1、屏障系统的原理、控制要求及进出管理,苏州大学实验动物中心 周正宇,一、普通动物（Conventional animal，CV）： 又称为一级动物。指在一般自然环境中饲养的，允许带有寄生虫和细菌，但不允许带有人畜共患疾病和动物烈性传染病的动物称之。 1、人畜共患疾病及烈性传染病病原体： 鼠痘病毒、流行性出血热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、沙门氏菌、弓形体等。,第一节 按微生物控制实验动物的分类,2、饲养环境： 开放系统3、特点及应用： 一般微生物要求控制最低，多用于要求不严的普通实验和教学用动物，难以得到正确的结果；或用于预试验，不可用于科研和检定。,二、清洁动物（Clean Animal，
2、CL）： 又称为二级动物。即除普通动物排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。 清洁动物是根据我国国情而设定的等级动物，目前在我国已成为适用于科研的标准实验动物。,2、饲养环境： 温湿度恒定的半屏障系统，饲料、垫料、笼器具消毒灭菌，水：灭菌或PH2.5-2.8的酸化水。3、特点及应用： 用于短期或部分科研验。,三、无特定病原菌动物 （specific pathogen free，SPF），三级动物。 是指动物体内外均无特定的寄生虫和特殊病原菌，除一、二级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原的动物。称为无特定病原菌动物。,2、饲养环境： 温湿
3、度恒定的屏障系统，饲料、垫料、笼器具消毒灭菌，水：灭菌或PH2.5-2.8的酸化水。3、特点及应用： 本身不带病原微生物，对实验人员有益，不会出现自身疾病症状，排除实验结果判断的干扰。而普通群体中带有稳定性感染病原体，一旦接受刺激而激发，造成非实验性死亡。国外SPF已成为标准实验动物，国内用量不断增加。 用于所有科研实验，各种疫苗的生产。,四、无菌动物 （Germ free，GF）四级动物。 指在无菌的环境下，用无菌饲料、饮水饲养的动物，或经剖腹取胎后，转移到无菌条件下饲养，体表及肠管中均不能检出任何活的微生物和寄生虫，这种动物称为无菌动物。,2、饲养环境： 温湿度恒定的隔离系统，饲料、垫料、
4、笼器具消毒灭菌，水：灭菌或PH2.5-2.8的酸化水。3、特点： 盲肠大壁薄。 淋巴结、脾脏均小，白细胞增多，脾脏无二级滤细胞，单核吞噬细胞功能下降。 不能合成维生素B和K，易产生缺乏症。 抗辐射能力强。,4、应用： 1）微生物学的研究：菌群之间的拮抗作用。 2）免疫学的研究：特异性的抗体。 3）放射医学的研究： 4）老年病学的研究： 5）肿瘤学的研究：免疫抑制剂。,表2-1 按微生物控制程度的实验动物分类原则,屏障系统（1万级） 用来饲养SPF动物，动物来源于无菌、悉生或SPF动物种群。一切进入屏障的人、动物、饲料、水、空气、垫料及各种用品均需经过严格的灭菌处理。利用空调送风系统形成清洁走廊
5、 动物房 污染走廊 室外的静亚差梯度，以防止空气逆流形成的污染。屏障内人和动物尽量减少直接接触。,SPF动物实验室二楼人员流向,屏障设施示意图,屏障系统内部管理要求 人、物严格单向流动为保证屏障内各单元间的静压差，每进出一道门后要随即关上尽量减少进出屏障的频率，杜绝不必要的进出及时将动物尸体带出屏障，送达指定位置,第二节 影响实验动物的环境因素及控制要求一、气候因素（一）温度（二）湿度（三）气流和风速二、理化因素（一）光照（二）噪声（三）粉尘（四）有害气体三、生物因素（一）空气中 的微生物（二）社会因素和饲养密度,1.温度表1 同环境温度时戊巴比妥钠给药导致大鼠死亡率比较,2.湿度对实验动物的
6、影响表3 一些国家对实验动物设施内相对湿度的规定,3. 光照对实验动物的影响（1）影响视力（2）影响生理及生殖机能光照的调控 1）动物照明：10-20Lux 明暗周期12/12或10/14 2)工作照明:100-200Lux,4. 噪声及其来源噪声对实验动物的影响（1）影响神经及心血管等系统功能（2）影响消化及内分泌系统功能（3）影响幼小动物生存噪声控制要求：60dB,5. 空气洁净度 气体污染 ：NH3 （14mg/m3 ）、SH2 颗粒物污染: 粉尘 气溶胶6. 通风和换气 换气频率： 10-20次/h 气流速度： 0.1-0.2m/s7. 压差梯度： 20-50Pa8. 动物的种间影响,
7、屏障设施环境指标（静态）,注意：随手关门，动物房任何时候都不允许两道门同时打开在动物房内，绝不允许裸手与小鼠接触,屏障系统进出管理,1.人员,2、物料,总则：物品进入动物房尽可能采取高压灭菌的方式，不能高压的物品方可使用紫外照射灭菌，只有试剂和小鼠可使用过氧乙酸喷雾消毒。,注意：1、非常规试剂（如ENU）、病毒等需申请并得到批准后方可拿进动物房2、动物房内的非常用物品和耗材放置超过1周的，要拿出重新灭菌,2、物料,物品在动物房内以及向动物房外都应保持单向流动 动物饲养室或实验室污染走廊缓冲间洗刷间 即从相对清洁的区域流向污染的区域，不能反向流动 物品从缓冲间拿出后，请务 必打开缓冲间紫外灯,2. 物料出动物房：,3.动物的进出,动物进入屏障系统： 1.来源：来自国家法定单位，并有质量合格证；境外动物需经过隔离并通过相应微生物检测合格后方可进入。 2.进入方式：包装完整，对外包装喷雾消毒后由传递窗进入,动物出屏障系统： 外发动物需打包后从传递窗传出；短期带出屏障系统进行辐照处理的动物需打包后带出。动物一经带出屏障，原则上不得返回屏障设施内！,3、严格遵守SPF动物房SOP,进动物房人员不要与宠物及其他野生动物接触关于屏障设施维护及运行SOP,必须不打折扣严格遵守！,
