1、“齐二药”假药案,2006年4月24日起，中山大学附属第三医院有患者使用齐齐哈尔第二制药厂生产的亮菌甲素注射液后出现急性肾衰竭临床症状。,事件中共有65名患者使用了该批号亮菌甲素注射液，导致13名患者死亡，另有2名患者受到严重伤害。,广东省药品检验所紧急检验查明，该批号亮菌甲素注射液中含有毒有害物质二甘醇。经卫生部、国家食品药品监督管理局组织医学专家论证，二甘醇是导致事件中患者急性肾功能衰竭的元凶。,经食品药品监管部门、公安部门联合查明，齐二药厂原辅料采购、质量检验工序管理不善，相关主管人员和相关工序责任人违反有关药品采购及质量检验的管理规定，购进了以二甘醇冒充的丙二醇并用于生产亮菌甲素注射液
2、，最终导致严重后果。,“欣弗”不良事件:克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液,6岁的哈尔滨女孩 因为感冒住院，在注射“欣弗”牌克林霉素注射液后，出现了严重的不良反应，最后死亡。,欣弗事件是由于生产流程不合格原因造成的药物不合格，灭菌效果不达标是导致欣弗事件的主要原因。,反应停事件：thalidomide,19571962年：在欧洲、北美、非洲、澳洲和日本等国广泛使用镇静催眠药治疗妊娠呕吐反应，疗效极为显著导致了8 000多例婴幼儿海豹样畸形，其中5 000多例死亡。,沙利度胺致胎儿畸形,第五章 药物分析学,药学导论,药物的全面质量控制包含以下4个环节： 1、研制： 实验室原料及制剂标准制订指导法令性文件
3、：GLP 2、生产 工厂质检部指导法令性文件：GMP 3、供应 医药公司质检部（科）指导法令性文件：GSP 4、使用 医院、药房质检科指导法令性文件：GCP,第一节、药物分析的性质和任务,（一）药物分析的性质,3. 药物分析,药物分析是运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术研究化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究有代表性的中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。,药物分析的任务 1、保证临床用药的安全和有效药物 对临床用药进行监护，为临床用药提供数据。2、建立新药质量标准3、完善和提高现行药品质量标准 检验：包括性状检查、药物鉴 别、杂质检查、含量测定。,第二
4、节、药物的质量标准,（一）我国药品质量标准：1、中华人民共和国药典：简称中国药典(Chinese pharmacopoeia ，ChP)2、国家食品药品监督管理局药品标准：简称局颁标准 国务院药品监督管理部门颁布的中华人民共和国药典和药品标准为国家药品标准。药品必须符合国家药品标准。,建国以来，我国已经先后出版了九版药典： 1953年版、1963年版、1977年版、1985年版、1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、 2010年版。 药典是国家关于药品标准的法典，是国家管理药品生产与质量的依据，和其他法令一样具有约束力。 中国药典（2010年版）分为一、二、三部。另专门出版了
5、药品红外光谱集。,中国药典(Chinese pharmacopoeia ，ChP),中华人民共和国药典 2010年版,收载的品种：医疗必须、临床常用、疗效确切、质量稳定、副作用小，我国能工业化生产并能有效控制（或检验）其质量的品种。一部：收载中药材、植物油脂、单味制剂、中药成方二部：收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品以及药用辅料等三部：收载生物制品 由凡例（总说明）、正文（主要内容）、附录（制剂通则和通用检查方法）三部分组成。,中国药典的内容,凡例：对药典内容的说明、注解。使用前，必须逐条地阅读和理解。正文：为所收载药品及制剂的质量标准，主要包括药品性状、鉴别、检查、含量测定、类别、剂
6、量、作用与用途等。附录：记载了制剂通则、一般杂质检查、一般鉴别试验等通法以及试剂的配制等。 索引：中文、汉语拼音、英文索引。,阿胶,拼音名：Ejiao 英文名：COLLA CORII ASINI 本品为马科动物驴Equus asinus L 的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。 【制法】 将驴皮漂泡去毛，切块洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，浓缩（可分别加入适量的黄酒、冰糖和豆油）至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。 【性状】 本品呈长方形块、方形块或状。黑褐色，有光泽。质硬而脆，断面光亮，碎片对光照视呈棕色半透明状。气微，味微甘。,【鉴别】 取本品粗粉0.2g，置具塞试管中，加6mol/L盐
7、酸溶液8ml，密塞，置105烘箱中加热6小时 ，加水6ml，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘氨酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液2l、对照品溶液1l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯酚-0.5%硼砂水溶液（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮乙醇液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。,【检查】 水分 取本品1g，精密称定，加水2ml，加热溶解后，置水浴上蒸干，使厚度不超过23mm，照水分测定法（附录 H第一法
8、）测定，不得过15.0。 总灰分 取本品1.0g，依法测定（附录 K），不得过1.0。 重金属 取总灰分项下的残渣，依法检查（附录 E第二法），含重金属不得过百万分之三十。 砷盐 取本品2.0g，加氢氧化钙1g，混合，加少量水，搅匀，干燥后先用小火烧灼使炭化，再在500600炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸 3ml与适量的水使溶解成30ml，分取溶液10ml，加盐酸4ml 与水14ml，依法检查（附录 F），不得过百万分之三。 水不溶物 取本品1.0g，精密称定，加水10ml，加热溶解，将溶液移入已恒重的10ml离心管中，离心，去除管壁浮油，倾去上清液，沿管壁加入温水至刻度，离心，如法清洗3次，倾
9、去上清液，离心管在105 加热2小时 ，取出，置干燥器中冷却30分钟，精密称定，计算，即得。 本品水不溶物不得过2.0%。 挥发性碱性物质 取本品约5g，精密称定，置100ml 量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置凯氏烧瓶中，立刻加1%氧化镁混悬溶液5ml，迅速密塞，通入水蒸气进行蒸馏，以2%硼酸溶液5ml 为接收液，加甲基红溴甲酚绿混合指示液5 滴，从滴出第一滴凝结水珠时起，蒸馏7 分钟停止，馏出液照氮测定法（附录 L第二法）测定，即得。 本品每100g中含挥发性碱性物质以氮（N）计，不得过0.10g 。 其他 应符合胶剂项下有关的各项规定（附录 G）。,【含量测定】
10、取本品粉末0.2g，精密称定，照氮测定法（附录IX L第一法）测定，即得。 本品含总氮（N）量不得少于13.0。 【炮制】 阿胶 捣成碎块。 阿胶珠 取阿胶，烘软，切成丁，照烫法（附录 D）用蛤粉烫至成珠，内无溏心。 【性味与归经】 甘，平。归肺、肝、肾经。 【功能与主治】 补血滋阴，润燥，止血。用于血虚萎黄，眩晕心悸，肌痿无力，心烦不眠，虚风内动，肺燥咳嗽，劳嗽咯血，吐血尿血，便血崩漏，妊娠胎漏。 【用法与用量】 烊化兑服，39g。 【贮藏】 密闭。,（二）国外药典,美国药典(The United States Pharmacopoeia， 缩写为USP)：现为30版。美国国家处方集(The
11、 National Formulary，缩写为NF)：现为25版。 合并为一册出版，缩写为USP(30)-NF(25)。英国药典(British Pharmacopoeia，缩写为BP)：目前版本为2005年版。,日本药局方：本书缩写为JP 。现为第15版。欧洲药典(European Pharmacopoeia，缩写为PhEup)：目前版本为第5版，自1980年开始出版，分为两部。 国际药典(The International Phamacopoeia，缩写为PhInt)：目前为第三版，分为5卷。,中华人民共和国药典（Ch.P） 2010年版 美国药典（USP） USP30-NF25 英国药典
12、（BP） BP2007 日本药局方（JP） JP15 欧洲药典（Ph. Eur） EP5.0 国际药典（Ph. Int.） 第三版,药品质量管理规范,药物非临床研究质量管理规范(Good Laboratory Practice，GLP)药品生产质量管理规范 (Good Manufacturing Practice，GMP)药品经营质量管理规范(Good Supply Practice，GSP)药物临床试验质量管理规范 (Good Clinical Practice，GCP) ：,三、药品检验工作的基本内容,（一）取样(Sampling),应考虑取样的科学性、真实性和代表性，取样的基本原则应该是
13、均匀、合理。固体原料药用取样探子取样。,取样量： 设样品总件数为x当x3时，每件取样,当x300时，,当x300时，,（二）性状检查原料药：外观性状，溶解度，熔点，比旋度等。制剂：剂型，外观形状，色泽，片芯颜色等。（三）鉴别试验 判断真伪（四）限度检查包括有效性、均一性、纯度要求及安全性四个方面。,（五）含量测定： 一般采用化学分析方法或理化分析方法，测定药物中主要有效成分的含量。（六）写出检验报告： 全部项目检验完毕后，写出检验报告，并根据检验结果作出明确的结论。 检验报告中应包括药品名称、制剂规格以及检验项目，是否符合质量标准（哪种标准、版本等）。,2. 日期（取样、检验、报告等）；,3.
14、 检验情况（依据、项目、操作步骤、数据、计算结果、结论等）；,4. 若需修改，只可划线后重写，并签章；,（七）原始记录 完整、真实、具体,1. 供试品情况（名称、批号、规格、数量、来源、外观、包装等）；,修改方式：划1条或2条细线，在右上角书写正确数字，并签章,2,05,3,张杰,张杰,张杰,5. 记录完成后，需复核，并由复核人签章。复核后的记录，属内容和计算错误的，由复核人负责；属检验操作错误的，由检验人负责。,品名 包装规格批号 厂牌来源数量 取样日期取样数量 报告日期检验依据检验记录结论复核人 检验人,检验记录(省略上半页),检查溶液颜色 = 0.02,符合规定,炽灼残渣 6# 16.5
15、572g + 样1.0124g 700放置4517.5693g,符合规定,鉴别 样0.2g + 1滴NaoH T.S.黑色,符合规定,性状 白色粉末,符合规定,含量测定,碘液0.1026mol/L,符合规定,0.00 22.95ml,（二） 检验报告书 完整、简洁，结论明确。除无操作步骤外其它内容同原始记录。,（三）结论,1. 全面检验均符合质量标准。如：本品为“维生素C”，符合中国药典（2005年版）的各项规定。,2. 全面检验后有个别项目不符合规定。,本品为“葡萄糖”；乙醇溶液的澄清度项不符合规定，其他各项检验均符合中国药典（2005年版）的规定。可改作“口服葡萄糖”用，但不得供制备注射剂
16、用。,3. 全面检验后不符合标准规定，或虽未全面检验、但主要项目不符合规定，可作“不得供药用”处理。如：,本品为“葡萄糖注射液”，其热原检查不符合中国药典（2005年版）的规定，不得供药用。,4. 根据送检者要求，仅作个别项目检验者。如：,本品（维生素B12注射液）的pH值为5.5，“pH值”项符合中国药典（2005年版）的规定（pH值 应为4.0-6.0）,检验报告书(省略上半页),例,溶液颜色 0.07 =0.02 符合规定,负责人 罗红 复核人 罗红 检验人 张杰,结论 本品经检验，符合(中国药典2005年版)规定,含量 99.0 99.8% 符合规定,炽灼残渣 0.1% 0.03% 符
17、合规定,检查,鉴别 应生成黑色 生成黑 符合规定,性状 应为白色粉末 白色粉末 符合规定,检验项目 标准规定 检验结果 结论,药品质量标准的制订,原则安全有效性先进性针对性“安全有效，技术先进，经济合理，不断完善”研究及制订药品质量标准的基础文献资料的查阅及整理对有关研究资料的了解药品质量标准制订工作的长期性,五、药品质量标准分析方法验证,专属性线性范围准确度精密度检测限定量限耐用性,（一）专属性,定义：指在样品介质中有其他组分共存时该方法对供试物质准确而专属的测定能力。方法：应着重考虑杂质、降解产物、相关化合物以及制剂辅料等其他组分是否对被测药物的测定有干扰。一般通过添加上述物质的样品与未曾
18、添加的样品所得分析结果进行比较而确定。,（二）线性与范围 (linearity and range),1、定义：线性：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线性范围：指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mgL mgL、 ugml ugml等表示。,2、方法： 线性与范围的确定可用作图法(响应值Y浓度X)或计算回归方程(Ya+bX)来研究建立。 采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r0.9900。 对照品的LOQ必须包括在线性范围。,（四）准确度(Accuracy),1、定义：
19、 指测得结果与真实值接近的程度，表示分析方法测量的正确性。通常采用回收率试验来表示。2、方法：回收试验法：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,制剂可采用空白辅料中加入原料药对照品法。还应作单独辅料的空白测定。,加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。,（五）精密度(Precision),定义：指用该法多次测定同一匀质样品的测量值彼此符合的程度。常用 标准差（SD）或相对标准差（RSD）表示。,在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规
20、定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价。,同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。,1. 重复性,2. 中间精密度,不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。,3. 重现性,（六）检测限(limit of detection，LOD),1、定义：,系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试
21、验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。 它既反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白(本底)值的高低。,2、方法：仪器分析方法：用已知浓度样品与空白试验对照，记录测得的被测药物信号强度S与噪音(或背景信号)强度N，以能达到SN2或SN3时的样品最低药浓为LOD；也可通过多次空白试验，求得其背景响应的标准差，将三倍空白标准差(即3空或3S空)作为检测限的估计非仪器分析方法：通过已知浓度的样品分析来确定可检出的最低水平作为检测限。,（七）定量限 (limit of quantitation，LOQ),1、定义：,指在具有一定准确度和精密度的前提下，分析方法能够测定出样
22、品中药物的最低浓度。 它反映了分析方法测定低药物浓度样品时具有的可靠性。 它与上述的检测限的差别在于：定量限要定量测定某一药物在样品介质中的最低浓度，且定量限规定的最低浓度应该符合一定的精密度和准确度的要求。,耐用性 (robustness),定义：指利用相同的方法在各种正常实验条件下 对同一样品进行分析所得结果的重现程度。 所谓各种正常实验条件，包括不同的实验室、不同的分析人员、不同的仪器、不同批号的试剂、不同的测试耗用时间、不同的分析温度、不同的测定日期等等。,第三节 药物分析的新技术与新方法,一、在体采样技术常规：给药后处死动物，测体液或组织器官中药物及其代谢物浓度，药动学参数。现采用载
23、体留针技术、微电极探测技术或微透析在体采样技术，在活动物体内不同部位连续、多次取样，数据可靠、重现。,二、分析技术,（一）基质辅助激光解吸附质谱技术（MALDL-MS）20世纪80年代未，基质辅助激光解吸离子化和电喷雾离子化出现，质谱技术应用在测定生物大分子方面。基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。,（二）亲和色谱法 affinity chromatography用连接在基体上的配位体作为固定相，使其与蛋白质或其他大分子发生可逆的高选择性的相互作用，利用不同
24、亲和力进行分离的液相色谱法。 在生物体内，许多大分子具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。,亲和色谱中两个进行专一结合的分子互称对方为配基。如抗原和抗体，抗原可认为是抗体的配基，反之抗体也可认为是抗原的配基。将一个水溶性配基在不伤害其生物学功能的情况下与水不溶性载体结合称为配基的固相化。,亲和色谱法的基本过程是： 1.配基固相化。将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和性）。 2.亲和吸附。将含有纯化对象的混合物通过亲和柱，纯化对象吸附在柱上，其他物质流出色谱柱
25、。 3.解吸附。用某种缓冲液或溶液通过亲和柱，把吸附在亲和柱上的欲纯化物质洗脱出来。,特点：特异性、纯度高、灵敏度好。应用前景：脱线亲和色谱和在线亲和色谱,（三）毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE高效毛细管电泳（HPCE）,是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。,随着生命科学的发展， CE开始主要用于蛋白质，多肽的分析,以后逐渐被广泛应用于生物，化学，医药，环保等领域。它具有分离效率高，分析速度快，样品及试剂用量少,洁净无污染等特点。,CE技术的应用,毛细管电泳技术
26、不仅在基础科学中得到广泛应用，在临床医学等领域的应用也有较多应用。如临床疾病诊断、临床蛋白分析、临床药物监测、代谢研究、病理研究、同工酶分析、PCR产物分析、DNA片段及序列分析等。,（四）毛细管电色谱（Capillary Electrochromatography, CEC）1981：Jorgeson首次报道采用毛细管电色谱（CEC）进行多环芳烃分离的研究标志着现代电色谱的开端。1990：第一台商品化仪器问世。2000：达到顶峰。,毛细管电色谱是将高效液相色谱（HPLC）的固定相填充到毛细管中，或在毛细管内壁涂布固定相，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。此模式兼具电泳和液相色谱的模式。 如核
27、酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、氨基酸、对映体,人类基因测序已基本完成，人类基因组计划进入后基因组时代。但人类基因组图谱并没有告诉我们所有基因的“身份”以及它们所编码的蛋白质。人体内真正发挥作用的是蛋白质，其中可能藏着开发疾病诊断方法和新药的“钥匙”。一个以“蛋白质组”为重点的生命科学的新时代到来，需要对蛋白质更多的研究，新技术和新方法将发挥更大的作用。,1.经典的DNA分子标记技术2.基于PCR的DNA分子标记技术随机引物扩增PCR技术PCR扩增的片段长度多态技术DNA序列标记3.应用前景：中药鉴定和中药分析,（一）基因分析法,三、中药分析法,（二）模式识别法（pattern recognition）中药及其复方化学成分、相互作用的复杂计算机、数学方法涉及分析化学、药理等中药质量控制：黄芩,
