1、毕业论文开题报告生物工程榨菜低盐腌制体系中优势种群的分子鉴定及分析一、选题的背景与意义蔬菜的腌制加工，在我国已有悠久的历史,但是传统的蔬菜腌制工艺均采用高盐进行腌制。成品盐度太高，而食用过多的食盐对人体某些器官会造成永久性损坏。因此，我国人民对高盐腌制食品也越来越不欢迎。低盐腌制蔬菜因其可以保持蔬菜原有的营养成分以及有益人体健康而受到越来越多的消费者的喜爱，并在迅速占领市场。在低盐条件下势必引起各种微生物的生长，因此，在此条件下使腌制保藏过程正常化的过程是一个十分复杂的微生物学发酵过程，同时伴随着复杂的生物化学变化和物理变化。目前,我国各种蔬菜腌制品的发酵,都是借助于天然附着在蔬菜表面上的微生
2、物的作用来进行的。据测定,蔬菜收获后表面所含的微生物不仅种类多,而且数量大,但有益菌一般数量都较低。本研究采用的SSCP方法体现了一种快速、简易的研究微生物群落结构的方法，但是测序列较短，个别可能只确定属、科分类地位，无法精确地鉴定到种，所以结合16SRDNA/RRNA的序列分析来进一步进行研究。我们从环境微生物样品中提取出RRNA或总DNA后，利用PCR扩增、和DNA测序等技术分析微生物样品的16SRDNA，从而对环境微生物进行检测，或对其进行分类、定位。RDNA或RRNA序列既具有保守性,又具有高变性,是目前细菌分类和鉴定经常使用的一种检测方法。本研究采用分子检测的方法和传统微生物学方法相
3、结合，总结出蔬菜腌制体系中的特征微生物。根据已有的实验基础进一步系统地研究主要微生物对风味的形成、和营养作用等，从而揭示腌制体系得到优良产品的重要微生物的贡献。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究内容（1）蔬菜腌制过程中微生物含量和发酵液PH的测定关键时间点分别取蔬菜腌制液，测出发酵液中所含微生物的总量和乳酸菌的数量，并测定蔬菜腌制液的PH。（2）蔬菜腌制过程中优势菌系的分子分析关键时间点分别取蔬菜腌制液，采用16SRDNA建立该腌制体系的基因文库并且与单链构象多态性PCRSSCP方法、传统的分离鉴定方法进行比较分析，总结出腌制样品中的特征微生物。拟解决的关键问题16SRDNA克隆文库的构
4、建。三、研究的方法与技术路线1技术路线2主要方法（1）、选取当季蔬菜，称量装坛，进行腌制（2）、根据微生物的关键时间点取不同盐浓度样，分别进行微生物总数、乳酸菌数和腌制液PH的测定，总结出腌制品质比较优良的盐浓度。（）根据最佳盐浓度腌制菜，进行分子检测，总结出蔬菜腌制体系中的优势群落。（）针对优势菌群进行相关的功能分析。四、研究的总体安排与进度2010年11月初2010年11月底实验前的准备工作查找资料，撰写开题报告；准备实验；2010年11月中旬2010年12月底根据季节腌制当季蔬菜，测定发酵过程中总菌数，确定关键时间点并取样，提取并优化提取样品中细菌总DNA的方法。2011年3月中旬201
5、1年4月底采用细菌扩增通用引物27F和1492R进行PCR扩增与扩增产物鉴定和纯化，DNA序列测定与分析；2011年5月初整理试验结果，论文初稿和校对。五、主要参考文献1陈意音，食品科学94518222李雄辉蔬菜低盐腌制过程中的酸度变化及控制J中国调味品,1995,61113腌制蔬菜预处理成品取样测定、分析总菌数、乳酸菌数16SRDNA序列测定腌制液PH测定3王岩,沈锡权,吴祖芳PCRSSCP技术在微生物群落多态性分析中的应用进展J生物技术,2009,19384874薛燕，常洪，常国斌PCRSSCP技术在动物育种中的研究进展J畜牧兽医杂志，2005，24321255董承良，邓昌彦基因突变检测技
6、术进展J黄牛杂志，1998，2349526孙志宏,孟和,孙天松,等分子标记技术用于乳酸菌分类鉴定研究进展J中国乳品工业,2006,34535377乌日娜，张和平，孟和毕力格酸马奶中乳杆菌的16SRDNA基因序列及聚类分析J中国乳品工业，2005,336498李学贵,严晓燕低盐化榨菜生产原理及其应用初探J中国酿造,20045469吴祖芳,刘璞,翁佩芳榨菜加工中乳酸菌技术的应用及研究进展J食品与发酵工业,2005,318737610施安辉,周波蔬菜传统腌制发酵工艺过程中微生物生态学的意义J中国调味品,2002,5111511任涛微生物对蔬菜腌制品风味及品质的影响J中国调味品,1989,716221
7、12BOONN,TOPEM，VERSTRAETEWBIOAUGMENTATIONASATOOLTOPROTECTTHESTRUCTUREANDFUNCTIONOFANACTIVATEDSLUDGEMICROBIALCOMMUNITYAGAINSTA3CHLOROANILINESHOCKLOADJAPPLIEDANDENVIRONMENTALMICROBIOLOGY，2003,691511152013马迪根,马丁克著,杨文博译，微生物生物学M北京科学出版社,200176777314刘年峰16SRDNA技术及在水产养殖细菌分析中的应用前景J现代渔业息,2004,19126815肖勇16SRRNA/
8、RDNA序列分析技术应用于环境微生物群落的初步研究湖南大学硕士论文湖南湖南大学,200716白洁,李海艳,赵阳国黄海西北部沉积物中细菌群落16SRDNA多样性解析J微生物学报,2009,4934335017杨官品,茅云翔环境细菌宏基因组研究及海洋细菌生物活性物质BAC文库筛选J青岛海洋大学学报,2001,3L571872218李志岗、杨官品、朱艳红水环境细菌16SRDNA限制性片断长度多型性及群落结构的分析J水生生物学报,2001,25212312519MARCHESIJ,SATOR,WEIGHTMANAJETA1DESIGNANDEVALUATIONOFUSEFULBACTERIUMSPEC
9、IFICPCRPRIMERSTHATAMPLIFYGENESCODINGFORBACTERIAL16SRRNAJAPPLIEDANDENVIRONMENTALMICROBIOLOGY，1998，6479579920BOTSTEINDR,WHITERL,SKOLNICKM,ETALCONSTRUCTIONOFAGENETICLINKAGEMAPINMANUSINGRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISMSJAMJHUMGENET,1999,3231433121燕平梅,张慧,薛文通,等16SRDNA基因序列方法分析传统发酵菜中乳酸菌多样性J中国食品学报,2007,7211912322张彤，方汉平微生物分子生态技术16SRRNA/DNA方法J微生物学通报,2003,3029710123AMMANRJ,LUDWIGW,SCHLEIFERKHMICROBIOLREV,1995,59143169124李国媛,李俊,姜昕,等应用16SRDNA克隆文库法分析有机物料腐熟菌剂细菌组成J微生物学通报,2007,34593994225都立辉,刘芳16SRRNA基因在细菌菌种鉴定中的应用J乳业科学与技术,2006,5207209
