基于基于抗原抗体反应的检测方法.ppt
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1、免疫学检测原理,第一节基于抗原-抗体反应 的检测方法,学习目的 :一、掌握抗原-抗体结合反应的特点二、了解影响抗原-抗体反应的因素三、学习抗原-抗体反应的基本检测方法,抗原-抗体反应: 指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。,主要应用:用已知抗原检测未知抗体用已知抗体检测未知抗原定性或定量检测体内各种大分子 物质用已知抗体检测某些药物、激素和 炎性介质等各种半抗原物质,一、抗原-抗体结合反应的特点,高度特异性定义:一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体 结合。分子基础:抗原表位与抗体的抗原结合部位间存在 分子结构的互补性,二者可特异性结合。交叉反应 共同抗原决定基刺激机体产生的抗体
2、分别与两种抗原 ( 共同抗原 ) 结合发生反应。机理:具有相同的抗原表位,抗原-抗体结合的带现象与可见性前带现象:抗体过剩 后带现象:抗原过剩网格复合体:抗原、抗体的数量比例合适。 反应体系基本不存在游离的抗原或抗体,形成肉眼可见的反应物(沉淀物或凝集物)。,可逆性 抗原-抗体反应为分子表面的非共价键结合,结合虽稳定但可逆。,过剩方结合价未被完全占据,成游离小分子复合物或解离,不可见,二、抗原-抗体反应的影响因素,内因:1)抗体的特异性和亲和力 2)抗原理化性质、抗原表位多寡和种类 3)抗原抗体的浓度、比例 (影响最大,决定因素)外因:1)电解质 使抗原-抗体复合物失 去电荷而凝集,出现可见反
3、应 2)酸碱度 最适pH68 3)温度 适宜(可增加抗原 与抗体的碰撞机会,加快结合速度),三、抗原-抗体反应的基本检测方法,凝集反应:细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体直接反应出现凝集。沉淀反应:可溶性抗原与相应抗体结合后, 在一定条件下出现肉眼可见的沉淀。补体参与的反应:应用抗体与红细胞表面抗 原结合,激活反应体系中的补体成分, 根据溶血现象判定试验结果。免疫标记技术:用荧光素、酶、 放射性核素或化学发光物质等标 记抗体或抗原,进行抗原-抗体 反应的检测.,单向免疫扩散:,特点:定性半定量,用途:可用于测定血清IgG IgM IgA 和C3等的含量,原理:沉淀环的直径与抗原含量呈正相关,操
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