1、1.红细胞手工显微镜计数法： 原理、改良Neubauer计数板的结构、 操作方法、结果计算及注意事项。2.血红蛋白测定： 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 值及临床意义。,细胞计数方法,显微镜细胞计数法,细胞计数仪法,直接计数法,间接计数法（比值计数法）,显微镜细胞直接计数法,将标本作适当稀释(或浓缩)后直接在显微镜下计数一定容积内的细胞，经换算可知单位体积标本中的细胞数。,一、原理,二、应用,常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、精子计数等。,显微镜细胞间接计数法,一、原理,二、应用,将待测标本
2、制成涂片，经适当染色后，显微镜下计数待测细胞的相对比值，结果以分数或百分率表示，或换算成单位体积标本中的细胞数。,常用于白细胞分类计数、网织红细胞计数和点彩红细胞计数等。,骨髓造血干细胞,Epo,红系祖细胞,erythrocyte red blood cell,红细胞检查,红细胞计数（RBC）,血红蛋白测定（Hb,HGB）,红细胞形态检查,血细胞比容测定（Hct,HCT,Ht,PCV）,网织红细胞计数（Ret,RET）,点彩红细胞计数,红细胞沉降率测定（ESR）,红细胞平均指数,红细胞体积分布宽度,红细胞检验的意义,贫血的诊断和形态学分类 骨髓造血功能评价与疗效观察 动态观察疾病的变化 治疗监
3、测与安全防护,手工显微镜法,用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。,一. 原理,红细胞计数,( red blood cell count, RBC ),1.显微镜,二. 器材,2.微量吸管,3.计数板：改良Neubauer计数板,RBC计数,氯化钠 1.0g结晶硫酸钠 5.0g氯化高汞 0.5g蒸馏水 加至200ml,三. 试剂,赫姆氏（Hayem）红细胞稀释液,氯化钠：调节渗透压,硫酸钠：提高比密，防止红细胞粘连。,氯化高汞：防腐剂,手工显微镜法红细胞计数,( RBC ),四. 方法,1.小试管加RBC稀释液2.
4、0ml。,2.采血，取血10ul。,3.擦去管外的血，轻吹入试管底部， 再清洗吸管23次，立即混匀。,4.混匀后充入计数室，静置35 min， 高倍镜下计数。,手工显微镜法红细胞计数,(RBC),充液位置,充液位置,为红细胞计数区域,压线细胞的计数原则：,数左不数右，数上不数下,五. 计算,RBC/L5个中方格内RBC数510200106 5个中方格内RBC数/1001012,六. 报告方式,手工显微镜法红细胞计数,( RBC ),七. 参考值,男性： (4.05.5)1012L 女性： (3.55.0)1012L新生儿：(6.07.0)1012L,400550 万/ul,350500 万/u
5、l,手工显微镜法红细胞计数,( RBC ),八. 注意事项,1.采血时不要过分挤压。,2.取血量必须准确，动作要迅速，防止 血液凝固。,3.血液加入稀释液后，应立即混匀。,4.充池前要摇匀，充池时不能产生气泡。,5.压线细胞应数上不数下，数左不数右。,手工显微镜法红细胞计数,( RBC ),计数误差,技术误差固有误差：仪器误差 计数域误差,质量控制,1避免技术误差，纠正仪器偏差2缩小计数域误差3排除异常标本的干扰4室内、室间质量评价,亚铁血红素 亚铁血红素 珠蛋白 亚铁血红素 亚铁血红素,血红蛋白结构示意图,（原卟啉、Fe2+） （原卟啉、Fe2+）,（原卟啉、Fe2+） （原卟啉、Fe2+）
6、,（Hemoglobin，Hb或HGB）,亚铁血红素结构示意图,O2,HbA： 22 成人占95%以上,正常血红蛋白的种类(根据珠蛋白肽链的组成),HbA2： 22 成人约占23%,HbF(胎儿Hb)：22 成人1%以下,HbO2(氧合血红蛋白),各种血红蛋白衍生物(据铁原子第六配位键的结合情况),Hbred(还原血红蛋白),HbCO(碳氧血红蛋白),Hi (高铁血红蛋白),SHb(硫化血红蛋白),主要成分,少量,与氧结合,未结合,与CO结合,Fe2Fe3,与S结合,氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN法）,碱羟高铁血红素法（AHD 575法）,十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法),比色法血
7、红蛋白测定方法,一. 原理,Hb,CN,氧化,HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。,HiCN,Hi,注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化,氰化钾 0.05g高铁氰化钾 0.2g磷酸二氢钾 0.14g非离子表面活性剂 1.0 ml蒸馏水 加至1000 ml,二. 试剂,HiCN转化液(文齐液),调pH7.07.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。,氧化,调节pH,促溶,防混浊,提供CN-,三. 方法,4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出K值后计算。 KHb（g）/A,1. 5.0 ml Hb转化液血20ul,混匀,静置5min。,2.分光
8、光度计比色，波长540nm，以空白转化 液调零，测定吸光度“A”。,3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直 接计算Hb浓度。,Hb(g/L)A540 /4400064458251A367.7,氰化高铁血红蛋白测定法,Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 150 0.385 200 0.523,K=Hb/A = 500/1.301 = 384.32,Hb=K A,氰化高铁血红蛋白测定法,1.KCN为剧毒药品，防污染。2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中。 否则CN-下降，结果偏低。3.分光光度计应定期校正并使用 配套的比色杯。4.标准曲线或K值应定期校正。,四. 注意事
9、项,氰化高铁血红蛋白测定法,方法学评价,HiCN法,SDS-Hb法,优点：操作简便；显色快，结果稳定。,缺点：氰化钾有剧毒； 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； HbCO转化慢。,参考方法,优点：操作简单；结果稳定；无公害。,缺点：摩尔消光系数未确定； 破坏白细胞； 质量差异大 。,次选方法,如何采用SDS-Hb法进行血红蛋白测定？,1.HiCN法绘制标准曲线,2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制,1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法 测定吸光度，并求出其Hb浓度。,2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。,3)以4份标本Hb浓度为横坐标，SDS-Hb法测得 的吸光度为纵坐标，绘制标
10、准工作曲线。,成男： 120160g/L成女： 110150g/L新生儿：170200g/L,血红蛋白参考值,RBC和Hb生理性变化,一. 年龄与性别的差异,二. 精神因素,激动、恐惧、冷水浴,三. 剧烈体力运动和劳动,相对缺氧，,四. 气压降低,缺氧，,五. 妊娠中、后期,血液稀释，,6个月2岁婴幼儿,造血原料不足，,某些老人,造血功能减退，,新生儿,母体内相对缺氧，,一. 相对性增多,二. 绝对性增多,2. 继发性红细胞增多,1. 原发性红细胞增多,常见于：心血管疾病、肺部疾病、 异常血红蛋白病等,RBC和Hb病理性增多,血液浓缩,常见于真性红细胞增多症等,见于各种贫血,1.红细胞生成障碍
11、2.红细胞破坏过多3.红细胞丢失过多,贫血的病因分类：,RBC和Hb病理性减少,RBC3.51012L，Hb105 gL,贫血：,造血原料不足骨髓造血功能减退,见于各种溶贫,见于各种出血,贫血时RBC和Hb减少程度可不一致,正色素性贫血：二者成比例减少小细胞低色素性贫血：RBC，Hb大细胞性贫血：RBC，Hb,红细胞计数与血红蛋白测定值一定能正确反映全身红细胞总量的多少吗？为什么？,大量失血尚未补液前：,水潴留：,脱水：,红细胞总量减少,但RBC和Hb测定值不能反映。,红细胞总量未减少,但RBC和Hb测定值显示减少。,红细胞总量未减少，但RBC和Hb测定值显示其增多，如贫血时则可掩盖贫血。,1
12、.Hayem红细胞稀释液各成分有什么作用？2.改良Neubauer计数板中央大方格内每一中 方格的容积为多少？3.氰化高铁血红蛋白测定法的原理。4.技术误差、计数域误差的概念。5.红细胞计数和血红蛋白测定的参考值及意义。,复习思考题,6.选择题1)下列关于血细胞计数池结构的说法错误的是 A.每池为9个大格 B.每大格长宽均为lmm C.中间大格均用双线分为25个中方格 D.每个中方格又被双线分为16个小方格2)取静脉血20l加至0.78ml白细胞稀释液内， 混匀,滴入计数盘,计数五个大方格中白细胞 数为625个,则应报告白细胞计数结果为 A.500109/L B.25.0109/L C.50.0109/L D.62.5I09/L,
