1、本科毕业论文系列开题报告生物工程鱿鱼肝的水解工艺一、选题的背景与意义我国是一个海洋大国，随着对海洋生物研究的深入和研究开发技术的提高，从海洋生物中寻找新的活性物质已成为海洋药物和食品功能因子研究的重要目标之一。在这一方面，我国的研究起步较晚，目前仍处于初级阶段，经过研究的海洋生物只占很小一部分。更为重要的是，我国是一个水产品加工大国，因此水产品副产物的利用问题非常重要，如何合理开发利用这些宝贵资源，应该引起各方面的高度重视。水产品副产物的综合利用好坏将直接影响水产业、食品工业等相关产业的健康发展。鱿鱼是软体动物门（MOLLUSCA）、头足纲（CEPHALOPODA）、鞘亚纲（COLEOIDEA
2、）、十腕总目（DECAPODIFORMES）、枪形目（TEUTHIDA）、柔鱼科（OMMASTREPHIDAE）和枪形目、闭眼亚目MYOPSIDA、枪乌贼科（LOLIGINIDAE）动物的俗称，亦称柔鱼。鱿鱼的营养丰富，高蛋白、低脂肪，是良好的水产品加工原料。近年来，我国鱿鱼的捕捞总量逐年提升，进口量也逐年扩大。浙江是鱿鱼加工大省，仅浙江兴业集团有限公司2007年的鱿鱼加工量就将近20万吨，而目前我国鱿鱼生产加工产业的产品层次比较低，主要从事简单的来料加工，如鱿鱼丝、鱿鱼片、鱿鱼段等，从而产生了大量的鱿鱼内脏废弃物。但它们的高值化应用却未得到应有的重视，鱿鱼内脏多经初加工制成鱿溶浆、鱿鱼内脏粉
3、等作为鱼类和虾饲料，部分当作废弃物直接丢弃或掩埋，并未得到充分利用。鱿鱼肝脏作为废弃物占鱿鱼湿重的15左右，其含有丰富的蛋白质和多种无机元素。蛋白质可被酶切成能被动物直接吸收利用的肽和氨基酸。这样既开拓了新的蛋白质资源，又解决了环境问题。因此本课题选取鱿鱼加工废弃物中较有价值的内脏进行水解工艺的研究优化，为进一步提高其附加值及相关产品的开发提供理论基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）基本内容对鱿鱼肝脏进行营养成分分析，并选取合适的酶对其进行水解实验。在温度、时间、料液比等单因素实验的基础上，利用响应面技术对水解工艺进一步优化，以获得最佳水解条件，然后进行水解液中氨基酸的测定。（二）
4、拟解决的主要问题1鱿鱼肝脏的基本营养成分2水解条件的优化3水解液中主要氨基酸的含量三、研究的方法与技术路线（一）研究的方法1基本营养成分分析1粗蛋白质凯氏定氮法2粗脂肪含量测定索氏提取法3水分含量测定105恒温干燥法4灰分灼烧法2水解条件优化响应面法3水解液中氨基酸的测定高效液相色谱法（二）技术路线鱿鱼肝脏营养成分分析粗蛋白质粗脂肪水分灰分水解条件优化单因素实验加酶量温度最佳水解条件水解液中氨基酸测合适酶的筛选四、研究的总体安排与进度2010年10月11月查阅文献，收集相关资料。2010年11月12月设计实验的宏观技术路线，制定大体实验步骤。2010年12月2011年1月鱿鱼肝脏样品处理及基本
5、营养成分测定。2011年2月3月水解条件的优化及水解液氨基酸的测定。2011年3月4月整理数据，总结实验，论文写作。五、主要参考文献1董正之世界大洋经济头足类生物学M济南山东科学技术出版社,1991821952宋庆武,丁立孝,黄贤刚利用下脚料加工鱿鱼肠J食品研究与开发,200930272743马永钧,秦乾安,陈小娥等鱿鱼加工副产物综合利用研究进展J渔业现代化,2008,3544张林楠鱿鱼的营养与加工J中国水产,1999844455刘栋辉,冯健,刘永坚等富肽素、鱿鱼内脏粉、墨鱼浸膏、鱼露对南美白对虾的诱食效果比较研究J渔业现代化,2003539406吴莉敏鱿鱼内脏的营养及其开发利用J农产品加工学
6、刊,2007894967刘鑫,薛长湖,李兆杰等鱿鱼低温火腿肠的加工工艺J食品与发酵工业,2007,33165688郭无瑕,胡建恩,王秀武等鱿鱼肝脏鱼油的制备及其脂肪酸组成分析J大连水产学院学报,2007,2217780PH时间料液比响应面9王庆梅,张方鱿鱼油的脂肪酸组成分析J大连医学院学报,1993,15318919010JULIOHUMBERTOCORDOVAMURUETA,FERNANDOLUISGARCIACARRENO,NUTRITIVEVALUEOFSQUIDANDHYDROLYZEDPROTEINSUPPLEMENTINSHRIMPFEEDJAQUACULTURE,2002,210
7、37138411章建设,雷晓凌鱿鱼内脏糖蛋白提取工艺及其免疫活性初步研究J现代食品科技,2008,24216716912袁亚辉,姚美君利用鱿鱼内脏生产海味素的研究J渔业现代化,20021272813邵伟,王栋,陈菽等淡水鱼下脚料速酿鱼露及脱腥技术初探J食品研究与开发,2006,271114214414SEKWONKIMBIOACTIVECOMPOUNDSFROMMARINEPROCESSINGBYPRODUCTSAREVIEWJFOODRESEARCHINTERNATIONAL,2006,3938439315FEREIDOONSHAHIDIENZYMESFROMFISHANDAQUATICIN
8、VERTEBRATESANDTHEIRAPPLICATIONINTHEFOODINDUSTRYJFOODSCIENCELIVERHYDROLYSISAMINOACIDSTOXICOLOGICALSTUDIES引言鱿鱼是软体动物门（MOLLUSCA）、头足纲（CEPHALOPODA）、鞘亚纲（COLEOIDEA、十腕总目DECAPODIFORMES、枪形目TEUTHIDA、柔鱼科（OMMASTREPHIDAE）和枪形目、闭眼亚目MYOPSIDA、枪乌贼科（LOLIGINIDAE）动物的俗称1，亦称柔鱼。鱿鱼体扁长，头腕似佛手状，肉鳍紧附在尾部两侧，形似双髻，全身均为浅粉色，表面有白霜。主要产于我
9、国广东、福建、浙江，产期为78月，日本、越南、朝鲜也产。鱿鱼是名贵的海产品，富含蛋白质、钙、磷、铁等，并含有十分丰富的诸如硒、碘、锰、铜等微量元素的食物，对骨骼发育和造血十分有益，可预防贫血。鱿鱼除了富含蛋白质及人体所需的氨基酸外，还是含有大量牛磺酸的一种低热量食品2。因此鱿鱼是一种优质的水产品加工原材料。近10年来，随着我国北太平洋的鱿钓业规模不断形成扩大，鱿鱼的捕捞总量逐年提升，进口量也逐年扩大。浙江是鱿鱼加工大省，仅浙江兴业集团有限公司2007年的鱿鱼加工量就将近20万吨3。然而，我国鱿鱼目前的生产工业产品层次比较低，主要从事简单的来料加工，如鱿鱼丝、鱿鱼片、鱿鱼段等。原料并未得到充分利
10、用，附加值低，尤其是加工下脚料，多为内脏、皮、鱿鱼嘴等，其占鱿鱼总量的1520，大都加工成鱼粉，部分甚至直接丢弃或掩埋，造成资源浪费和环境污染。因此，有必要对鱿鱼下脚料进行新一轮的研究，以提高其附加值，国内外有不少科研院校和企业单位正在研究和开发鱿鱼加工下脚料中的功能活性物质，一些新颖的水产加工废弃物的资源再利用技术正在得到有效开发。鱿鱼内脏占鱿鱼湿重的15左右，其中大部分为肝脏，因其含有可以促进鱼虾摄饵的氨基酸，所以一般加工成鱼虾饲料45，而并没有充分利用。鱿鱼肝脏含有2030的粗脂肪，郭无瑕等6系统的地研究了从鱿鱼肝脏中提取油脂与精炼鱼油的方法，并证实精炼后的鱿鱼油澄清透明，略显淡黄色，并
11、有淡淡的鱼腥味，其各项指标均符合SC/T35022000鱼油一级标准。在此基础上，其用气相色谱/质谱法分析了鱿鱼油中脂肪酸的成分。结果表明，精炼鱿鱼油中多不饱和脂肪酸PUFA的含量较高365，其中C205EPA和C226DHA的含量分别为131和203。这与王庆梅等7利用气相色谱法分析鱿鱼中脂肪酸的成分得到的结论基本一致。可见，鱿鱼肝脏是提取EPA和DHA的良好原料。且鱿鱼肝脏油由于其不饱和脂肪酸含量高，而在10左右的室温下不凝结，在医药和饲料工业中有较广泛的利用前景8。将鱿鱼肝脏中的大部分粗脂肪提取后的剩余部分，大约占鱿鱼肝脏湿重的5565，如果将其丢弃，则会产生大量的二次废弃物，而没有实现
12、对鱿鱼内脏的充分利用。剩余的鱿鱼肝脏其基本营养成分是以蛋白质为主，如可选取合适的酶将其水解，并对水解的条件优化，对水解液进一步分析利用，则会是一种方便、快捷且较实用的再利用方式。本文对鱿鱼肝脏进行营养成分的分析，并选取合适的酶对其进行水解实验。在温度、时间、料液比等单因素实验的基础上，利用响应面技术对水解工艺进一步优化。因为肝脏在动物体内起到排毒、解毒的作用，因此对其水解液内的营养物质的组成及食用安全性进行了探讨，为进一步对其进行高值化利用提供了理论依据。1材料与方法11材料ICR小鼠，体重（202）G，购于浙江省动物实验中心。中性蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶购于广西南
13、宁庞博酶制剂有限公司，其它试剂均为分析纯，购于宁波奥博仪器科技有限公司。低速大容量离心机（LXJIIB，上海安亭科学仪器厂），可见分光光度计（T6新悦，北京普析通用仪器有限责任公司），电子天平（EL204METTLERTOLEDO，梅特勒托利多仪器上海有限公司），电热恒温水浴锅（DKS26，宁波江南仪器厂），高效液相色谱仪（AGILENT1200，美国AGILENT公司产品），MARS微波消解仪（MARS5，美国CEM公司产品），全谱直读等离子体发射光谱仪（ICPAES）（IRISINTREPIDXSP，美国THERMOELEMENTAL公司）。12方法121样品处理将提取出大量鱿鱼油的鱿鱼肝
14、脏用组织捣碎机粉碎均匀，待用。122营养成分分析粗蛋白质凯氏定氮法；粗脂肪含量测定索氏提取法；水分含量测定105恒温干燥法；灰分灼烧法9。123无机元素含量测定消解精确称取1G样品于四氟乙烯消解罐中，加入10ML浓HNO3进行消解。消解程序为在150，600W功率下，消解10MIN，爬升时间为15MIN。标注溶液配置取8种单元素标准溶液，用硝酸（13）稀释成多元素混合标准贮备溶液后，再用硝酸（119）配制成三个浓度梯度的混合标准工作溶液。为避免元素间的化学干扰和光谱干扰，将8种无机元素分为两组，各种浓度值见表1。表1混合标准系列TAB1MIXREFERENCEMATERIAL混合标准系列元素浓
15、度/GML1123混合标准系列1CAFEKMGZN0000010110115010501010混合标准系列2ALNACU0001101105010124水解条件优化1241酶的选取称取一定量的样品，在料液比为15，加酶量均在3，及各种酶的最适温度及最适PH的条件下水解360MIN。水解结束后85灭酶15MIN，4000R/MIN离心5MIN后取上清，取1ML上清液定容到25ML的容量瓶中，摇匀后测定其水解度。水解度计算DH（）已水解的氨基酸态氮数/原料中总氮数100B/A100式中A为原料中总氮量（MG/100G），B为水解后氨基氮量（MG/100G）。水解后氨基氮量采用甲醛值法，原料中总氮量
16、采用凯氏定氮法测定9。1242酶的单因素试验选定合适的酶后，选取温度、时间、PH、加酶量和料液比做单因素实验。1243响应面设计在单因素实验基础上，选取温度、时间和料液比为三个主要因素的，根据BOXBENHNKEN中心组合试验设计原理，水解度为响应值，进行三因素三水平响应面分析，依据回归分析确定各工艺条件的主要影响因素，以水解度为响应值做响应面和等值线图1011。1244水解液中氨基酸的测定样品用OPAFMOC法进行衍生化，检测条件HYPERSILAAODS21200MM5M氨基酸柱，进样量2L，流速为045ML/MIN，柱温40，后运行时间为2MIN；流动相A为20MMOL/L醋酸钠溶液，P
17、H720005，流动相B为醋酸钠，乙腈，甲醇混合液，体积比为100MMOL/L醋酸钠溶液乙腈甲醇204040，PH720005；FLD检测器激发波长340NM，发射波长450NM，VWD检测器波长为338NM，运行在线衍生自动进样程序和梯度洗脱。125急性毒理实验1251剂量确定为探讨水解液的急性毒性，首先进行了小鼠最大耐受量预实验，取ICR小鼠20只，体重20G2G，雌雄各半，随机分为2组即空白组及LD50组，空白组每天灌胃蒸馏水一次，每次按体重01ML/10G；LD50组小鼠每天灌胃一次水解液原液，每次按体重01ML/10G。两组小数在灌胃前均禁食不禁水12H，灌胃后两小时内，观察各组小鼠
18、状态变化，并做记录。实验进行7D。1252毒理实验预实验如未测出LD50的情况下，进行本实验。取ICR小鼠20只。体重20G2G，雌雄各半，随机分为两组，即空白组、毒理组。因预实验未能测定出LD50，因此加大毒理组每天的灌胃剂量及灌胃次数。空白组每天两次灌胃蒸馏水，每次按体重04ML/10G；毒理组小鼠每天灌胃两次次水解液原液，每次按体重04ML/10G。两组小鼠在灌胃前均禁食不禁水12H，两次灌胃时间间隔5H，实验进行14D1214。1253指标测定各组小鼠实验期间同室分笼饲养，保持卫生清洁，光照充足，自由采食饮水，室温控制在25，湿度60，昼夜交替。两次实验均在灌胃后2H内观察状态，并随时
19、记录，每天称量体重。如小鼠在实验期间死亡，需立即对尸体进行解剖，确定其死因。实验结束后，禁食不禁水12H，将小鼠脱臼处死，摘取主要脏器，观察脏器变化。2实验结果21基本营养成分鱿鱼肝脏的基本营养成分中粗蛋白、粗脂肪、灰分和水分含量分别为2062、1699、137和4764。其中粗脂肪含量最高。详情见表2。表2鱿鱼肝脏基本营养成分TAB2NUTRIENTCONTENTOFSQUIDLIVER样品总蛋白（）粗脂肪（）灰分（）水分（）鱿鱼肝脏20621699137476422无机元素含量鱿鱼肝脏中，无机元素的含量如表3所示。表3鱿鱼肝脏无机元素含量TAB3CONTENTOFINORGANICELEM
20、ENTSOFSQUIDLIVER元素消解液中含量（G/ML）样品中（MG/KG）元素消解液中含量（G/ML）样品中含量（MG/KG）K53042652AL057285CA378189ZN4532265NA67283364FE2091045MG5432715CU325162523不同酶的水解度由图1可知，在所选取的6种酶（中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶）各自最合适的水解条件下1516，复合蛋白酶的水解度最高，达到6075，因此选取复合蛋白酶继续进行稍后的水解单因素实验。464850525456586062中性蛋白酶木瓜蛋白酶复合蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶风味蛋
21、白酶酶解率（）图1不同种酶的水解度FIG1DEGREEOFHYDROLYSISOFDIFFERENTENZYMES24酶浓度在料液比为15，温度50，PH70，时间为180MIN的条件下，通过改变酶的不同浓度，测定其对水解度的影响，结果如图2所示，随着加酶量的不断添加，水解度不断增加，当达到5时达到最大的水解度5466，稍后随着加酶量的增加，水解度并没有变大的趋势，这主要因为底物的量不增加，而仅仅随着加酶量的增加，导致酶不能与底物结合，从而导致水解度不增加，不能起到继续催化的作用，因此选取加酶量为5为最适加酶量。50505515155252553535545455555501234567酶量（
22、）酶解度（）图2酶量对水解度的影响FIG2EFFECTOFENZYMECONCENTRATIONSONDEGREEOFHYDROLYSIS25料液比在温度50，PH70，加酶量为5，时间为180MIN的条件下，通过改变料液比来观察此种因素对水解度的影响，结果如图3所示，在最初随着料液比的不断加大的过程中，水解度也是在不断加大，但是趋势不是很明显，在15时，达到最大的水解度5562。加大料液比是为了是酶可以更好的接触底物，从而是酶促反应更加安全，但是随着料液比超过最佳值，酶与底物浓度的接触也超过最优化，从而使水解度不能不断增大，因此选择15的料液比为最佳条件。404244464850525456
23、582345678料液比酶解率图3料液比对水解度的影响FIG3EFFECTOFRATIOOFMATERIALTOWATERONDEGREEOFHYDROLYSIS26时间由图4可知，在料液比15，酶浓度5，PH70，温度50的条件下，分别水解40MIN、60MIN、80MIN、100MIN、120MIN、140MIN，测定水解度。其结果如图9所示，在60MIN时水解度达到5754，随着水解时间的增长，水解度并没有显著的增加。可能是时间的增加使酶失去活性或水解已达到最大值，从而导致水解度一直保持在相同的水平上。所以本实验选择60MIN为最佳水解时间。50515253545556575802040
24、6080100120140160时间（MIN）酶解率（）图4时间对水解度的影响FIG9EFFECTOFTIMEONDEGREEOFHYDROLYSIS27温度在料液比15，酶浓度5，PH70，水解时间为60MIN的条件下，分别在45、50、55、60、65、70、75下水解，测定不同温度点的水解度，其结果如图5所示，随着温度的升高，酶在前期仍可以保持较好的活性，酶促反应随着温度的升高而加快，当温度达到65时，得出的最高水解度最高为6248，随后随着温度的升高，水解度反而下降，可能是随着温度的升高，已经使酶失去了活性，酶促反应开始减弱的结果，因此水解度下降。4045505560654045505
25、56065707580温度（）酶解率（）图5温度对水解度的影响FIG5EFFECTOFTEMPERATUREONDEGREEOFHYDROLYSIS28PH在料液比15，酶浓度5，温度65，水解时间60MIN的条件下，变化不同的PH值，观察其对水解度的影响，结果如图6所示，随着PH值的不断加大，水解度也不断加大，当PH达到75时，达到最大的的水解度6895，当PH继续增大时，水解度呈现下降的趋势。因为酶自身有其最适的水解PH值，但当底物变化时，不同的底物会对环境PH有所影响，从而导致酶对最适酶促反应的PH有所变化。因此本实验选取的最适PH值为75。66665676756868569695665
26、7758859PH酶解率（）图6PH对水解度的影响FIG6EFFECTOFPHONDEGREEOFHYDROLYSIS29响应面设计由单因素实验我们可以看出，影响鱿鱼肝脏水解度的因素有很多，其中温度、时间和料液比是三个主要因素。温度对水解度的影响在10以上，时间对水解度的影响在7左右，料液比对水解度的影响在9左右，而其它因素对水解度的影响相对这三个因素较小。因此据BOXBENHNKEN中心组合试验设计原理，综合单因素试验所得结果，选取温度、时间、液料比三个因素，采用三因素三水平的响应面分析方法17，因素水平设计表见表4。表4响应面分析因素与水平TAB4FACTORSANDLEVELSOFTES
27、T因素水平101A料液比B时间（MIN）C温度（）14806015100651612070对鱿鱼肝脏水解条件进行响应面分析，其实验设计方案见表5。表5响应面分析及结果TAB5DESIGNSCHEMEANDRESULTSOFTEST实验号ABC水解度（）111054882110550331105514411057065101545861015450710153198101560490115495100115436110115474120115702130005738140005641150005644各因素经回归拟合后，解得回归方程为Y567406A05B033C044AB073AC072BC0
28、95A2026B2121C2，式中Y为水解度。从表6中我们可以得出，PROBF值为00187，小于005，表明该模型显著，说明此实验方法可靠，使用该方程模拟真实的以温度、时间和料液比三因素三水平实验分析可行。从模型ABC的P值我们可以得出，对水解度影响最大的是料液比，其次是时间，最后是温度。从表6中我们也可以得出，这三个因素对水解度的影响不是简单的线性关系，而是存在交互作用。表6水解参数数学回归分析结果TAB6RESULTSOFREGRESSIONANALYSISOFTEST方差来源平方和自由度均方F值PROBF模型1896921176600187SIGNIFICANTA料液比29312931
29、06400224B时间19811987200437C温度084108430701401AB078107828501524AC21512157800383BC206120674800410A23351335121800175B2026102609303798C25431543197400067残差1385028失拟项077302608405834NOTSIGNIFICANT纯误差061203总离差20344从图7我们可知，当时间不变时，随着料液比的增加水解度升高，但随着料液比的不断增大，水解度稍有下降；当料液比不变时，随着时间的增加，水解度变大，但随着时间的再次增加，水解度稍有下降，结果与单因素
30、实验基本相似，当时间为100MIN左右，料液比为15时达到最大水解度，且两因素有交互关系。原因可能是随着料液比及时间的不断增加，酶与底物接触先达到最大值，但随着料液比的不断增加，酶与底物浓度不能充分接触，从而导致酶促反应降低，以至水解度的下降。图7时间和料液比对水解度的影响FIG7RESPONSESURFACEPLOTOFTIMEANDRATIOOFMATERIALTOWATERTIMEONDH由图8可知，当温度不变的情况下，随着料液比的增加，水解度也随着加大，但随着料液比的不断加大，水解度反而有所下降；当料液比不变时，随着温度的增高，水解度随着变大，但随着温度的不断增高，水解度反而下降。这与
31、所做的单因素实验相似，当温度65，料液比为15达到最大水解度，且两个因素有交互关系。原因可能是随着温度的不断增加，料液比的不断加大，酶易失去本身活性，且与底物浓度接触不够充分，从而使酶促反应先增强后减弱，出现本实验的结果。图8温度和料液比对水解度的影响FIG8RESPONSESURFACEPLOTOFTEMPERATUREANDRATIOOFMATERIALTOWATERTIMEONDH由图9我们可知，当温度不变时，随着时间的增加，水解度基本没有变化；随着温度的增加，水解度先增高，超过65时，水解度随着温度的升高而降低，这与单因素实验结果类似，当温度为65，时间为100MIN时达到最大水解度，
32、且两因素有交互作用。其原因可能是，酶促反应在合适的时间已经达到峰值，而时间的延长并没有使酶促反应加强，随着温度的身高，一部分酶相继失活，从而水解度开始下降。图9温度和时间对水解度的影响FIG9RESPONSESURFACEPLOTOFTEMPERATUREANDTIMEONDH210水解液中氨基酸含量水解中氨基酸含量丰富，具体见表7。其包含人体所必需的8种必需氨基酸。表7氨基酸含量（MG/L）TAB7COMPOSITIONOFAMINOACIDSMG/L氨基酸水解液氨基酸水解液ASP103807VAL32434GLU101485MET2237SER40959CYS69644GLY13809IL
33、E12455HIS100003LEU2229THR100469PHE76437ARG37845TRY50211ALA38919LYS2630PRO5294TEAA348746TYR3802TAA794669HYP0注必需氨基酸；TEAA总必须氨基酸量；TAA总氨基酸量NOTEESSENTIALAMINOACID；TEAATOTALESSENTIALAMINOACIDS；TAATOTALAMINOACIDS211急性毒理实验通过预实验，并每次给药后观察发现，在预实验期间，实验组的小鼠没有死亡，亦未出现任何中毒现象，说明在预实验的剂量下，水解液计量是安全计量，并未测出LD50，因此，在此剂量下加大
34、计量和灌胃次数进行急性毒理实验。急性毒理实验过程中，连续观察14D，小鼠未出现体征异常，并无一例死亡情况发生，亦未出现中毒现象。实验结束后脱臼处死，主要的脏器，心、肝、肾、肺、脾均无特殊改变及病变。表明由于水解液毒性低，安全性高。3讨论鱿鱼肝脏主要是作为提取鱿鱼油的物质，其相关研究18主要集中在其提取的油脂类的工艺改良及提取出的鱼油中相关营养物质的研究，而对其产生的剩余废弃物的相关报道较少，如果将剩余的鱿鱼肝脏丢弃则会产生二次废弃物，不仅污染环境，也未使鱿鱼肝脏得到充分的开发利用，而鱿鱼肝脏经实验证实大约占鱿鱼肝脏总重的5060。其成分中蛋白质占2062，而粗脂肪依然含有1699，说明在剩余部
35、分中还含有一定量的油脂类，可选用其它方法进一步提取。鱿鱼肝脏油的提取工艺需进一步改进。通过ICP方法测定了其中8种无机元素的含量，其中NA和K的含量最多。而在常规鱼油提取的过程中水解法常使用的NAOH和KOH，这样难免会使鱿鱼肝脏中NA和K的含量进一步升高，因此在实验中使用蒸煮法或其它提取方法，可以避免淡碱水解法加工过程中废弃夜及鱿鱼肝脏中盐类的升高。通过实验证明复合蛋白酶在其最适的水解条件下，水解鱿鱼肝脏的水解度最高。通过单因素实验确定了温度、时间、料液比、PH和加酶量的最佳水解条件，且其中时间、温度和料液是对水解度影响最大的三个因素，在此基础上依据BOXBENHNKEN中心组合试验设计原理
36、，进行了三因素三水平的实验，得出了相应的拟合方程，证明了模型的可行性及三个因素之间的相互交互作用，得到复合蛋白酶水解鱿鱼肝脏的最佳条件为在PH75，加酶量为5，料液比为1517，温度672条件下水解1048MIN。在优化条件下进行的验证实验表明，回归方程与验证实验的误差为187，在误差允许范围内，说明响应面法在酶解率的回归模型较可靠。动物的肝脏中血液含量丰富，且形态结构独特，使其的生理活动十分活跃，其不仅仅在糖类、蛋白质、脂肪、微生物代谢起关键作用，更是生物分泌、排泄和生物转化起重要作用，它也是重金属的解毒，排毒的重要器官19。急性毒理实验证明了鱿鱼肝脏水解液的食用安全性，其在预实验及急性毒理
37、实验中并没有导致小鼠有明显的中毒现象及任何小鼠的猝死。小鼠在灌胃实验过程中其状态、食物利用率和体重等指标均未见异常20。但水解液遗传毒性及长期食用是否对小鼠或人体有一定的影响需要进一步实验的证明21。利用高效液相色谱技术检测鱿鱼肝脏水解液中的氨基酸含量证明，水解液中含有人体所需的8种必需氨基酸，且含量都很高，其中苏氨酸含量最高为100469MG/L，苏氨酸具有抗疲劳，促进生长发育的功效，而苏氨酸在食品中主要作为饲料用氨基酸，它在饲料中主要是调节氨基酸平衡，促进生长，改善肉质及降低成本的作用。其次是苯丙氨酸，含量为76437MG/L，苯丙氨酸在食品中主要是添加在焙烤食品中，增加香味，补充人体的氨
38、基酸。这两种氨基酸分别是促进饮食和增加香味的，可以为进一步将水解液加工成诱食饲料等提供了理论依据。非必需氨基酸中，天冬氨酸的含量最高，为103807MG/L，天冬氨酸可改善心肌功能，亦可降低血液中氮和二氧化碳的含量，从而起到保护肝脏，增强肝脏功能，消除疲劳的效果。第二位的是谷氨酸，其含量为101485MG/L，谷氨酸具有较高的营养价值，可作为能源参与机体的代谢，用于医药可治疗肝昏迷，保护肝脏，在治疗肝脏疾病中起到辅助作用，起作为大脑皮质及神经中枢的补剂，对一些脑部损伤，脑震荡，癫痫及弱智儿童有一定的疗效。食品中，谷氨酸及其钠盐是味精的主要成分。组氨酸含量第三，为100003MG/L，其主要存在
39、于水果中，如香蕉、葡萄，及牛奶和某些肉制品中，在药理上组氨酸主要防止贫血症，并可以扩张血管，降低血压，在临床上治疗心脏疾病。4结论本章对鱿鱼肝脏首先进行营养成分的测定，结果显示，蛋白质含量达到20左右，并选取了不同的酶对其进行水解实验，在各自酶合适的条件下，证实了复合蛋白酶对其水解效果最好，并在此基础上应用单因素实验确定温度、时间等因素对水解度的影响，并选取了最佳的水解条件，再利用响应面技术优化了水解工艺，证实了三个主要因素在水解过程中的交互作用，最终确定了最佳水解条件。并以ICR小鼠为实验模型，进行急性毒理实验，证明了水解液的食用安全性，为进一步的长期安全性及遗传毒性实验做了前期准备。并利用
40、高效液相色谱技术分析了水解液中氨基酸的组成及含量。参考文献1董正之世界大洋经济头足类生物学M济南山东科学技术出版社,1991821952宋庆武,丁立孝,黄贤刚利用下脚料加工鱿鱼肠J食品研究与开发,200930272743马永钧,秦乾安,陈小娥,等鱿鱼加工副产物综合利用研究进展J渔业现代化,20083544张林楠鱿鱼的营养与加工J中国水产,1999844455刘栋辉,冯健,刘永坚,等富肽素、鱿鱼内脏粉、墨鱼浸膏、鱼露对南美白对虾的诱食效果比较研究J渔业现代化,2003539406郭无瑕,胡建恩,王秀武,等鱿鱼肝脏鱼油的制备及其脂肪酸组成分析J大连水产学院学报,2007,22177807王庆梅,张
41、方鱿鱼油的脂肪酸组成分析J大连医学院学报,1993,1531891908JULIOHUMBERTOCORDOVAMURUETA,FERNANDOLUISGARCIACARRENO,NUTRITIVEVALUEOFSQUIDANDHYDROLYZEDPROTEINSUPPLEMENTINSHRIMPFEEDJAQUACULTURE,20022103713849魏广东水产品质量安全手册M北京中国标准出版社,200511512110余杰,崔鹏举,卓健勇,等响应面分析方法在鸡腿菇多糖提取中的应用J食品科学,2009,308939611曹文红,章超桦,洪鹏志,等响应面法优化南美白对虾虾头自溶工艺的研究J
42、中国食品学报,20099115816312王珮珮,张玉,王凯当归多糖铁小鼠口服的急性毒性研究J中国医院药学杂质,200929427127213姜月霞,张俊清,刘明生青牛胆急性毒性实验性研究J海南医学院学报,2009,15430630814甘露双,孙磊,王多,等人参细粉与超微颗粒的急性毒性实验半数致死量（LD50）与最大耐受量（MTD）的测定J海南医学院学报,2009151202115ASPMOSJ,HORNSJ,VINCENTGHENZYMATICHYDROLYSISOFATLANTICCODGADUSMORHUALVISCERAJPROCESSBIOCHEMISTRY,20054019571
43、96616KECHAOUES,DUMAYJ,MORENOCD,ETALENZYMATICHYDROLYSISOFCUTTLEFISHSEPIAOFFICINALISANDSARDINESARDINAPILCHARDUSVISCERAUSINGCOMMERCIALPROTEASESEFFECTSONLIPIDDISTRIBUTIONANDAMINOACIDCOMPOSITIONJJOURNALOFBIOSCIENCEANDBIOENGINEERING,2009915816417王明艳,杨凡,李燕,等相应面法优化百步多糖提取条件研究J食品科学,2009306808318杨帆,王岚,周伯川,等鱿鱼油
44、的加工J粮油食品科技,199373212219卢然,倪嘉缵稀土对肝脏作用的机制J中国稀土学报,200220319319820SAYESCM,REEDKL,WARHEITDBASSESSINGTOXICITYOFFINEANDNANOPARTICLESCOMPARINGINVITROMEASUREMENTSTOINVIVOPULMONARYTOXICITYPROFILESJTOXICLOGICALSCIENCES,200797116318021MELOSLR,NIPPERMSEDIMENTTOXICITYTESTSUSINGTHEBURROWINGAMPHIPODTIBURONELLAVISCANAAMPHIPODAPLATYISCHNOPIDAEJECOTOXICOLENVIRONSAFETY,2007663412420
