荚膜，
6、无芽胞，无鞭毛。,三、培养特性微需O2或兼性厌氧，普通培养基上不生长。1血平板：湿润，光滑透明，灰白色露珠样的圆形小菌落，溶血（李氏杆菌狭窄的溶血）。,三、培养特性2血清肉汤：轻度混浊，有少量白色粘稠沉淀，无菌环，无菌膜。3明胶穿刺：沿穿刺线横向四周生长，如试管刷状，不液化明胶。4麦康凯平板：不生长。,四、微生物诊断1取材：高热期病猪静脉采血，死后取心脏，肝、脾，肾，骨髓，淋巴结，涂片染色镜检，G+细杆菌，可初步诊断。2分离培养血平板：露珠状小菌落，溶血麦康凯：不生长,3动物致病性试验病料制成盐水乳剂，小鼠皮下0.2ml，鸽子胸肌1ml，豚鼠皮下1ml。结果：小鼠，鸽子，2-5d，死亡，尸体剖
7、检可分离大量丹毒菌。豚鼠不反应。,4血清学诊断：凝集反应。（1）玻片法：取标准抗原2滴，1个加病猪血清，另一个加生理盐水，2min内凝集为+。（2）试管法：将血清作150和1100释稀2管，每管1ml，加标准抗原12滴。37放2-4 h，如150凝集，为阳性。免疫荧光试验，环状沉淀试验。,五、免疫治疗1本菌有良好免疫原性，应用猪丹毒活菌苗GC42。2灭活疫苗：三联苗（猪瘟，猪丹毒，猪肺疫）。3抗猪丹毒血清预防及治疗。4青霉素治疗。,第三节 肾杆菌属鲑肾杆菌：致鲑鱼、鳟鱼的细菌性肾病，外观无明显变化，剖检可见肾脏的乳白色颗粒肉芽肿病灶。,本次小节,李氏杆菌和猪丹毒丝杆菌所引起的疾病是临床上常见多
8、发病前者的代表种为产单核细胞李氏杆菌,是一种胞内寄生菌，产生溶血素，可用增菌法鉴出后者是常见的猪病的重要病原性细菌，自然界中分布十分广泛，明胶穿刺培养成试管刷状,第十三章 G+形成芽孢的细菌产芽孢的细菌包括6个属： 芽孢杆菌属：引起动物疾病 梭菌属：引起动物疾病 芽孢乳杆菌属 脱硫肠状菌属 芽孢八叠球菌属 颤螺菌属,第一节 芽孢杆菌属 本属种类繁多有34个正式种和24个不正式种，对人畜致病的主要是： 炭疽芽孢杆菌：致炭疽 蜡状芽孢杆菌：引起食物中毒,一、炭疽芽孢杆菌（一）致病性：能引起人和动物的炭疽病1、牛、绵羊，鹿等最易感：急性败血症。2、猪、马、骆驼、山羊次之：猪表现为慢性咽部局限感染。3
9、、狗、猫食肉兽有相当抵抗力：表现为肠炭疽。4、禽类不感染。5、人由于接触病畜尸体或污染畜产品：引起肠炭疽，肺炭疽，皮肤炭疽。6、死亡家畜通常表现为尸僵不全，血液凝固不良，呈煤焦油状，天然孔出血。,炭疽病理,一、发病机理,二、病理变化,（一）、败血型炭疽（如图）,（二）、痈型炭疽,1、咽炭疽,（1）、急性咽炭疽,（2）、慢性咽炭疽,2、皮肤炭疽痈,3、肠炭疽痈,4、肺炭疽痈,（二）形态及染色特征 G+大杆菌，无鞭毛，不运动，芽胞位于菌体中央，直径不大于菌体，可形成荚膜。 在动物组织或血液中，单在或25个菌连接成短链，菌体矢直，菌端平截而呈“竹节状”，围绕以丰厚的荚膜，荚膜抗腐败能力强，菌体因腐败
10、而消失后，荚膜仍可残留称为“菌影”。 组织中的菌体只有遇到游离氧时，才形成芽孢。所以怀疑为炭疽病时，严禁剖检，避免与O2接触，耳尖采血涂片。 在培养基中，形成长链，在普通培养基上不形成荚膜，并于培养1824h开始形成芽孢。,体内炭疽杆菌,体外炭疽杆菌,（三）培养特性需氧兼性厌氧，营养要求不高。1普通培养基上：强毒株形成灰白色不透明，大而扁平，表面干燥，边缘呈卷发状的粗糙菌落（R）；弱毒株形成小而隆起，光滑湿润，边缘整齐的S型菌落。2血平板：不溶血（类炭疽呈溶血）3普通肉汤：上部清朗，底部有絮状沉淀，无菌环和菌膜，轻摇试管，沉淀物徐徐上升，缠绕成团而不散开。,培养特点,（三）培养特性4明胶穿刺：
11、沿穿刺线缓慢液化，形成倒立的松树状。5青霉素串珠试验：在含有0.5单位/ml的青霉素培养基中培养时，由于细胞壁中粘肽合成受到抑制，因而形成原生质体相互连接成串称为“串珠反应”，这是该菌特有的反应。,（四）生化特性糖发酵：G+ 蔗+ 麦+ 菊+ 蕈糖+ 果糖+ 甘油+ 伯胶糖 木甘露醇淀粉+ 硝酸盐还原+ 吲哚 H2S H2O2+ （五）抵抗力1繁殖体的抵抗力不强：60 3060min杀死75 515min杀死。一般消毒剂短时间内可将其杀死，未剖检的尸体，细菌随腐败而迅速死亡。2芽胞抵抗力特强：干燥状态下存活10年，土壤中2030年。,（六）抗原性：有4种主要抗原成分1荚膜多肽抗原：与毒力有关，
12、是一种半抗原，此抗原的抗体无保护作用，但有特异性较强，可用该抗体进行荚膜肿胀试验及荧光抗体法进行鉴定细菌。,（六）抗原性：有4种主要抗原成分2菌体多糖抗原：当毒力无关，但性质稳定，耐高温高压，抗原性不被破坏。可用来制备炭疽热沉淀反应用抗原，即Ascoli氏反应。此法特异性不高，与其它芽孢菌能发生交叉反应。3保护性蛋白抗原（PA）：是毒素组成成分，具有免疫原性，能使机体产生抗体保护被感染。4.芽孢抗原,（七）毒素和毒力1荚膜：抗吞噬和消除抗体作用，利于细菌扩散。2炭疽毒素：包括水肿毒素和致死性毒素2种，由3个亚单位组成： 水肿因子（EF）（脂蛋白） 致死因子（LF）（蛋白质） 保护性抗原（PA）
13、（蛋白质）三者单独均无毒性作用，只有PA-EF或PA-LF结合才有致病作用。作用机理：毒素作用于微血管内皮C，使之通透性增强，损害肾脏，干扰糖代谢，引起弥散性血管内凝血，导致动物死亡。,（八）微生物学诊断严禁剖检，自耳根部采血，必要时切开肋间取脾脏，皮肤炭疽取渗出液。1细菌学检查取材、涂片、染色、镜检：发现有荚膜的竹节状大杆菌（初步诊断）。分离培养：a. 普通平板。 b. 血平板。 c. 选择性培养基：如戊烷脒琼脂、 溶菌酶正铁 血红素琼脂、Knisely培养基，37 1620h挑选可疑菌落与其它大杆菌作鉴别诊断。,生化试验致病性试验：被检病料制成15悬液，小白鼠0.1ml皮下注射，兔、豚鼠0
14、.2-0.3ml，动物死于败血症，剖检取脏器涂片镜检可见G+有荚膜大杆菌，确诊。,2血清学试验：用已知抗体，检测炭疽抗原。Ascoli氏沉淀反应：1902年创立，用加热抽提炭疽杆菌多糖抗原与已知抗体进行沉淀反应，适用于各种病料、皮张、腐败尸体。缺点是特异性不高，敏感性差。间接血凝试验：抗血清吸附于炭粉或乳胶上，进行玻片凝集试验。青霉素串珠试验。荧光抗体试验。琼脂扩散试验：检查是否有PA产生。,（九）防治1号炭疽芽胞苗：巴斯德将强毒株 42.5 培养10-12天，使其丧失形成芽孢的能力，然后35 培育4-7天，使其恢复形成芽孢的能力，用这种细菌制成疫苗叫号炭疽芽胞苗。2无毒炭疽芽孢苗：南非畜牧兽
15、医研究所选育的一株弱毒变种，失去形成荚膜能力，比号炭疽芽孢易余毒力强。此疫苗对山羊有强烈反应,可引起严重反应，甚至死亡。3抗炭疽血清以下图片为鼠疫相关,鼠疫的坏死及出血,二、蜡样芽孢杆菌广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲料、食品，一定条件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、新生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，驴的皮下水肿，犬，猫腹泻。,蜡样芽孢杆菌,第二节 梭菌属一、属的特性 厌氧芽孢杆菌，芽孢呈卵圆形或圆形，直径大于菌体，使菌体膨大呈梭形，故得名。大多数有鞭毛（魏氏梭菌除外），无荚膜（魏氏梭菌除外），G+。二、分类及所致疾病本属有80个种，多为非致病
16、菌，常见致病菌约为11种。,三、疾病类型及诊断原则疾病类型有5大类。1气肿疽与恶性水肿：急性败血症且有气性水肿症状。 气肿疽：气肿疽梭菌引起，经消化道感染。 恶性水肿：病原复杂，动物（腐败梭菌）、人 （A型产气荚膜梭菌）。诊断原则：病原菌的检查。,2羊快疫、羊猝狙、肠毒血症、黑疫、细菌性血红素尿：均为毒血症。 （1）羊猝狙：C型魏梭菌引起。（2）肠毒血症：B型魏氏梭菌引起。 这两个病，细菌不一定侵入体内，而在肠道中产生毒素，故微生物诊断主要靠肠内容毒素检查（查毒素）,2羊快疫、羊猝狙、肠毒血症、黑疫、细菌性血红素尿：均为毒血症。 （3）羊快疫：腐败梭菌经消化道感染，进入血液造成败血症，主要检查
17、病原。（4）黑疫：B型诺维氏梭菌（5）细菌性血红素尿：溶血梭菌此二菌存在于肝脏，当肝受损时，乘机繁殖，产生毒素致病，主要查病原，次要查毒素。,3羔羊痢疾，犊牛痢疾，人禽的坏死性肠炎由魏氏梭菌在肠道内产生毒素所致，细菌不一定侵入体内，主要查毒素。4人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由病原菌在食物或饲料中生长繁殖，产生毒素被食入而中毒。肉毒症：主要检查肉毒毒素，其次细菌学检查。魏氏梭菌食物中毒：可疑食物分离细菌，并测定其 毒素产生能力。5破伤风：破伤风梭菌经伤口感染，产生破伤风毒素引起，症状极为特征“木马状”，不需微生物诊断。,四、梭菌属分离鉴定应注意事项1专性厌氧，必须采用厌氧培养物。焦性没
18、食子酸法、共栖法，肝块肉汤、铁钉牛乳。2培养基必须是新鲜配制，厌氧条件下保存。3梭菌在培养基表面蔓延生长，不易得到单个菌落，为了得到单个菌落，可将琼脂量加到46%（一般2%），或划线接种后在表面再加注一层琼脂培养基，以限制其蔓延生长。,四、梭菌属分离鉴定应注意事项4污染严重时，80 20min杀死杂菌，25下培养。5腐败梭菌，魏氏梭菌容易在死后侵入动物体，而诺维梭菌、溶血梭菌存在正常动物体内，故从动物体分离出这些梭菌，并不能肯定它们就是病原，应进行毒力测定。,五、产气荚膜梭菌旧名：魏氏梭菌，自然界分布广，可见于污水，土壤，饲料，食物及人畜肠道中，一定条件下，引起多种严重疾病。（一）形态染色特征
19、 G+粗大正直杆菌，单在或成双排列，无鞭毛，一般条件下培养芽孢很少产生，有荚膜。,产气荚膜梭菌（二）培养特性厌氧要求不高，普通培养基上易生长。1葡萄糖血平板：圆形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圆盘形边缘呈锯齿状，表面有辐射状条纹的“勋章”样大菌落，产生“双重溶血环”内环溶血，外环为溶血。2肝块肉汤：5-6h，均匀浑浊，产生大量气体。,（三）生化特性1牛乳暴烈发酵：魏氏梭菌接种牛乳培养基8-10h后，发酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同时产生大量气体使凝块变多孔的海绵状，严重时，被冲成数段，甚至喷出管外。2明胶液化，糖发酵 H2S+ 吲哚 HNO3,（四）型别及病原性据毒素将该菌分为5
20、个型：A，B，C，D，EA型产气荚膜梭菌：引起人畜气性坏疽，食物中毒，牛、羔羊、仔猪、兔、肠毒血症。B：羔羊痢疾，其它动物肠毒血症。C：绵羊猝狙，还有肠毒血症及坏死性肠炎。D：羔羊，绵羊，牛肠毒血症。E：犊牛，羔羊肠毒血症，但很少发生,（五）微生物学诊断细菌学诊断意义不大，因为魏氏梭菌是人畜肠道中常见菌，或者死后被侵入，从病料中检出该菌并不能说明它就是病原。必须进行肠内容物毒素检查。1方法：回肠内容物加适量灭菌生理盐水作1-3倍稀释离心取上清，滤过除菌滤液静脉注射家兔（1-3ml），小鼠（0.1-0.3ml）数分钟至10小时内死亡，证明有毒素存在。2为了进一步证明是否为魏氏梭菌毒素及毒素型，必
21、须进行毒素中和试验。方法：上述滤液3份。,I+C型魏氏梭菌抗毒素血清 +D型魏氏梭菌抗毒素血清 37作用40min静脉注射小鼠或兔子 +生理盐水观察12h, 记录结果如下：D型抗毒素血清可保护 C型抗毒素血清也可保护A型毒素 C型抗毒素血清不能保护D型毒素D型抗毒素血清不保护 C型抗毒素血清可保护B型或C型毒素 C型也不保护可能是E型或不是魏氏梭菌毒 素，再用E型血清试验确定,E型能保护E型毒素。 E型不能保护不是魏氏梭菌毒素。 不能区分B型或C型毒素时，滤液中加入0.250.5%胰酶，37作用30-60min，离心沉淀取上清再与C型抗血清进行中和保护试验。C型抗毒素血清不能保护B型毒素C型抗
22、毒素血清能保护C型毒素（原因B型毒素中的毒素尚为不显毒性的原生毒素时，可被C型血清中和； 原生毒素被细菌产生的蛋白酶激活，显示出毒力，C型血清就不能中和它了）。 （六）免疫防治羊快疫，羊猝狙，肠毒血症，三联苗防治,六、肉毒梭菌一种腐生性细菌，分部广泛，不能在活的机体内生长繁殖。在一定条件下，生长繁殖产生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食物饲料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化学毒素及细菌毒素中毒性最强的一种，比KCN强10000倍，1g杀死20亿只老鼠， 100万个人。七、气肿疽梭菌又名费氏梭菌，俗称黑腿病杆菌，引起气肿疽。主要发生于牛，症状主要是肌肉丰满部位发生气性水肿，受害肌肉呈暗红色，故又称为黑
23、腿病。八、腐败梭菌引起人和动物的恶性水肿，还引起羊快疫。,九、诺维梭菌按照其毒素差异，可分4个菌型：A型：引起人和动物恶性水肿，又称水肿梭菌，公羊因斗殴引起头部感染而发生“大头病”。B型：引起绵羊的黑疫，患病动物皮下静脉显著充血，使皮肤呈暗黑色外观。C型：引起水牛骨髓炎，表现为骨髓的渐进性坏死与化脓 （仅发病于印尼）。D型：引起牛的细菌性血红尿，（我国尚无报道）。,十、破伤风梭菌引起人畜的破伤风，以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征。必须有伤口才感染。,破伤风梭菌，革兰染色 破伤风梭菌是细的末端有芽胞的革兰阳性杆菌。芽胞中心不染氏。（革兰染色，放大1000倍）,本次小节,炭疽杆菌是炭疽的病原，该病有重要的公共卫生意义该菌在形态上有双重性，以其荚膜和毒素致病，该菌的微生物学诊断十分重要致病性梭菌很多，它们在形态、培养特点、所致疾病方面各有特点，但多以毒力强大的外毒素致病，其中以气肿疽梭菌、腐败梭菌、诺维氏梭菌较为重要,
