1、,医学检验系 张晨光,免疫血液学,-白细胞 血小板 输血前交叉配血试验,人类白细胞抗原,人类白细胞抗原代表个体特异性 与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或移植抗原-MHS 编码MHS的基因组称为主要组织相容性复合物(MHC) 人类的MHC是首先在白细胞上发现的，称为人类白细胞抗原(HLA),HLA的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954年 HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。它是分布广泛的组织抗原。,HLA 分型,血清学分型细胞学分型PCRDNA分型,HLA的分型命名,血清学分型命名具有临床意义的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位点(Loci)，每个位点又有
2、若干等位基因，这些基因的产物便是HLA抗原。 临床意义比较大的HLA-A、B、C称为类抗原HLA-DR、DQ、DP称为类抗原。,HLA的遗传,单体型遗传 存在基因重组 多态性现象 连锁不平衡,HLA的多态性,HLA的多态性，表现在血清学水平和DNA水平。HLA的表型已达天文数字，是人类最复杂的遗传系统之一。HLA在DNA水平上比血清学和细胞学更具多态性。,HLA基因分型,1.PCR-SSOP2.PCR-SSP3.PCR-RFLP4.PCR-SSCP5.直接测序法,HLA抗体及抗体检测,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生1只与一种HLA基因产物反应的抗体 2能与不止一种HLA基因
3、产物结合的抗体,HLA抗体及抗体检测,抗体筛选 采用微量淋巴细胞毒试验。混合淋巴细胞+抗体+补体T淋巴细胞筛选HLA-I类抗体， 用B淋巴细胞筛选类抗体。,交叉淋巴细胞毒试验,以受者血清加供者淋巴细胞，供者血清加受者淋巴细胞作微量淋巴细胞毒试验 本试验主要用于骨髓移植或肾移植配型， 也用于输注血小板的配型,组织相容性试验,组织相容性试验适用于输血，特别是输注血小板、骨髓移植及肾移植等的配型,HLA在医学中的应用,一、HLA与输血 HLA与非溶血性输血反应 HLA与血小板输注 二、HLA与器官移植 (一)肾移植 (二)骨髓移植 三、HLA与亲子鉴定,?,HLA的生物学功能,1.参与抗原加工处理递
4、呈(内/外源)2.HLA的限制作用3.参与对免疫应答的遗传控制4.诱导自身或同种淋巴细胞反应5.参与T细胞分化与免疫应答过程,血小板血型,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原另一类为血小板特异性抗原,血小板血型,相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞和组织上不能发现,血小板血型现状,血小板血型抗原HPA-116个系，已知其中6对系统HPA-15 ，HPA-15共计24个抗原红细胞相关抗原A，B，H，Tja，D?组织相容性抗原HLA-A、B位点,血小板血型,血小板表
5、面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原 可能是从血浆中吸附上的。是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中在我国，通常进行ABO同型血小板输血,血小板血型,HLA血型抗原血小板膜上存在HLA-A和B位点的抗原血小板上未发现有HLA-DR、DP、DQ等位点的抗原,血小板血型,血小板特异性抗原 具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分血小板特异性抗原有6个血型系统24个抗原，正式命名为HPAlHPA5,HPA15,血小板抗原糖蛋白,自身抗体,同种抗体,抗原,配合性血小板输注,ABO同型血小板抗体的筛选交叉配合试验：确保供受体的血小板型和HLA型的配合,血小板同种抗体与输血,1、ABO血型的选
6、择 一般不需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板,对有多次输血史和妊娠史例外.2Rh血型的选择 D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白.,血小板血型抗原抗体检测方法,一、血清学检测方法SEPSA 二、基因分型方法,血小板血型抗原抗体检测方法,SEPSA方法学原理： SEPSA试验在U型孔微量反应板上进行，将血小板抗原固定在U型孔壁上，与被检血清在低离子溶液中反应后洗净，以抗IgG指示细胞指示反应结果,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗体
7、,则和血小板发生特异性结合,5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,血小板配血实验原理示意图（阳性）,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,血小板配血实验原理示意图（阴性）,3方法,直接测定法间接测定法交叉配血试验质量控制：作阴阳性对照,SEPSA试验应用,插图,血小板血型的临床意义,一.血小板输注无效性(PTR)二.输血后紫癜(PTP)三.新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性紫癜(简称ITP),血 清 型,1.血清中成分2.蛋白具有遗传多态性,型的差别.3.蛋白分类:免疫球蛋白、酶、蛋白、补体 同种型 抗体 抗原 同种异型（Gm、Am、Km） 独特型4.临床意义（1）自身免疫病 （2）非溶血性输血反应 （3）用于输血，如IgA（-）患者5 .检测方法：（1）电泳法 （2）微量血凝抑制试验,小 结,1.了解人类白细胞抗原血清学、分子生物学检测方法和临床应用2.重点掌握血小板血型抗体检测方法及临床应用3.了解血清型,谢谢大家！,
