1、结膜印迹细胞学,陈辉美国DEAN A MCGEE 眼科研究所博士后四川省人民医院眼科副主任医师,原 理,方 法,CIC的结果判定标准,CIC的临床意义,原 理,由于在各种致病因素（如： vit a缺乏，感染，过敏损伤等）的影响下，眼表细胞（结膜、角膜上皮、杯状细胞）在细胞间连接和细胞的形态、细胞的炎性标志的表达等方面将发生相应改变，这就为对眼表疾病的检测提供了病理学基础，传统的思维是对眼表进行刮片等侵入性方式作病理检查，但其敏感性、特异性均不令人狻1977年，Egbert 在眼科使用醋酸纤维膜（Acetate Cellulose）以来，结膜印迹细胞学（Conjunctibai Impressi
2、on Cytology）得以迅速发展。,原 理,由于醋酸纤维膜为惰性物质，不与组织反应，无毒性，但具有粘附性，使其成为一种对眼表疾病进行非侵入性病检的理想工具，然后将所有取下的标本与传统的染色、免疫荧光、过氧化物酶染色、电泳等技术相结合，使眼科工作者能够对相关疾病作出早期诊断、治疗、预防。,方 法,（一）传统细胞学检查：,（二）免疫过氧化物酶染色：,（三）免疫荧光染色：,目前，传统的细胞学染色方法甚多，染色原理基本相同，现仅简介其中的一种细胞学染色方法： 1，用醋酸纤维膜印取结膜、角膜细胞、分泌物并固定。 2，按序使用过碘酸、Shiffs试剂、Mayers苏木精、95%乙醇、100%乙醇进行细
3、胞染色。,（一）传统细胞学检查：,（一）传统细胞学检查：,3，使用透明液（10%乙醇：冰醋酸=7:3体积比）对纤维膜进行透明。 4，载片镜检。,（二）免疫过氧化物酶染色：,1，用纤维膜印取标本并固定。 2，以磷酸缓冲盐为浴液，将标本先后置于抗体浴液（免抗HSV-1抗体，鼠抗VZX抗体）和商业用过氧化物酶抗过氧化物酶试剂盒中培育。 3，镜检。,（三）免疫荧光染色：,1，用纤维膜印取标本。 2，将标本先后置于第一抗体（鼠抗-VZX抗体）和第二抗体（FITC标记的山羊抗鼠IgG抗体中。 3，荧光显微镜下镜检。 4，相对应，以HLA DR 的单克隆抗体，IgE受体的单克隆抗体为第一抗体，以fluror
4、esccin isothlecyanate标记的抗鼠免疫球蛋白抗血清为第二抗体，可检测细胞炎性表达物。,CIC的结果判定标准,一、细胞学评价：,二、免疫过氧化物酶染色（+）：,三、免疫荧光学评价：,一、细胞学评价,1、评价内容:,2、Tseng的六级分类标准:,1、评价内容,(1)视野（1-3个）中杯状细胞存在与否及密度。(2)上皮细胞核形态改变情况。(3)上皮细胞核浆(N/C)比值。(4)胞浆染色后颜色变化情况。,2、Tseng的六级分类标准:,0级：为正常细胞，上皮大小基本一致，胞浆呈蓝绿色，上皮细胞散在中等量杯状细胞，N/C=1:1但需注意杯状细胞密度随取材部位不同而存在生理分布差异。（
5、高-）低：鼻侧睑结膜颞侧穹隆角巩膜缘)级：杯状细胞开始减小，但无角化，杯状细胞密度下降，结膜上皮细胞轻度扩大，胞浆仍呈蓝绿色，N/C=1/21/3.级：杯状细胞全部丧失，但无角化，所有结膜上皮细胞均扩大变扁，胞浆蓝绿色或粉红色，N/C=1/4.,2、Tseng的六级分类标准:,级：早期轻度角化。所有上皮细胞胞浆均呈粉红色，上皮明显角化，部分胞浆内可见角蛋白，N/C=1/6.级：中度角化，除上述级改变外，许多细胞内见大量堆积的角蛋白及角质透明蛋白颗粒，胞核固缩或崩解成碎片。级：严重角化，上皮胞浆浓缩，可见大量角蛋白、胞核固缩或崩解成碎片。,三、免疫荧光学评价：,1，正常人：针对类抗原HLA DR
6、和IgE受体CD23的免疫细胞学为阴性，但少数人孤立的树突细胞和抗-HLA DR单克隆抗体强反应，但不和抗CD23单克隆抗体反应，有10%的人的标本对抗-HLA DR抗体和/或抗CD23抗体产生小部分细胞弱反应。2，慢性结膜炎：在大部分结膜炎中都和单克隆抗体强烈反应。在大部分标本中，两种抗体皆反应，但 HLA DR阳性细胞反应更常见，在应用激素的患者因免疫抑制作用，标本可呈阴性。,三、免疫荧光学评价：,3，泪液缺陷患者：24 名临床干燥角化异物患者两种抗体(一).2名Sjogrens Syndrome患者HLA DR(+)(90-10%的结膜细胞)：IgE受体(一) ，（10%结膜细胞阳性St
7、evens-Johnsen Syndrome患者HLA DR(+),IgE受体（+）（95%的结膜细胞阳性）。8个标本泪液缺陷者对HLA DR,IgE受体示若阳性。4 ，在HSV,VZV,腺病毒感染者，免疫荧光99.5100%阳性，具有高度特异性、敏感性。,CIC的临床意义,目前运用CIC对眼表各种疾病的检测结果显示其异常改变如下：1，VitA缺乏病：CIC分级多在3-4 级，该法敏感特异，而传统的VitA缺乏主要依靠血清测定VitA含量，繁琐、昂贵，难以广泛开展，CIC的优势显而易见。2，Thiel采用改良的免疫印迹细胞学技术检测HSV,VZV腺病毒眼表感染者，同样具有高度特异性、敏感性。3
8、，Rivas的研究示：CIC是Sjogern Syndrome的特异敏感检查方法。,CIC的临床意义,4，Adar在研究角膜接触镜配戴者（尤其是主诉不适者），CIC显示：杯状细胞数降低，且在细胞学形态，杯状细胞密度，核蛇样变等方面有显著改变，显然通过CIC对角膜接触镜配戴者以及眼表机械化学、物质损伤的随访，评估有重要意义。5，Baudouin采用间接免疫荧光法在CIC标本上发现类组织相容性抗原HLA DR核IgE受体CD23两种炎性标志，此法对研究结膜的炎症，过敏提供了有用的方法，对眼表异常的诊治同样有帮助。,CIC的临床意义,6，某些学者也将CIC应用于结膜、角膜移植术后的修复、生长的观察，以及眼科用药对眼表的影响，甚至眼表肿瘤的检查。,
