1、疟原虫实验室检查,上海交通大学医学院附属瑞金医院王剑飚64370045-600612,背景,疟疾在我国古代称为瘴气，国外称malaria，为意大利文mala（不良）与aria（空气）二字合成。本病是由雌按蚊叮咬人体，将其体内寄生的疟原虫传入人体而引起的。疟疾是以周期性冷热发作为最主要特征，脾肿大、贫血以及脑、肝、肾、心、肠、胃等受损引起的各种综合征,分类,寄生于人体的疟原虫有4种，即间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟,发病机制,疟原虫在红细胞中增殖成裂殖子，使红细胞胀大破裂时，大量的裂殖子和疟原虫代谢产物进入血流，引起异性蛋白反应，机体肌肉收缩产热，网状内皮系统吞噬细胞功能增强，故可引起肝、脾肿大
2、，多次发作可致贫血等。疟原虫在红细胞内增殖成熟所需时间不同，间日疟和卵形疟为48小时，三日疟为72小时，恶性疟为2448小时，故临床上出现周期性发作,生活史,抗疟原虫治疗,控制临床发作的药物：氯喹、青蒿素类（青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素）。 防止复发：伯氨喹啉 、磷酸哌喹,实验室检查,血片的制作血片的染色疟原虫的镜检,载玻片：无油迹、无灰尘，无划痕、清洁推片：边缘光滑无缺口采血部位：耳垂、手指、足跟血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3推片与载玻片的角度：25-30度大小：薄血膜宽1.5-2cm，厚血膜直径0.8-1cm,血片制作,血片制作,位置：通常是将厚、薄血膜涂在一张
3、载片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜在第2、第3格的交界处，薄血膜在第3格中央至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。或将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。,血片的制作采血,玻片的执持,厚血膜的位置：第2第3格中央,推片边缘沾取少量血液至玻片中部,玻片和推片之间角度25-30度,呈舌状样的薄血膜（2宽）,血片的染色,染色前的处理薄血膜用甲醇固定厚血膜进行溶血,薄血膜用甲醇固定,厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过 24 小时,经甲醇固定、溶血处理后的血片,吉氏染液:吉氏（ Giemsa
4、）染剂粉 0.5 克甘油 25 毫升甲醇 25 毫升瑞氏染液:瑞氏染剂粉 0.2 克甲醇 100 毫升甘油 3 毫升（染液配制好后要过滤）,染液（原液）配方,吉氏染液配制,吉氏染剂粉研钵甘油研磨甲醇洗去甘油溶液有色玻璃瓶中每日用力摇动5min，室温 一月后应用。（此染液为原液）,吉氏染色方法,成批染色： 3 的吉氏稀释液滴加(或在染色缸内染色亦可）， 30 分钟用水冲干净，凉干。单片染色：1毫升蒸馏水加1滴吉氏原液，染色 30-40 分钟； (或 10%吉氏稀释液，染色 10-15 分钟) 。其他同上。,瑞氏染液配制,将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再
5、用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。,瑞氏染色方法,厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固定，厚血膜需溶血。在薄血膜上滴加瑞氏染液58滴，染色2分钟后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。,厚薄血膜的标准,厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列,血量血膜的厚薄血膜的固定染液（原液）质量、陈旧染液浓度、气温及染色时间稀释液配制时间稀释用水的酸碱度镜检技能（滴加镜油，100倍油镜头检查；自上而 下、自左而右逐
6、个视野顺序检查）显微镜质量,血片的制作、染色、镜检中应注意的事项,自动化染片,镜检,疟原虫三要素 核-鲜红色 胞浆-蓝色 疟色素-黄褐色或黑褐色，,薄血膜中常见的血液成分,人类四种疟原虫的基本特征,间日疟原虫恶性疟原虫三日疟原虫卵形疟原虫,环状体滋养体裂殖体配子体,疟原虫图谱,间日疟 三日疟 恶性疟 卵形疟,间日疟早期滋养体-环状体,约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状体和一个环状体有2个核。,间日疟滋养体-大滋养体,经810小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点,间日疟裂殖体,2.1 未成
7、熟裂殖体 （immature schizont）,经40小时晚期滋养体发育成熟，虫体变圆，空泡消失核开始分裂又称裂殖体前期色素聚集成团块,成熟裂殖体约有1224个 细胞核胞浆也随之分裂受染RBC 胀大、颜色苍白、虫体几乎充满红细胞,间日疟原虫雌配子体,虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散,间日疟原虫雄配子体,虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素分散,红细胞通常涨大 薛氏点明显 成熟环状体粗大滋养体有阿米巴样伪足可见不同发育期的原虫,间日疟（P. vivax ）鉴定要点,恶性疟原虫-环状体,环纤细,约为RBC
8、直径的1/6，RBC不胀大可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫虫体常位于红细胞的边缘 ，呈“飞鸟状”不带色素,恶性疟原虫大滋养体,一般不出现在外周血虫体小结实，圆形，不活动疟色素集中一团，黑褐色原虫此时开始集中在内脏毛细血管,恶性疟成熟裂殖体,裂殖子836个，通常1824个，排列不规则疟色素集中成一团虫体占红细胞体积的2/3至3/4,恶性疟原虫雌配子体,新月形，两端较尖核致密，深红色，常位于中央疟色素黑褐色，分布于核周围,恶性疟原虫雄配子体,腊肠形，两端钝圆胞质色蓝而略带红核疏松，淡红色，位于中央疟色素黑褐色，小杆状，在核周围较多,环状体纤细, 红细胞
9、不涨大一个红细胞内可有几个环状体 环状体内可有2个核 环状体可贴在红细胞边缘 血片中没有其他发育期，通常只有环状体和配子体配子体呈新月形或腊肠形 可出现茂氏点,恶性疟（P.falciparum）鉴定 要点,恶性疟的发育特性,恶性疟原虫由于在发作间歇期，绝大部分疟原虫要进入内脏毛细血管发育，周围血液内仅能发现环状体和配子体。恶性疟在发作期为最适宜的查血时间。,环状体可呈方形带状形是特点 成熟裂殖体呈菊花状,内含612个裂殖子 红细胞不涨大，略缩小有时有西门氏点,三日疟（P.malariae）诊断要点,三日疟原虫6-12个裂殖子，排列较规则，呈菊花状，疟色素在虫体中央，寄生的红细胞无变化,三日疟原
10、虫,卵形疟（P. ovale）诊断要点,红细胞略涨大或不变大 红细胞边缘呈车轮状环状体有时呈现鱼眼状薛氏点明显 成熟裂殖体类似三日疟原虫,但更粗大原虫呈卵圆形,薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别,薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别,厚薄血膜的优缺点,厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别,1. 一般提倡查厚血膜，薄血膜作为原虫虫种的鉴定。 2. 根据疟原虫的三要素来鉴别 (核 胞浆 疟色素 ) 。多数情况只要具备疟原虫三要素中的两个就能加以断定，如只看到疟色素也能断定。 (薄血膜镜检以血膜尾部为主) 3. 世界卫生组织建议，门诊血片至少厚血膜镜检 100 个视野，薄血膜 300 个视野。,疟原虫鉴别提示,疟原虫抗原检测,鉴别诊断,其他血液寄生虫病（丝虫病、锥虫病、巴贝西虫病、附红体病等）,谢谢！,
