1、血液成分的制备邱艳 北京市红十字血液中心一、血液成分的制备 （一）血液成分的制备原理 人体血液经过抗凝处理后称为全血，全血离心后主要分为三层，自上而下依次为血浆层、白膜层和红细胞层。血浆层主要包含血浆、水、蛋白质、盐类和各种离子等；白膜层主要包括富含血小板区、富含淋巴细胞区、富含单核细胞区和富含粒细胞区，这些有形细胞比重接近，因此聚集在白膜层；红细胞层可简单分为年轻红细胞和正常红细胞，由于二者处于红细胞的不同生长时期，因此比重略有差别。根据全血离心后分层的原理，可以将各层中不同的血液成分分离、制备成成分血，这样就可以合理利用血液资源，满足患者对不同成分血的需求，提高治疗效果。 （二）血液成分的
2、分离策略 目前血液成分的分离策略主要有离机血液成分分离和联机血液成分分离。离机分离策略在血液成分的制备过程中不需要献血者同步参与，先将从献血者身上采集到的全血放入无菌袋，然后再进一步离心、分离为成分血；而联机分离策略要求献血者必须配合医务工作者，同步参与血液成分制备，即一边采集献血者的全血，一边分离成分血。 （三）血液成分的分离方法 1、离机血液成分分离 离机血液成分分离有两种方法，一种是将采集到的全血放入无菌多连袋中，离心后用手工方法将其分为不同的成分血。其优点是比较经济，操作简单。但也有下列缺点：（1）重复性较差；（2）去血小板血浆（PPP）、富含血小板的血浆（PRP）和浓缩血小板（PC）
3、制品中易污染其他细胞；（3）必须配备血袋封口机；（4）对血液成分的重量无法设立对照和记录；（5）制备浓缩血小板较为困难；（6）无法进行标准化和条行码识别处理。 另一种方法是将采集到的血液放入无菌多连袋，离心后用自动血液分离机将其分离并装入别的无菌袋中。其优点如下：（1）可以进行条形码识别、数据记录和血液分离过程中的信息传递，对整个分离过程进行控制；（2）可以自动封闭血袋；（3）高性能的光学传感器保证了分离的重复性；（4）离心后确保高纯度成分制备；（5）PPP、PRP 和 PC 中细胞污染少；（6）制备快速。但其需要预先的资金投入，而且在制备过程中，要根据不同机构使用的血袋和采血量，制定离心曲线
4、，以保证符合自动血液分离机在血液分离过程中的需要。2、联机血液成分分离联机血液成分分离也有两种方法，一种是在血液分离过程中，献血者与单采血浆机始终相连，机器将收集到的献血者的血液离心并抽提出需要的血液成分，把它装入其他无菌血袋，同时将不需要的血液成分回输给献血者。其优点为：（1）可以收集到血浆、PC 和红细胞（RBC）（特别是存在同种异体免疫风险时），而且血液成分质量较高；（2）如果有额外的液体回输作为补偿，每个献血者一次最多可以提供 600ml 血浆；（3）一位献血者可以为一位患者输入足够的血小板。其缺点为：（1）需要专门耗材的复杂仪器和专业人员进行操作；（2）血液收集过程需要 30 分钟到
5、 2 小时（制备浓缩血小板）；（3）大量带有抗凝剂的血液回输给献血者，使献血者存在休克危险；（4）耗材成本高；（5）单采血浆机不能排除对供血者的副作用和危险，由于处理过程长（长达 2 小时），献血者会感觉寒冷和神经紧张，长时间存在体外循环，献血者会出现皮肤潮红、口干、对抗凝剂反应的危险以及塑料消耗品引起输血反应的危险；（6）招募献血者更困难。 另一种方法是利用细胞分离机将采集的血液离心、分离为不同的血液成分并装入其他无菌血袋。（四）血液成分的制备策略 血液成分制备有四种不同的策略。第一种策略是先将采集到的全血过滤，29004000g 重度离心 1020 分钟，分别得到少白细胞的浓缩红细胞和新鲜
6、冷冻血浆（FFP）。浓缩红细胞经过进一步处理，可以制备成悬浮红细胞、洗涤红细胞和辐照红细胞。新鲜冰冻血浆可以进一步制备成普通液体血浆、冷沉淀凝血因子和缺乏因子的血浆。 第二种策略是全血不经过过滤，直接重度离心后，将分离到的浓缩红细胞制备成红细胞添加液、洗涤红细胞和辐照红细胞。其他同第一种策略。 第三种策略是全血不经过过滤，直接重度离心，制备成部分少白细胞的红细胞（可进一步制备成悬浮红细胞、洗涤红细胞和辐照红细胞）、缺乏血小板的血浆（可制备成新鲜冰冻血浆，并进一步制备成普通液体血浆、冷沉淀物、缺乏因子的血浆和凝固因子）和白膜层。欧洲人的白膜层加入部分血浆，10001300g 离心 610 分钟或
7、 275g 离心 35 分钟，可制备部分缺少白细胞的血小板。第四种策略是全血经过 10001300g 轻度离心 610 分钟，制备成部分少白细胞的红细胞和PRP（美国人）。前者可进一步制备成红细胞添加液、洗涤红细胞和辐照红细胞，后者经29004000g 重度离心 1020 分钟，可制备浓缩血小板，去血小板血浆可进一步制备成普通液体血浆、冷沉淀凝血因子和缺乏因子的血浆。 二、血液成分的临床应用 （一）血液成分的分类 1、美国血库协会血液标准成分种类 美国血库协会（AABB）血液标准中的血液成分共有 26 种，分别如下： （1）全血（whole blood） （2）辐照全血（whole blood
8、 irradiated） （3）红细胞（red blood cells） （4）辐照红细胞（RBCs irradiated） （5）冰冻解冻去甘油红细胞（RBCs frozen and deglycerolized） （6）少白细胞红细胞（RBCs leukocytes reduced） （7）复壮红细胞（RBCs rejuvenated） （8）冰冻解冻去甘油复壮红细胞（RBCs rejuvenated frozen and deglycerolized） （9）洗涤红细胞（RBCs washed） （10）单采红细胞（RBCs pheresis） （11）单采少白细胞红细胞（RBCs le
9、ukocytes reduced pheresis） （12）血小板（platelets） （13）辐照血小板（platelets irradiated） （15）混合血小板（platelets pools） （16）单采血小板（platelets aphaeresis） （17）辐照单采血小板（platelets aphaeresis irradiated） （18）单采少白细胞血小板（platelets apheresis leukocytes reduced） （19）单采粒细胞（Granulocytes apheresis） （20）辐照粒细胞（Granulocytes irradia
10、ted） （21）冷沉淀凝血因子（antihemophilic factor cryoprecipitated） （22）新鲜冰冻血浆（fresh frozen plasma ） （23）冷沉淀后冰冻血浆（plasma cryoprecipitated reduced） （24）冰冻血浆（plasma frozen） （25）液体血浆（Liquid plasma ） （26）病毒灭活血浆（Solvent/detergent-treated pooled plasma） 其中，（1）（11）主要是红细胞类制品，（12）（18）主要是血小板类制品，（21）（26）主要是血浆类制品。 2、我国血液制
11、品种类 按照我国全血成分血质量要求，我国的血液产品可分为血液制剂、造血干细胞和血液制品。临床供应的血液制剂主要是全血和成分血，成分血包括红细胞类成分血、病原体灭活血浆、浓缩血小板、新鲜冰冻血浆、泠沉淀凝血因子、辐照成分血和单采成分。其中，红细胞类成分血包括浓缩红细胞、悬浮红细胞、浓缩少白细胞红细胞、悬浮少白细胞红细胞、洗涤红细胞和冰冻解冻去甘油红细胞。单采成分血包括单采血小板、单采少白细胞血小板、单采粒细胞、单采新鲜冰冻血浆和单采红细胞。 （二）血液成分的临床应用 1、洗涤红细胞 不同国家的洗涤红细胞制备标准也不同，美国的制备标准要求血容量为 250350ml（450ml 全血制备），血细胞比
12、容为 0.600.80，白细胞5106/单位，强调洗涤红细胞的目的是除去血浆部分。我国的制备标准要求血容量为 125ml10（200ml 全血制备）、250ml10（400ml 全血制备），红细胞回收率70，白细胞清除率80，血浆蛋白清除率98。 2、辐照血液红细胞 辐照红细胞的适应证包括：（1）消除输血相关的移植物抗宿主病患病风险；（2）适用于先天性免疫缺陷患者、骨髓和器官移植患者、新生儿患者，强烈放化疗患者、输入直系亲属血受血者等。美国 AABB 23 版标准要求对血液制剂中心点的照射剂量不得少于 25Gy（2500cGy），对血液制剂任何点的照射剂量不得少于 15Gy（1500cGy），
13、输送照射剂量要定时进行确认，铯 137 每年确认一次，钴60 每半年确认一次。 3、解冻红细胞 我国的制备标准要求血容量为 200ml10（200ml 全血制备）、400ml10（400ml 全血制备），红细胞回收率80%，解冻红细胞残留白细胞1%，解冻红细胞残留血小板1%，解冻红细胞甘油含量10g/L，解冻红细胞游离血红蛋白含量1g/L，解冻红细胞体外溶血试验50%。美国AABB 23 版标准要求红细胞回收率80%。 4、少白细胞制备工艺的质量控制 少白细胞制备工艺的质量控制原则为：（1）制备应在血液制剂贮存前尽快进行，以减少输注副反应，这样可避免白细胞在凋亡或坏死之前在 4储存时释放降解物
14、，导致细胞碎片在室温释放细胞因子；（2）病床边用滤器过滤除去白细胞，由于白细胞储存后会产生缓激肽等其他血管扩张物，不能用过滤方法除去，会造成严重的输血低血压反应，所以制备应在血液中心进行，血液中心可以提供质量控制，监控滤过操作和滤器失控状态；（3）质量管理体系保证制备的文件记录。 5、血小板 对血小板质量影响较大的因素包括：（1）分离方法，挤白膜（Buffy Coat BC）法和富含血小板血浆（PRP）法对其有不同影响；（2）保存状态，储存容器要有充分的通气性；保存温度是一个质量管理的重要指标，研究表明冷藏保存的血小板虽然凝集能力及止血效果能保持良好，但输血后的寿命极短，因为低温可使血小板的结
15、构之一微管发生解离，导致血小板形态改变，造成血小板寿命缩短，能引起这种变化的起始温度约为 1518，所以现在通常在 2024下保存；振荡方式也会影响血小板质量，颠倒转动型振荡对血小板的再游离效果较好，也可充分保持 pH 值，对血小板的负担较强，容易损伤血小板，往返型水平振荡对血小板损伤较少，一般进行 5060CPM 的水平振荡即可维持 pH 在 6.5 以上。标准规定振动频率为 60 次/min，振幅 5cm；（3）保存介质，常用的是 ACD-B；（4）血浆留量，浓缩血小板在保存期不断代谢产酸，导致血浆 pH 不断降低，使浓缩血小板的保存环境处于酸化环境，因此一定量的血浆可以缓冲浓缩血小板 p
16、H 不断降低，以保持血小板活性，因此，浓缩血小板容量对维持血小板耐受低 pH 值是必要的；（5）血小板浓度，血小板浓度越高，其代谢越旺盛，pH 值降低越明显，pH 为 6.97.4 时，血小板形态无明显改变，聚集功能大于储存前的 45%，pH 为 6.56.8 以下时，血小板形态开始从圆盘状向球状变化，pH 为 6.0 以下时，血小板产生不可逆变化；（6）红、白细胞污染，大量的红细胞和白细胞可以使血小板在保存期间 pH值下降。 6、新鲜冰冻血浆 新鲜冰冻血浆在18以下可保存 1 年，大部分凝血因子都保持着与新鲜时相近的值，而第、第、第因子为 7080，最不稳定的第因子则降到 65%左右。输血时
17、各种凝血因子都有止血作用，因而制备和储存条件很重要。我国标准要求在全血采集后 6 小时（全血保养液为 ACD）或 8 小时（全血保养液为 CPD、CPDA-1）内制备，-18有效保存期为 1 年。英国标准要求-30最多可保存 2 年，一旦溶解则不能再次冷冻，4下至多可保存 24 小时，222下保存则必须在4 小时内使用。美国 AABB 23 版标准要求-18有效保存期为 1 年。 7、冷沉淀凝血因子 冷沉淀凝血因子是保存期内的新鲜冰冻血浆，在 16封闭状态融化后，在 16无菌条件下分离出沉淀在血浆中的冷不溶解物质并在 1 小时内冻结而制成的成分血。其主要成分有纤维蛋白原、VIII 因子、von Willibrands 因子、XIII 因子和纤维结合蛋白。
