1、实验一 观察 DNA 和 RNA 在真核细胞中的分布一、教学目标1、知识与技能：（1）学生分析说明 DNA 和 RNA 在结构上的不同点（2）学生回顾显微镜的使用方法2、过程与方法：（1）学生掌握制作装片的方法（2）使用试剂对材料进行染色3、情感态度和价值观：培养学生的动手能力，提升学生积极、乐观的学习态度。二、教学重点、难点1、教学重点：实验原理、显微镜的使用2、教学难点：甲基绿使 DNA 呈绿色，吡罗红使 RNA 呈红色。三、实验原理与解析(1)真核细胞的 DNA 主要分布在细胞核内，RNA 主要分布在细胞质中。(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA 和 RNA 的亲和力不同，甲基绿对
2、DNA 亲和力强，使 DNA 显现出绿色，而吡罗红对 RNA 的亲和力强，使 RNA 呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。(3)盐酸的作用 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输； 盐酸使染色体中的 DNA 与蛋白质分离，便于 DNA 与染色剂的结合。四、实验器材1材料 人的口腔上皮细胞，洋葱表皮细胞，根尖细胞，蛙或蟾蜍的血细胞，果肉细胞。2用具 400 mL 烧杯，250 mL 烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜。3试剂及配制方法（1）试剂 质量分数为 09%的 N
3、aCl 溶液，质量分数为 8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红 G，然后按 A 液的第二种方法配制（见下文） 。（2）染色剂的配制染色剂 A 液的两种配制方法第一种方法：取吡罗红甲基绿粉 1 g，加入到 100 mL 蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。第二种方法：取甲基绿 2 g 溶于 98 mL 蒸馏水中，取吡罗红 G 5 g 溶于 95 mL 蒸馏水中。取 6 mL 甲基绿溶液和 2 mL 吡罗红溶液加入到 16 mL 蒸馏水中，即为 A 液，放入棕色瓶中备用。染色剂 B 液的配制方法
4、B 液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠164 g，用蒸馏水溶解至 1 000 mL 备用；再取乙酸 12 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 备用。取配好的乙酸钠溶液 30 mL 和稀释的乙酸 20 mL，加蒸馏水 50 mL，配成 pH 为 48的 B 液（缓冲液） 。染色剂的配制染色剂是由 A 液、B 液混合配制而成的。取 A 液 20 mL 和 B 液 80 mL 混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。五、 主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例 )1.取材 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液； 刮： 用消毒
5、牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下； 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中； 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。2.水解 解： 将烘干的载玻片放入装有 30ml 质量分数为 8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解； 保： 将小烧杯放入装有 30温水的大烧杯中保温 5 分钟。3.冲洗涂片 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片 10 秒钟； 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。4.染色 染：用 2 滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色 5 分钟； 吸： 吸去多余染色剂； 盖： 盖上盖玻片。5.观察 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
6、高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。六、注意事项1.材料的选择 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察； 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞( 为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)2.取材要点 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质； 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。4.安全要点 用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂； 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却 1
7、分钟。5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。七、实验相关知识1.加入 8盐酸的目是：改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞；使染色剂中的 DNA 与蛋白质分离；杀死细胞，有利于 DNA 与染色剂结合。2.为什么要进行水解：甲基绿和吡罗红不是活细胞所需要的物质，正常情况下，无法穿过细胞膜进入细胞内，因此实验中使用盐酸破坏细胞膜，增加细胞膜的通透性，以方便染色剂进入细胞，同时，盐酸还能使细胞中染色体中的 DNA 和蛋白质分离，有利于 DNA 与甲基绿染色剂结合。3.将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在盛有 30温水的大烧杯中保温五分钟。水浴加热的目的时使小烧杯：水浴加热的目的是使小烧杯受热均匀。解离的目的是改变膜的通透性，便于染色济进入，且使染色体中的蛋白质和 DNA 分开，便于染色。
