1、本科毕业论文系列开题报告食品质量与安全橘子及其加工制品中的赤霉素检测一、选题的背景与意义赤霉素是一种广谱性植物生长调节剂，几乎在植物生长、发育的各个阶段都起着调节作用。自1935年日本科学家从水稻赤霉菌中分离出一种活性制品，并得到结晶，定名为赤霉素（GA）以来，目前已从高等植物和微生物中分离出70余种赤霉素。赤霉素是植物的四大类激素之一，广泛地存在于植物组织中。橘子CITRUS，芸香科，柑橘属，原产地中国。在我国栽培橘子已经有4000多年历史，而且分布十分广泛。我国生产柑橘包括台湾省在内有19个省市、自治区，种植的县市、区有985个。柑橘果实营养丰富，胡萝卜素维生素A原含量仅次于杏，比其他水果
2、都高。除含多种维生素外，还含镁、硫、钠、氯和硅等元素。同时，它色香味兼优，既可鲜食，又可加工成以果汁为主的各种加工制品，广受消费者的青睐。世界有135个国家生产柑橘，年产量102822万吨，面积10730万亩，均居百果之首。我国水果总产量5000万吨，位居世界首位，但出口量仅为16万吨，占世界水果出口总量的3。中国加入世界贸易组织后，我国对外贸易的国际环境得到较大改善。然而，我国的农产品出口并没有因此而大幅度提高，直接原因是农残超标，检验检疫方面不过关。根据日本肯定列表最终数据查询2006年5月29日起实施暂定菠菜、菠萝、草菇、草莓、橙包括脐橙、葱包括韭葱大白菜、大蒜、豆瓣菜、鳄梨、番木瓜、番
3、茄、番石榴、繁殖洋葱等使用的最高限量MRL为02PPM；美国USA允许苹果中的农药残留限量要求（1999年3月15日）联邦法律条款（40CFR120）赤霉素残留限量（TOLERANCE,PPM）为05。然而据相关资料显示，我国现在对于赤霉素检测的标准只有两个SN03501995出口水果中赤霉素残留量检验方法（行业标准）和DB11/T3792006豆芽中4氯苯氧乙酸钠6苄基腺嘌呤、2,4滴、赤霉素、福美双的测定（北京地方标准）。由此可见我国产品标准的制定与国际标准和国外先进标准差距较大。同时，检验检疫实验室作为技术执法的主体，检测力量不足，检测技术和方法落后，不仅严重阻碍中国农产品的出口，而且造
4、成控制产品质量上的空缺，使我国农产品质量难以与国际接轨。因此，建立一种高效、准确检测水果中赤霉素的检测方法，已是迫在眉睫。橘子在我国出口水果的重要组成部分，通过研究橘子及其加工制品中赤霉素的检测方法，一方面，可以确保橘子及其加工制品的正常出口，另一方面，对研究其他农产品中赤霉素检测也可以提供参考。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容以橘子及其加工制品（如橘子罐头等）中的赤霉素为研究对象，采用SPE固相萃取结合高效液相色谱、液质联用仪等方法，对橘子及其加工制品中的赤霉素的检测进行研究，并优化其条件。1、筛选适合样品（橘子及其加工制品）的前处理方法；2、采用色谱分析方法，对橘子及其加工制品
5、中的赤霉素进行检测，优化分析条件；3、建立相关的检测方法，并明确相关检测方法的回收率、检测限等。拟解决的问题1、样品中赤霉素提取溶剂的选择；2、筛选出样品中赤霉素浓缩和净化的前处理方法；3、固相萃取（SPE）与高效液相色谱检测路线的条件优化；4、色谱条件对于标准品检出的影响，确定优化的色谱条件。三、研究的方法与技术路线1、资料检索以“赤霉素”、“GA3”、“高效液相”、“液质联用”、“气相色谱”等为检索词，检索中国期刊全文数据库（19892010）、万方数据库（19892010）和维普数据库（19892010）等数据库，以“GIBBERELLIN”、“GA3”、“HPLC”、“LCMS”等为关
6、键词检索SCIENCEDIRECTOR1989,2010，查找相关文献。2、优化色谱条件采用高效液相色谱和LCMS检测器对标准样品溶液进行检测，分析得到赤霉素的保留时间。通过分析色谱图，研究色谱条件的改变对标样检测的影响。3、筛选前处理方法根据相关文献，采用SPE固体萃取柱将前处理后的样品进行净化，并通过色谱分析的结果筛选出适合样品（橘子及其加工制品）的前处理方法。4、建立检测方法根据实际样品的色谱结果，进一步完善色谱条件等，建立相应的检测方法。并在此检测方法下，确定赤霉素的检出限，绘制标准曲线，计算RSD值等。5、技术路线橘子及其制品中赤霉素的检测四、研究的总体安排与进度2009年9月201
7、0年11月1、实验前的准备工作查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2、文献整理，实验方案的确定，完成开题报告。2010年10月2011年月1、开展实验；2、优化实验方案中的各条件；3、获得实验过程中的各类数据。2011年3月2011年5月1、整理和补充相关数据，整理实验结果；2、撰写论文初稿；3、论文定稿。五、主要参考文献1中国农科院植保研究所等编农药分析,化学工业出版社,北京,19982李金,石晶,赵晓亮等分析化学，1994,2288018043丁静,沈镇德,方亦雄,等植物内源激素的提取分离和生物鉴定J植物生理学通讯,1979,52284罗正荣,吴谋成,章文才植物组织中赤霉酸含量的
8、高效液相色谱测定J植物生理学通讯,1990,2625052查找相关文献，制定基本的实验流程分析检测结果准备实验材料，试剂和了解相关仪器的原理及使用方法筛选适合样品（橘子及其加工制品）的前处理方法优化LCMS分析条件建立相应的检测方法绘制标准曲线，测定检测限，计算回收率、RSD优化HLPC分析条件配置赤霉素标准溶液5上海市“920”协作组“九二”的应用和土法生产M上海上海人民出版社,19736印天寿,陈世勇,于群英,等赤霉素的快速分光光度测定法的研究J分析化学,1990,18109669697中国科学院植物研究所、遗传研究所“920”编写小组“920”农药技术资料汇编第L集北京科学出版社1970
9、8陈玉銮,王占文,孙思祥赤霉素的磷钼杂多酸光度测定法研究J南京化工学院学报,1993,15151549白玉明,赵良启赤霉素荧光比色测定方法的研究J山西大学学报自然科学版,1990,13443043310薛泉宏,李东,汤莉赤霉素荧光测定法改进研究J西北农业大学学报,2000,284343911SHENGJIEHOU,JIANGZHU,MINGYUDINGA,ETALSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFGIBBERELLICACID,INDOLE3ACETICACIDANDABSCISICACIDINWHEATEXTRACTSBYSOLIDPHASEEXTRACTIONANDLI
10、QUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYTANDEMMASSSPECTROMETRYJTALANTA,20087679880212王勇,程金芬高效液相色谱法检测赤霉素A3组份J中国抗生素杂志,1990,4353713陈小鹏,王秀峰,孙小镭,等高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素和脱落酸含量J山东农业科学,20051656714唐根源,吴红京高效液相色谱法测定小麦幼苗中植物生长调节剂J分析试验室,1997,165666915朱智甲,郝振芳,张晓惠,等高效液相色谱紫外检测法测定小麦幼苗中的内源激素J光谱实验室,1999,16328128316湛社霞,孙世宏,臧李纳,等高效液相色谱法
11、测定水果中的赤霉素、苯甲酸、糖精钠和胭脂红J中国卫生检验杂志,2008,1871330133217陈波浪,郑春霞,盛建东,等HPLC分离和测定棉花中3种植物激素J新疆农业大学学报,2006,291283018XIEJUN，ZHANGYIZHENGDETERMINATIONOFPLANTINTRINSICHORMONESBYREVERSEDPHASEHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYJJOURNALOFINSTRUMENTA1ANALYSIS2001,1606219WANGRUOZHONG,XIAOLANGTAO,LANWANHUANG,ETA1HIGHPER
12、FORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHICDETERMINATIONOFINTERNALHORMONESININTERSUBSPECIFICHYBRIDRICEJCHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHY2002,214815720张有林,党娅,张静,等高效液相色谱法同时测定银凤桃中的赤霉素和脱落酸J西北植物学报,2005,2571467147121GROLAMYSCASTILLO,SERVANDOMARTINEZREVERSEDPHASEC18HIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYOFGIBBERELLINSGA3ANDGA1
13、JJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,1997,782113713922葛雅琨,张元新,胡睿,等蔬菜中赤霉素残留量的高效液相色谱检测方法研究J吉林化工学院学报,2005,222131623张政,张强,王转花高效液相色谱法测定赤霉素A3的含量J色谱,1993,11425425524顾觉奋,王义明,刘文华赤霉素A3的反相高压液相色谱分析J中国抗生素杂志,1991,16537037525张玉宗,陈振玲,吕杏者,等高效液相色谱法测定谷子幼苗中的GA1和GA3J色谱,1999,17546947226乔坤云,张敏高压液相色谱测定新疆库尔勒香梨中赤霉素GA3方法研究J特产研究,20024252
14、627朱曙东,赵琛,赵文君,等反相高效液相色谱分析赤霉素GA3含量J药学学报,1993,281078879128黄红林,刘实,张桃芝固相萃取一高效液相色谱测定番茄中的赤霉素GA3残留J分析科学学报,2005,251757729付磊,陶燕飞气相色谱法测定草莓中的赤霉素J武汉科技大学学报自然科学版,2002,25435936030许庆琴，范哲锋,杜黎明大口径毛细管气相色谱法快速测定植物组织中的赤霉素J分析科学学报，2000,16652431黄红林,张桃芝,刘实,等SPEGCMS选择离子法直接测定果品中赤霉素残留量J理化检验化学分册,2006,319419632马焕普用GCMS检测苹果种子层积过程中
15、内源MEJA,GA3,GA4和GA7的变化J植物生理学报,1996,221818833吴萍,刘玲芥蓝未熟种子赤霉素的GCMS定性分析J质谱学报,1997,182677634梁沛,张桃芝,黄红林固相萃取液相色谱串联质谱法测定水果中的赤霉素GA3残留J第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集,200611686935刘艳琴,王浩,杨红梅,等高效液相色谱一串联四极杆质谱联用测定水果和蔬菜中赤霉素残留量J现代农业科技,20091633033136王骏,张卉,胡梅,等液相色谱一质谱测定猕猴桃中赤霉素和脱落酸的含量J食品工业,20084747637SHENGJIEHOU,JIANGZHU,MINGYUDING
16、A,ETALSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFGIBBERELLICACID,INDOLE3ACETICACIDANDABSCISICACIDINWHEATEXTRACTSBYSOLIDPHASEEXTRACTIONANDLIQUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYTANDEMMASSSPECTROMETRYJTALANTA,20087679880238何解定中国突破农产品出口技术壁垒的对策研究J社会纵横,2009,24142829毕业论文文献综述食品质量与安全果蔬中赤霉素检测方法的研究现状摘要赤霉素是广泛应用于工农业生产各领域的一种植物激素，其残留过量
17、则会对人体造成危害。目前我国还没有建立关于赤霉素的国际标准。本文介绍了我国果蔬出口国的赤霉素含量的要求，分析了传统检测赤霉素方法的缺点，并重点介绍了目前用于果蔬中赤霉素的检测方法及其研究现状。关键词赤霉素；检测；高效液相色谱赤霉素是一种广谱性植物生长调节剂，几乎在植物生长、发育的各个阶段都起着调节作用。赤霉素在植物体内的形成部位一般是嫩叶、芽、幼根以及未成熟的种子等幼嫩组织。1926年日本病理学家黑泽在水稻恶苗病的研究中发现水稻植株发生徒长是由赤霉菌的分泌物所引起的。1935年日本薮田从水稻赤霉菌中分离出一种活性制品，并得到结晶，定名为赤霉素（GA）。第一种被分离鉴定的赤霉素称为赤霉酸（GA3
18、），现已从高等植物和微生物中分离出70余种赤霉素。图1赤霉素的结构图赤霉素中生理活性最强、研究最多的是GA3。它能显著地促进植物茎、叶生长，特别是对遗传型和生理型的矮生植物有明显的促进作用；能代替某些种子萌发所需要的光照和低温条件，从而促进发芽；可使长日照植物在短日照条件下开花，缩短生活周期；能诱导开花，增加瓜类的雄花数，诱导单性结实，提高坐果率，促进果实生长，延缓果实衰老。除此之外，GA3还可用于防止果皮腐烂；在棉花盛花期喷洒能减少蕾铃脱落；马铃薯浸种可打破休眠；大麦浸种可提高麦芽糖产量等等。赤霉素作用广泛1,2，但属于低毒植物生长调节剂，当大量使用时会产生一定毒性。我国目前还没有相关的国家
19、标准，有必要建立高灵敏、快速的赤霉素残留检测方法。1国内外赤霉素限量要求根据日本肯定列表最终数据查询2006年5月29日起实施暂定菠菜、菠萝、草菇、草莓、橙包括脐橙、葱包括韭葱大白菜、大蒜、豆瓣菜、鳄梨、番木瓜、番茄、番石榴、繁殖洋葱等使用的最高限量MRL为02PPM。美国USA允许苹果中的农药残留限量要求（1999年3月15日）联邦法律条款（40CFR120）赤霉素残留限量（TOLERANCE,PPM）为05。中国台湾2007年2月1日公布了有关食品内杀虫剂残留限量草案以及拟撤消杀虫剂最大残留限量MRLS遗漏名单中的杀虫剂，草案对芹菜内的赤霉素GIBBERELLICACID也规定了最大残留限
20、量。在国内关于赤霉素检测的标准有以下两个SN03501995出口水果中赤霉素残留量检验方法（METHODFORTHEDETERMINATIONOFGIBBERELLICACIDRESIDUESINFRUITSFOREXPORT），此为行业标准，主要采用方法为荧光分光光度计法；DB11/T3792006豆芽中4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2,4滴、赤霉素、福美双的测定，此为北京地方标准，主要采用方法为HPLCDAD法。但是，目前还未建立相关的国家标准。2果蔬中赤霉素的检测方法赤霉素的测定方法主要有三大类生物鉴定法、免疫法和物理化学法。生物鉴定法灵敏度虽高，但准确度不很好，且操作费时3；免疫法的准
21、确度和灵敏度很高，但因制备抗体复杂而难以推广4。常见的理化测定法主要有荧光比色法、紫外分光光度法、溴酸钾滴定法5、福林反应法6、2,4二硝基苯肼比色法7、磷钼杂多酸法8等。荧光法9,10是GA测定的经典方法，但该法操作过繁，试剂消耗量大，且需要真空泵及冰浴等条件；紫外分光光度法的准确度都易受杂质的干扰而降低；溴酸钾滴定法选择性较差，不能用于发酵液中赤霉素测定。而且这些方法都只能检测同系混合物的总量，不能分辨各有效成分，尤其是GA3含量，因此不符合检验标准，特别是不能满足出口检验要求。随着色谱仪、质谱仪的出现，很大程度上解决了这一大难题。质谱分析仪具有高灵敏度和选择性，因此是检测植物激素最有效的
22、检测器。最近几年，LCESIMS/MS已被用于检测植物样品中的IAA和ABA，但是被用于检测GA3的报道比较少11。国内外对果蔬原料中的赤霉素进行定性和定量的研究常采用HPLC法、GCMS法、LCMS法等方法。21高效液相色谱法高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法。在70年代末，高效液相色谱开始逐步用于检测除乙烯以外的植物激素。国外研究者那时也开始研究用高效液相色谱仪来分离检测赤霉素组份的含量了。REEVE等人在把赤霉素各组份的羧基酯化后，再用高效液相色仪来分离其酯化衍生物。LINJT等则是用反相高效液相色谱技术来直接分离赤霉素各组份。实验证明12高效液相色谱对赤霉素的定性、定量测量是准确
23、可靠的。目前，HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。高效液相色谱测定植物样品中内源激素含量时，经常见到分离效果差、峰形不良及严重拖尾现象，这些都与流动相、流速、检测器种类和检测波长关系很大，因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条件较为重要13。赤霉素是重要的内源性激素之一，在植物中的含量较少，为方便检测，很多研究建立同时检测植物中多种激素的方法。唐根源14和朱智甲15等人均采用用反相高效液相色谱紫外检测法来测定麦苗中激素的含量，选择最佳色谱条件显仪器参数，建立了相应的检测法。湛社霞等人16研究并建立高效液相色谱法测定水果中赤霉素、苯甲酸、糖精钠和胭脂红含量的方法。陈波浪等17采
24、用高效液相色谱法HPLC测定棉花体内吲哚3乙酸IAA、玉米索Z和赤霉素GA3。但是同时检测多种植物激素不能获得每种植物激素的详细信息，同时，随着贸易问题的加剧，建立特定植物激素在植物中的定性和定量方法也显得越来越重要。通过改变色谱条件及适当的前处理方法，可以使植物内源性激素的有效分离，从而建立单独检测果蔬中赤霉素的HPLC方法。高效液相色谱法HPLC具有灵敏度高、专一性强和重复性好等特点，谢君18曾采用HPLC内标法测定GA3和ABA，但内标物必须具有和测定物相似的结构和性质，因而确定内标物难度较大。但是由于赤霉素在植物中的含量较少，因此前处理很关键。王若仲等19用HPLC测定GA3和ABA，
25、在样品提取过程中要连续经过3种分离柱PVPP，DEAE，SEPPAKC18，前处理十分复杂。对此，张有林等20采用HPLC外标法同时分离和测定GA3和ABA，前处理简单，所测成分损失少，灵敏度高，并具有较高的回收率和精密度。而GROLAMYSCASTILLO和SERVANDOMARTINEZ21则采用反相C18高效液相色谱法，建立了赤霉素GA3和GA1的检测方法。葛雅琨等22使用高效液相色谱HPLC对蔬菜中的农药GA3残留进行分析检测，建立了液液萃取与SPEPAKC18固相萃取相结合纯化GA3的方法。通过不同的加标方式及优化前处理和检测方法，可以有效地提高赤霉素的分离度。目前在植物体内发现的1
26、08种赤霉素中，A1（GA1）和赤霉素A3（GA3）是影响植物株高的主要因素，一般常以生理活性最强的GA3作为检测指标。GA1和GA3的结构类似且各自的质量比很低，检测起来很困难，曾经通用一时的荧光比色法、碘量法等都只能测出赤霉素总含量，而不能测出各个成分的含量。对此，张政等23采用反相HPLC方法，实现了农用赤霉素各组分较好地分开。赤霉索A3为极性物质，发酵液中一些杂质为非极性物质，顾觉奋等24针对赤霉素的这个特点，采用用反相色谱柱，就使赤霉素的色谱峰出现较早，这样既节省了实验时间。张玉宗等25研究发现采用价格便宜的甲醇磷酸盐缓冲液为流动相，10MIN内实现了GA1和GA3的分离。乔坤云等2
27、6也通过优化色谱条件和色谱参数，建立了新疆库尔勒香梨中赤霉素（GA3）高压液相色谱的测定方法。高效液相色谱除了可以有效地分离植物内的各个赤霉素同系物，同时还可以用于赤霉素的定量检测。朱曙东等27在研究赤霉素的定量检测方法时，运用RPHPLC成功地将GA3与其它组分分离，建立了精确测定GA3含量的新方法。其优越性全面超出各传统分析方法，可望成为赤霉素质量分析的标准方法。黄红林等28研究建立了固相萃取高效液相色谱SPEHPLC法来分析测定番茄中赤霉素GA3残留量。22GC和GCMS法近年来，质谱仪的出现为检测果蔬中的赤霉素创造了条件。采用GC和GCMS等仪器进行分析检测，灵敏度高，重复性好，尤其适
28、用于痕量植物样品的测定。气相色谱常被用于检测植物果蔬中的各种农药残留，特别适用于挥发性的物质的检测。付磊29研究草莓中外源植物激素GA3时采用气相色谱进行检测分析，建立了一种采用530M大口径毛细管色谱柱、不经衍生化处理而直接测定植物生长素GA3的气相色谱方法。许庆琴等30对不同固定相的大口径毛细管柱进行了考察，发现赤霉素在非极性固定相毛细管柱中不仅灵敏度高、出峰速度快，而且重现性好。采用太口径毛细管色谱柱，无需衍生化处理，直接进样测定样品中赤霉素含量结果令人满意。为了更加准确地对赤霉素进行定性分析，很多研究中往往采用灵敏度高、检测限较低的质谱仪，特别能适用于在植物中含量本身就比较微量的赤霉素
29、。黄红林等31采用固相萃取代替传统的液液萃取，研究了样品在C18萃取柱上的保留行为，纯化效果显著。采用HP1的色谱柱，无需柱前衍生化，直接进样GCMS测定，选择离子监测SIM克服了样品基体干扰，灵敏度较全谱扫描高。并建立了固相萃气相色谱质谱选择离子SPEGCMSIM直接分析果品中赤霉素GA3残留量的方法。马焕普32已将GCMS方法用于检测苹果种子层积过程中GA7的变化，并获得了相关的检测数据。GAS的结构具有较多的相似之处，用常规的理化分析方法很难将每一种GA进行有效的分离及定性分析，而质谱仪则可以通过对GAS的定性分析，找到特征GAS，继而进行更深入的研究工作。吴萍等33先借助生物试法对芥蓝
30、中的赤霉素进行必要的分离纯化，并采用质谱法进行检测，从而实现了对芥蓝种子中GAS的定性、定量分析。23LCMS法随着联用技术的日趋完善，HPLCMS逐渐成为最热门的分析手段之一。HPLCMS作为已经比较成熟的技术，目前己在生化分析、天然产物分析、药物和保健食品分析以及环境污染物分析等许多领域得到了广泛的应用。利用HPLCMS分析混合样品，和其他方法相比具有高效快速，灵敏度高，只需品进行简单预处理或衍生化，尤其适用于含量少、不易分离得到或在分离过程中易的组分。梁沛等34采用固相萃取技术对样品进行处理，以液相色谱串联质谱为检测手段，建立了测定水果中赤霉素GA3残留的新方法，可以为确定赤霉素残留标准
31、提供实验依据。刘艳琴等35也采用高效液相色谱一串联四极杆质谱联来测定水果和蔬菜中赤霉素，并建立了相关的检测方法。该法具有样品处理简单、测定周期短等优点，适用于大量样品的快速筛选、测定。王骏等36建立用HPLCMS测定猕猴桃中赤霉素和脱落酸残留量的方法。盛杰厚等37则是采用固相萃取和液质联用仪，同时检测小麦种的赤霉素、吲哚乙酸和脱落酸，并获得了较高的回收率。3总结与展望我国是果蔬生产和出口大国，然而由于发达国家的技术壁垒38，我国的果蔬出口量并没有因进入WTO而大幅度的提高。所以，建立和完善果蔬中的农药残留及各种限量物质的检测方法越来越重要。目前，高效液相和气相色谱法在果蔬赤霉素检测上的应用及研
32、究越来越广泛。由于质谱仪的检测较灵敏、检测限低，开始对联用技术有了初步的探索。随着科技的不断发展进步，联用检测技术将会成为未来研究的重点。参考文献1中国农科院植保研究所,等农药分析M化学工业出版社,北京,19982李金,石晶,赵晓亮等分析化学,1994,2288018043丁静,沈镇德,方亦雄,等植物内源激素的提取分离和生物鉴定J植物生理学通讯,1979,52284罗正荣,吴谋成,章文才植物组织中赤霉酸含量的高效液相色谱测定J植物生理学通讯,1990,26250525上海市“920”协作组“九二”的应用和土法生产M上海上海人民出版社,19736印天寿,陈世勇,于群英,等赤霉素的快速分光光度测定
33、法的研究J分析化学,1990,18109669697中国科学院植物研究所、遗传研究所“920”编写小组“920”农药技术资料汇编第L集北京科学出版社19708陈玉銮,王占文,孙思祥赤霉素的磷钼杂多酸光度测定法研究J南京化工学院学报,1993,15151549白玉明,赵良启赤霉素荧光比色测定方法的研究J山西大学学报自然科学版,1990,13443043310薛泉宏,李东,汤莉赤霉素荧光测定法改进研究J西北农业大学学报,2000,284343911SHENGJIEHOU,JIANGZHU,MINGYUDINGA,ETALSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFGIBBERELLICA
34、CID,INDOLE3ACETICACIDANDABSCISICACIDINWHEATEXTRACTSBYSOLIDPHASEEXTRACTIONANDLIQUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYTANDEMMASSSPECTROMETRYJTALANTA,20087679880212王勇,程金芬高效液相色谱法检测赤霉素A3组份J中国抗生素杂志,1990,4353713陈小鹏,王秀峰,孙小镭,等高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素和脱落酸含量J山东农业科学,20051656714唐根源,吴红京高效液相色谱法测定小麦幼苗中植物生长调节剂J分析试验室,1997,165666915朱
35、智甲,郝振芳,张晓惠,等高效液相色谱紫外检测法测定小麦幼苗中的内源激素J光谱实验室,1999,16328128316湛社霞,孙世宏,臧李纳,等高效液相色谱法测定水果中的赤霉素、苯甲酸、糖精钠和胭脂红J中国卫生检验杂志,2008,1871330133217陈波浪,郑春霞,盛建东,等HPLC分离和测定棉花中3种植物激素J新疆农业大学学报,2006,291283018XIEJUN,ZHANGYIZHENGDETERMINATIONOFPLANTINTRINSICHORMONESBYREVERSEDPHASEHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYJJOURNALOFIN
36、STRUMENTA1ANALYSIS2001,1606219WANGRUOZHONG,XIAOLANGTAO,LANWANHUANG,ETA1HIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHICDETERMINATIONOFINTERNALHORMONESININTERSUBSPECIFICHYBRIDRICEJCHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHY2002,214815720张有林,党娅,张静,等高效液相色谱法同时测定银凤桃中的赤霉素和脱落酸J西北植物学报,2005,2571467147121GROLAMYSCASTILLO,SERVANDOMART
37、INEZREVERSEDPHASEC18HIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYOFGIBBERELLINSGA3ANDGA1JJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,1997,782113713922葛雅琨,张元新,胡睿,等蔬菜中赤霉素残留量的高效液相色谱检测方法研究J吉林化工学院学报,2005,222131623张政,张强,王转花高效液相色谱法测定赤霉素A3的含量J色谱,1993,11425425524顾觉奋,王义明,刘文华赤霉素A3的反相高压液相色谱分析J中国抗生素杂志,1991,16537037525张玉宗,陈振玲,吕杏者,等高效液相色谱法测定谷
38、子幼苗中的GA1和GA3J色谱,1999,17546947226乔坤云,张敏高压液相色谱测定新疆库尔勒香梨中赤霉素GA3方法研究J特产研究,20024252627朱曙东,赵琛,赵文君,等反相高效液相色谱分析赤霉素GA3含量J药学学报,1993,281078879128黄红林,刘实,张桃芝固相萃取高效液相色谱测定番茄中的赤霉素GA3残留J分析科学学报,2005,251757729付磊,陶燕飞气相色谱法测定草莓中的赤霉素J武汉科技大学学报自然科学版,2002,25435936030许庆琴,范哲锋,杜黎明大口径毛细管气相色谱法快速测定植物组织中的赤霉素J分析科学学报,2000,16652431黄红林
39、,张桃芝,刘实,等SPEGCMS选择离子法直接测定果品中赤霉素残留量J理化检验化学分册,2006,319419632马焕普用GCMS检测苹果种子层积过程中内源MEJA,GA3,GA4和GA7的变化J植物生理学报,1996,221818833吴萍,刘玲芥蓝未熟种子赤霉素的GC/MS定性分析J质谱学报,1997,182677634梁沛,张桃芝,黄红林固相萃取液相色谱串联质谱法测定水果中的赤霉素GA3残留J第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集,200611686935刘艳琴,王浩,杨红梅,等高效液相色谱一串联四极杆质谱联用测定水果和蔬菜中赤霉素残留量J现代农业科技,20091633033136王骏,
40、张卉,胡梅,等液相色谱一质谱测定猕猴桃中赤霉素和脱落酸的含量J食品工业,20084747637SHENGJIEHOU,JIANGZHU,MINGYUDINGA,ETALSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFGIBBERELLICACID,INDOLE3ACETICACIDANDABSCISICACIDINWHEATEXTRACTSBYSOLIDPHASEEXTRACTIONANDLIQUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYTANDEMMASSSPECTROMETRYJTALANTA,20087679880238何解定中国突破农产品出口技术壁垒的对策研究J社会
41、纵横,2009,24142829本科毕业设计（20_届）橘子及其加工制品中的赤霉素检测目录1引言211橘子及其加工制品的进出口现状212赤霉素的作用213赤霉素的检测现状3131高效液相色谱法3132液相色谱串联质谱法3133气相色谱法和GCMS法314研究的目的与意义42实验材料与方法421仪器与设备522试剂和材料523实验步骤5231提取5232净化6233检测624色谱条件6241液相色谱参考条件6242质谱参考条件625结果计算7251计算赤霉素的回收率7252计算橘子样品中赤霉素的残留量73结果与讨论831前处理方法的优化8311提取液的确定8312提取过程的条件优化8313固相萃
42、取柱的选择832色谱条件的优化10321流动相的选择10322进样量的大小的确立1133检测仪器的改进11331高效液相色谱法11332液相色谱串联质谱法12333超级液相色谱串联质谱法1234标准曲线的绘制及最低检测限1335回收率及变异系数的测定1436橘子样品的检测154结论15致谢错误未定义书签。参考文献16摘要本论文提出了在橘子及其加工制品中检测赤霉素残留的高效液相色谱串联质谱方法。橘子样品采用90的丙酮溶液提取，经MAX柱净化，最后用甲醇定容检测。色谱柱为ATLANTISC18柱3M,21MM150MM；流动相为甲醇水及001MM的磷酸缓冲液；赤霉素质谱测定的定量离子对为34502
43、390，主要定性离子对分别为34501431、34502211以及3450831。赤霉素浓度在001G/ML01G/ML范围内，药物峰面积与浓度呈良好的线性关系，其相关系数为09991。该方法具有较好的回收率及稳定性，赤霉素的最低检测限为001G/ML定量下限可达2G/KG，低于美国、日本等国家和地区对赤霉素在水果蔬菜中的最高残留02PPM的规定。关键词橘子及其加工制品；赤霉素；液相色谱串联质谱；检测ABSTRACTAMETHODOFLCMSMSFORTHEDETECTIONOFGIBBERELLINRESIDUEINMANDARINORANGEANDITSPROCESSINGPRODUCES
44、HASBEENDEVELOPEDSAMPLESWEREEXTRACTEDWITH90ACETONEWATERSOLUTIONBEFOREBEINGPURIFIEDBYMAXSOLIDPHASEATLAST,USINGMETHANOLTOMAKETHEVOLUMECONSTANTTHESOLUTIONWASSEPARATEDONAC18REVERSEDPHASECOLUMN3M,21MM150MM,USINGMETHANOLWATERCONTAINING001MMPHOSPHATEASTHEMOBILEPHASEQUALITATIVEIONOFSRMWAS34502390FORGA3,ANDIT
45、SMAINQUALITATIVEIONSWERE34501431,34502211AND3450831GOODLINEARITIESWEREFOUNDWITHINTHERANGESOF00101G/MLFORGA3,ITSRELATIVECORRELATIONCOEFFICIENTWAS09991THERESULTWITHGOODRECOVERYANDSTABILITYSHOWEDTHATTHISMETHODWASVERYSUITABLETHELIMITOFDETECTIONWAS001G/MLANDTHELOWERLIMITOFQUANTIFICATIONWAS2G/KGITHASBEENU
46、NDER02PPMWHATISDEMANDEDTOFRUITSANDVEGETABLESFORGA3INTHELAWOFCOUNTRIESLIKEUSAANDJAPANANDOTHERREGIONSKEYWORDSMANDARINORANGEANDITSPROCESSINGPRODUCESGIBBERELLINLCMSMSDETECTION1引言11橘子及其加工制品的进出口现状橘子含水量高、营养丰富，含大量维生素C、枸橼酸及葡萄糖等十余种营养物质。食用得当，能补益肌体，特别对患有慢性肝炎和高血压患者，多吃蜜橘可以提高肝脏解毒作用，加速胆固醇转化，防止动脉硬化。橘子及橘子罐头是中国的大宗出口产品
47、，已成为部分地区主要的经济来源。十年前，凭借着原料价格和人力资源的相对优势，中国橘子罐头就迅速占领了日本市场和欧美市场，成了进口商的抢手货，成交额约占世界贸易量的80以上。2002年中国橘子罐头的出口约占世界贸易量的三分之一。中国罐头行业的出口强势引起了西班牙的不满，以往该国产品也主要销往欧美市场，是与中国竞争市场份额的惟一对手。西班牙不甘心自己的失利，向欧盟委员会提出申请，希望对原产于中国的橘子罐头采取保障措施1，欧盟将研究上调该产品的关税或采取限额进口的做法。浙江省是橘子罐头生产大省，占全国产量的80，全世界产量的70，对欧盟的出口量也在全国各省份中居于首位。据宁波检验检疫局统计，2007
48、年，宁波地区共出口桔子罐头9238968吨，金额730620万美元，比上年分别增长072和372，约为全国出口桔子罐头总量的三分之一，成为全国出口桔子罐头最多的城市。据象山检验检疫局统计，2010年前10个月，象山地区共出口橘子罐头1026批、2943374吨、货值32815万美元，同比分别增长162、197和14。12赤霉素的作用赤霉素是一种广谱性植物生长调节剂，几乎在植物生长、发育的各个阶段都起着调节作用。赤霉素在植物体内的形成部位一般是嫩叶、芽、幼根以及未成熟的种子等幼嫩组织。1926年日本病理学家黑泽在水稻恶苗病的研究中发现水稻植株发生徒长是由赤霉菌的分泌物所引起的。1935年日本薮田
49、从水稻赤霉菌中分离出一种活性制品，并得到结晶，定名为赤霉素（GA）。第一种被分离鉴定的赤霉素称为赤霉酸（GA3），化学式见下图1。目前，已从高等植物和微生物中分离出70余种赤霉素。图1赤霉素化学结构式赤霉素中生理活性最强、研究最多的是GA3。它能显著地促进植物茎、叶生长，特别是对遗传型和生理型的矮生植物有明显的促进作用；能代替某些种子萌发所需要的光照和低温条件，从而促进发芽；可使长日照植物在短日照条件下开花，缩短生活周期；能诱导开花，增加瓜类的雄花数，诱导单性结实，提高坐果率，促进果实生长，延缓果实衰老。除此之外，GA3还可用于防止果皮腐烂；在棉花盛花期喷洒能减少蕾铃脱落；马铃薯浸种可打破休眠；大麦浸种可提高麦芽糖产量等等。13赤霉素的检测现状131高效液相色谱法高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法。在70年代末，高效液相色谱开始逐步用于检测除乙烯以外的植物激素。国外研究者那时也开始研究用高效液相色谱仪来分离检测赤霉素GA3组份的含量了。REEVE等人在把赤霉素各组份的羧基酯化后，再用高效液相色仪来分离其酯化衍生物。LINJT等则是用反相高效液相色谱技术来直接分离赤霉素各组份。实验证明2高效液相色谱对赤霉素的定性、定量测量是准确可靠的。目前，高效液相色谱除了可以有效地分离植物内的各个赤霉素同系物，同
