1、变 形 杆 菌 的 检 测,一、概 述,变形杆菌广泛分布于水、土壤、腐败 有机物等自然界和人与动物肠道中，是一类条件致病菌，引起医院感染的常见条件致病菌，耐药菌株日益增多，常引起泌尿系感染等多种感染；污染食物后易在其中繁殖，引起食物中毒。,变形杆菌食物中毒是我国最常见的一类食物中毒之一，全年均可发生，多发于5月10月，以7月9月常见，主要中毒食品为含有大量变形杆菌活菌的熟肉制品和凉拌菜。 该菌引起的食物中毒潜伏期较短，一般为34h，主要症状为恶心、呕吐、腹部剧烈疼痛、腹泻、头疼、发热、全身无力等。腹泻一日数次，多为水样便、少数粘液便，有恶臭。病程较短。,肠杆菌科： 变形杆菌类（Proteus）
2、变形杆菌类： 变形杆菌属（Proteus） 普罗菲登斯属（Providencia） 摩根氏菌属（Morganella）变形杆菌属： 普通变形杆菌（P.vulgaris） 奇异变形杆菌（P.mirabilis） 产粘变形杆菌（P. myxofaciens） 潘氏变形杆菌（P.permeri）,二、生物学特性（一）形态1.菌体形态 变形杆菌为革兰阴性小杆菌，两端钝圆。大小0.40.6m13m，有明显多形性。无荚膜。有周身鞭毛，运动活泼。有菌毛，可粘附至植物和真菌细胞表面，但不能与动物或人类细胞粘附。,奇异变形杆菌悬浮标本的细胞形态，金属镀膜24000 小杆菌，两端钝圆,普通变形杆菌为革兰阴性杆菌，
3、多数为单个存在，也可见成对或短链排列，周身鞭毛，运动活泼，无荚膜。,变形杆菌周身鞭毛 运动活泼,2.培养特性,营养要求不高，需氧及兼性厌氧。在固体培养基上呈扩散性生长，可形成以接种部位为中心的厚薄交替、同心圆型的层层波状菌苔，称为迁徙生长现象。在培养基中加入0.1%石炭酸、0.4%硼酸或4%乙醇，或将琼脂浓度增加至5%，则抑制鞭毛生长，迁徙现象消失。在SS琼脂培养基上形成的菌落为圆形，扁薄半透明，易与沙门菌菌落混淆。,扩散性生长，厚薄交替、同心圆型的层层波状菌苔迁徙生长现象,在SS琼脂培养基上形成的菌落为圆形，扁薄半透明，易与沙门菌菌落混淆，没有迁徙现象。,（二）生化特性变形杆菌可使各种氨基酸
4、脱氨分解，不具有赖氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶，苯丙氨酸脱氨酶阳性，多数产生靛基质并水解尿素，发酵少数糖类，不产生气体或产生少量气体。变形杆菌属的特性表现为甘露糖阴性，蔗糖、麦芽糖、木糖和蕈糖阳性，明胶酶、脂酶、DNA酶阳性，多数产H2S。,（三）致病性 致病物质有肠毒素和脱羧酶。肠毒素 变形杆菌产生的肠毒素，其化学成分为蛋白质和碳水化合物的复合物，具有抗原性，引起中毒性胃肠炎。脱羧酶 摩根变形杆菌可产生具有很强催化作用的脱羧酶，使食品中的组氨酸脱羧产生组胺，导致人体过敏性中毒。,三、实验室检验,WS/T 91996,1、样品采集：中段尿、脓、痰、血液食物中毒标本：可疑食物、粪便2、增菌培养：
5、样品接种于GN肉汤，36士1培养24h。,3、分离培养分离平板：接种于EMB平板或SS平板，置37培养1824h，观察菌落形态特征。典型变形杆菌在EMB培养基上为无色透明，部分蔓延生长；在SS培养平板上形成单个菌落，有的菌落边缘呈扩散状，有粘性，打开平皿时有臭味。将可疑菌落转种三糖铁斜面，37培养24h观察结果。,EMB培养基上为无色透明菌落,SS培养基上形成单个菌落，菌落中心呈黑色，有粘性，打开平皿时有臭味,血平板上形成无色透明菌落迁徙现象明显，不溶血,4、初步鉴定 将三糖铁培养基上乳糖反应阴性、硫化氢阳性或阴性的菌株接种尿素和苯丙氨酸鉴定培养基，37培养24h，变形杆菌二者均为阳性。 变形
6、杆菌易与沙门氏菌混淆，但变形杆菌能够水解尿素。,三糖铁结果：K/A 产H2S尿素分解阳性,5、生化试验 经初步鉴定符合变形杆菌特征菌株， 按表3-8-1、3-8-2、3-8-3、3-8-4中项目进行生化鉴定试验，并判定种属或种群。也可用API20E和全自动微生物分析系统进行生化鉴定。,奇异变形杆菌 API20E 结果,API 20E报告单 奇异变形杆菌,6、变形杆菌菌数的测定 在变形杆菌食物中毒诊断检验时，需要对可疑食物进行变形杆菌活菌计数，常采用近似计数法。 将检样在研钵中研磨制成悬液后，用生理盐水对原样品进行10-2、10-3、10-4、10-5等稀释度的稀释，分别移取各稀释度的悬液0.1
7、ml接种于琼脂斜面底部的凝结水内，但勿接触培养基斜面表面。37培养2448 h，观察生长状况。变形杆菌可自下而上弥漫生长，以出现生长的最高稀释度乘以10，则为每克检样中变形杆菌的最近似数。,7、血清学实验 在食物中毒诊断和判定中，需要对来自可疑食物与患者的菌株进行血清型别鉴定，以判定其同源性，如果没有分型因子血清，可做患者血清效价和交互吸收试验。如果这两个实验不能做，至少应该将待试菌株分别点种在普通营养琼脂平板的两端，待两侧的菌株蔓延生长到平板中间，菌苔完全融合，说明两株细菌没有拮抗现象。 8、动物试验 检样中分离纯化出的变形杆菌培养物，分别饲喂小白鼠或豚鼠、家兔等供试动物，如供试动物出现寒战、竖毛、腹泻等中毒症状则进一步证实为变形杆菌引起的中毒事件。,谢谢大家,
