1、常用缓冲溶液的配制方法1 甘氨酸盐酸缓冲液（0.05mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 0.2 mol/L HCI，再加水稀释至 200 毫升pH X Y pH X Y2.02.42.62.85050505044.032.424.216.83.03.23.43.65050505011.48.26.45.0甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含 15.01 克 /升。2邻苯二甲酸盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到 20 毫升pH(20 ) X Y pH(20
2、) X Y2.22.42.62.83.0555554.0703.9603.2952.6422.0223.23.43.63.855551.4700.9900.5970.263邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含 40.85 克/升3磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液pH 0.2mol/L Na2HPO4（毫升）0.1mol/L柠檬酸（毫升）pH 0.2mol/L Na2HPO4（毫升）0.1mol/L柠檬酸（毫升）2.22.42.62.83.03.23.43.63.84.04.24.44.64.85.00.401.242.183.174.114.945.706.44
3、7.107.718.288.829.359.8610.3010.6018.7617.8216.8315.8915.0614.3013.5612.9012.2911.7211.1810.6510.149.705.25.45.65.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.010.7211.1511.6012.0912.6313.2213.8514.5515.4516.4717.3918.1718.7319.1519.459.288.858.407.917.376.786.155.454.553.532.611.831.270.850.55Na2HPO4 分子量 = 14.
4、98，0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。Na2HPO42H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7H2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。4柠檬酸氢氧化钠-盐酸缓冲液pH 钠离子浓度（mol/L）柠檬酸（克）C6H8O7H2O氢氧化钠(克)NaOH 97%盐酸（毫升）HCl（浓）最终体积（升） 2.23.13.34.35.35.86.50.200.200.200.200.350.450.382102102102102452852668483838314418615616011610645
5、6810512610101010101010 使用时可以每升中加入 1 克克酚，若最后 pH 值有变化，再用少量 50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5柠檬酸柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）pH 0.1 mol/L柠檬酸（毫升）0.1 mol/L柠檬酸钠（毫升）pH 0.1 mol/L柠檬酸（毫升）0.1 mol/L柠檬酸钠（毫升）3.03.23.43.63.84.04.24.44.64.818.617.216.014.914.013.112.311.410.39.21.42.84.05.16.06.97.78.69.710.85.05.25.45.65.86.06.26.46.6
6、8.27.36.45.54.73.82.82.01.411.812.713.614.515.316.217.218.018.6柠檬酸 C6H8O7H2O：分子量 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。柠檬酸钠 Na3 C6H5O72H2O：分子量 294.12，0.1 mol/L 溶液为 29.41 克/ 毫升。6乙酸乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L）pH(18 )0.2 mol/LNaAc(毫升)0.3 mol/LHAc(毫升)pH(18 )0.2 mol/LNaAc(毫升)0.3 mol/LHAc(毫升)2.63.84.04.24.44.60.751.201.802
7、.653.704.909.258.808.207.356.305.104.85.05.25.45.65.85.907.007.908.609.109.404.103.002.101.400.900.60Na2Ac3H2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。7磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠磷酸二氢钠缓冲液（0.2）pH0.2 mol/LNa2HPO4(毫升)0.2 mol/LNaH2PO4(毫升)pH0.2 mol/L Na2HPO4(毫升)0.2 mol/LNaH2PO4(毫升)5.85.96.06.16.26.36.46.56.66.76.86.98.0
8、10.012.315.018.522.526.531.537.543.549.555.092.090.087.785.081.577.573.568.562.556.551.045.07.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.061.067.072.077.081.084.087.089.591.593.094.739.033.028.023.019.016.013.010.58.57.05.3Na2HPO42H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液为 85.61 克/ 升。Na2HPO412H2O 分子量 = 358.14，0.2 mol/L 溶液为
9、71.628 克/升。NaH2PO42H2O 分子量 = 156.01，0.2 mol/L 溶液为 31.202 克/升。磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH 2PO4： pKa12.12，pKa27.21； Na2HPO4：pKa17.21，pKa2 12.32配酸性缓冲液：用 NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH 68，配碱性缓冲液：用 Na2HPO4，pH1012。用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸
10、钠而不能用磷酸钾，因为 SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸盐缓冲液的优点为：容易配制成各种浓度的缓冲液；适用的 pH 范围宽；pH 受温度的影响小；缓冲液稀释后 pH 变化小，如稀释 10 倍后 pH 的变化小于0.1。其缺点为：易与常见的钙 Ca2+离子、镁 Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。（2）磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）pH mol/L/15Na2HPO4(毫升)mol/L/15KH2PO4(毫升)pH mol/L/15Na2HPO4(毫升)mol/L/15KH
11、2PO4(毫升)4.92 0.10 9.90 7.17 7.00 3.005.295.916.246.476.646.816.980.501.002.003.004.005.006.009.509.008.007.006.005.004.007.387.738.048.348.678.188.009.009.509.759.9010.002.001.000.500.250.100Na2HPO42H2O 分子量 = 178.05，1/15M 溶液为 11.876 克 /升。KH2PO4 分子量 = 136.09，1/15M 溶液为 9.078 克/ 升。8磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液（0.05M）X
12、 毫升 0.2M K2PO4 + Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀释至 29 毫升pH(20) X (毫升) Y（毫升） pH(20 ) X (毫升) Y（毫升）5.86.06.26.46.66.85555550.3720.5700.8601.2601.7802.3657.07.27.47.67.88.05555552.9633.5003.9504.2804.5204.6809巴比妥钠-盐酸缓冲液（18）pH 0.04M 巴比妥钠溶液0.2V 盐酸 pH 0.04M 巴比妥钠溶液(毫升)0.2N 盐酸(毫升)6.87.07.27.47.67.88.08.210010010010010010
13、010010018.417.816.715.313.411.479.397.218.48.68.89.09.29.49.61001001001001001001001005.213.822.521.651.130.700.35巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M 溶液为 8.25 克/ 升10Tris盐酸缓冲液（0.05M，25）50 毫升 0.1M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与 X 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100毫升。pH X(毫升 ) pH X(毫升 )7.107.207.307.407.507.6045.744.743.442.040.338.58.108.2
14、08.308.408.508.6026.222.919.917.214.712.47.707.807.908.0036.634.532.029.28.708.808.9010.38.57.0三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OHCHOCH2 NH2分子量=121.14;0. 1M 溶液为 12.114 克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。11硼酸硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根）pH 0.05M 硼砂（毫升）0.2M 硼酸（毫升）pH 0.05M 硼砂（毫升）0.2M 硼酸（毫升）7.47.67.88.01.01.52.03.09.08.58.07.08.
15、28.48.79.03.54.56.08.06.55.54.02.0硼砂 Na2B4O710H2O,分子量=381.37;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含 19.07 克/升。硼酸 H3BO3,分子量=61.83,0.2M 溶液为 12.37 克/ 升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。12甘氨酸氢氧化钠缓冲液（0.05M）X 毫升 0.2M 甘氨酸+Y 毫升 0.2NnaOH 加水稀释至 200 毫升pH X Y pH X Y8.68.89.09.29.450505050504.06.08.812.016.89.69.810.010.410.6505050505022.427.
16、232.038.645.5甘氨酸分子量=75.07;0.2M 溶液含 15.01 克/ 升。13硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根）X 毫升 0.05M 硼砂+Y 毫升 0.2NNaOH 加水稀释至 200 毫升pH X Y pH X Y9.39.49.65050506.011.023.09.810.010.150505034.043.046.0硼砂 Na2B4O710H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液为 19.07 克/ 升。14碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+、Mg 2+存在时不得使用pH20 370.1MNa2CO3(毫升) 0.1MN2HCO3(毫升)9.1
17、69.408.779.1212989.519.789.9010.1410.2810.5310.839.409.509.729.9010.0810.2810.5734567897654321Na2CO210H2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为 28.62 克/ 升。N2HCO3 分子量=84.0;0.1M 溶液为 8.40 克/ 升。15 “PBS”缓冲液pH 7.6 7.4 7.2 7.0H2ONaClNa2HPO4NaH2PO410008.52.20.110008.52.20.210008.52.20.3100ml8.5g2.2g0.4gpH 标准缓冲溶液 Standard pH B
18、uffer Solutions不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 名称(Name) 配 制 (Compounding way) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 1.67 1.67 1.67 1.67 1.68 1.68 1.69 1.69 1.69 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 45 50 55 60 70 80 90 95 - 草酸盐标准缓冲溶液 cKH3(C2O4)22H2O为 0.05mol/L。称取 12.71g 四草酸钾KH 3(C2O4)22H2O溶于无二氧化碳的
19、水中，稀释至 1000ml 1.70 1.71 1.72 1.72 1.74 1.77 1.79 1.81 - 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 - - - - - 3.56 3.55 3.55 3.55 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 45 50 55 60 70 80 90 95 - 酒石酸盐标准缓冲溶液 在 25时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾(KHC4H4O6)，并剧烈振摇至成饱和溶液 3.55 3.55 3.55 3.56
20、3.58 3.61 3.65 3.67 - 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.01 4.01 4.02 4.04 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 45 50 55 60 70 80 90 95 - 苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液 c(C6H4CO2HCO2K)为0.05mol/L，称取于(115.05.0)干燥 23h 的邻苯二甲酸氢钾（KHC 8H4O4）10.21g，溶于无CO2的蒸馏水，并稀
21、释至 1000ml （注：可用于酸度计校准） 4.05 4.06 4.08 4.09 4.13 4.16 4.21 4.23 - 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 6.98 6.95 6.92 6.90 6.88 6.86 6.85 6.84 6.84 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 磷酸盐标准缓冲溶液 分别称取在(115.05.0)干燥 23h 的磷酸氢二钠（Na 2HPO4）(353001)g和磷酸二氢钾（KH 2PO4） (339001)
22、g，溶于预先煮沸过 45 50 55 60 70 80 90 95 - 1530min 并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：可用于酸度计校准） 6.83 6.83 6.83 6.84 6.85 6.86 6.88 6.89 - 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 9.46 9.40 9.33 9.27 9.22 9.18 9.14 9.10 9.06 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 45 50 55 60 70 80 90 95 -
23、硼酸盐标准缓冲溶液 c(Na2B4O710H2O)称取硼砂（Na 2B4O710H2O）(380 001)g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过 1530min 并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至 1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。存放时要防止空气中的CO2的进入（注：可用于酸度计校准） 9.04 9.01 8.99 8.96 8.92 8.89 8.85 8.83 - 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 13.42 13.21 13.00 12.81 12.63 12.45 12.30 12.1
24、4 11.98 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures) 45 50 55 60 70 80 90 95 - 氢氧化钙标准缓冲溶液 在 25，用无二氧化碳的蒸馏水制备氢氧化钙的饱和溶液。氢氧化钙溶液的浓度c1/2Ca(OH)2应在（0.04000.0412）mol/L。氢氧化钙溶液的浓度可以酚红为指示剂，用盐酸标准溶液 c(HCl)=0.1mol/L滴定测出。存放时要防止空气中的二氧化碳的进入。出现混浊应弃去重新配制 11.84 11.71 11.57 11.45 - - - - - 注：为保证 pH 值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用 pH 基准试
25、剂配制。常用 pH 缓冲溶液的配制和 pH 值Preparation and pH Values of Common pH Buffer Solutions序号(No.)溶液名称 (Solution name)配制方法 (Preparation)pH 值(pH value)1 氯化钾-盐酸 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 混合均匀后，加水稀释至 100 ml 1.72 氨基乙酸-盐酸 在 500 ml 水中溶解氨基乙酸 150 g，加 480 ml 浓盐酸，再加水稀释至 1L 2.3 3 一氯乙酸-氢氧化钠 在 200 ml 水中溶解
26、 2 g 一氯乙酸后，加 40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至 1 L 2.8 4 邻苯二甲酸氢钾-盐酸 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与 6.0 ml 0.1 mol/L HCl 混合均匀，加水稀释至 100 ml 3.6 5 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与 17.5 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 4.8 6 六亚甲基四胺-盐酸 在 200 ml 水中溶解六亚甲基四胺 40 g，加浓 HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L 5.4 7 磷酸二氢钾-氢氧化钠
27、 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的磷酸二氢钾与 23.6 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 6.8 8 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 8.0 9 氯化铵-氨水 把 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以2：1 比例混合均匀 9.1 10 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 10.0 11 氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠 把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀 11.6 12 磷酸氢二钠-氢氧化钠 把 50.0 ml 0.05 mol/L Na 2HPO4与 26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 12.0 13 氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 13.0
