1、本科毕业设计（20_届）费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究所在学院专业班级食品质量与安全学生姓名学号指导教师职称完成日期年月2目录1引言错误未定义书签。2材料与方法421材料与试剂4211原料5212试验菌种5213试剂2214主要仪器222实验方法6221实验路线6222测定方法32221费菜提取液中黄酮浓度测定32222菌种的预处理错误未定义书签。2223费菜提取液抑菌圈测定42224费菜提取液最低抑菌浓度（MIC）测定52225费菜提取液最低杀菌浓度（MB）测定52226费菜提取液还原力测定52227费菜提取液羟自由基清除率测定52228费菜提取液DPPH清除能力测定63结果与分析631费菜
2、提取液总黄酮含量632费菜提取液的抑菌效果733不同浓度的费菜提取液对细菌的抑制效果934不同浓度的费菜提取液的灭菌效果935费菜提取液的还原能力1036费菜提取液清除羟基自由基的能力1037费菜提取液清除DPPH的能力114小结1241费菜提取液的抑菌效果1242费菜提取液的抗氧化效果12致谢13参考文献错误未定义书签。附录15【摘要】费菜，俗称养心草、救心菜、三七等，属景天科多年生草本植物。费菜是一种集食用、药用和观赏为一体的经济农作物。本文通过测定抑菌圈、MIC、MBC等方法对费菜提取液进行抑菌效果研究，结果发现其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有明显的抑菌效果，而且抑菌效果随着
3、费菜提取液浓度的增加而加强；用还原力、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率测定抗氧化能力表明具有较强的抗氧化能力。通过此研究可以提高费菜有效成分的应用新价值，有助于生产天然保健品和出具有治疗和预防多种疾病的药品，为费菜的综合利用开辟新途径，创造更大的社会效益和经济效益。【关键词】费菜抑菌抗氧化【ABSTRACT】AIZOONSTONECROPHERB,COMMONLYKNOWNASYANGXINGRASS,SAVEHEARTGRASS,NOTOGINSENGETCITISBELONGTOSTONECROPHERBPERENNIALHERBACEOUSPLANTSAIZOONSTONECROPH
4、ERBISANECONOMICCROPSAGGREGATEEDIBLE、MEDICINALANDORNAMENTALFUNCTIONS,THISARTICLEUSESDETERMINATIONBACTERIOSTATICCIRCLE,MIC,MBCMETHODSTORESEARCHTHEBACTERIOSTATICEFFECTOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTFOUNDINGTHATITSHASOBVIOUSBACTERIOSTATICEFFECTTOESCHERICHIACOLI,STAPHYLOCOCCUSAUREUSANDBACILLUSSUBTILIS,ANDTH
5、ATTHEBACTERIOSTATICEFFECTASAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTCONCENTRATIONANDSTRENGTHENTHEINCREASEUSEINGREDUCTIONFORCE,HYDROXYLRADICALSCLEARANCEANDDPPHFREERADICALSCLEARANCETODETERMINATANTIOXIDANTCAPACITYINDICATESANDINDICATETHATITHASSTRONGANTIOXIDANTCAPACITYTHISRESEARCHCANIMPROVETHEAPPLICATIONOFNEWVALUEABOUT
6、AIZOONSTONECROPHERBSEFFECTIVEINGREDIENTS,WHICHHELPSTOPRODUCEHEALTHCAREPRODUCTSANDDRUGSWITHTREATMENTANDPREVENTVARIOUSDISEASES,OPENINGANEWAVENUEFORAIZOONSTONECROPHERBSCOMPREHENSIVEUTILIZATION,CREATINGGREATERSOCIALBENEFITSANDECONOMICBENEFITS【KEYWORD】AIZOONSTONECROPHERBBACTERIOSTATANTIOXIDATI41引言费菜，俗称养心
7、草、救心菜、三七、土三七等，属景天科多年生草本植物。株高2550厘米，丛生，分蘖力强。肉质根较肥大，叶匙形，对生，翠绿，肥厚多汁，叶缘锯齿状；花黄色，星芸状集生顶部，成片状分布，花期69月；果熟期810月，种子细小。费菜始载于救荒本草，具体很好的营养价值，据研究测定1，每L00G鲜食部位含蛋白质2LG、碳水化台物8G、脂肪07G粗纤维15G、胡萝卜素28MG、维生素B005MG、维生素B03LMG，维生素C95MG、烟酸09MG，钙315MG，磷39MG、铁32MG。除了营养方面的价值，费菜还有不菲的药用价值，它含有生物碱、谷甾醇、黄酮类、齐敦果酸、景天庚糖，果糖等药物成分。费菜中的生物碱具有
8、抗肿瘤活性，保护心血管系统，对神经系统具有镇痛和止痛作用，还具有抑菌效果2；谷甾醇能阻止人体对胆固醇的吸收，降血脂，防止血管硬化；黄酮类可扩张心脑血管，促进血液循环；齐墩果酸还可保护肝脏，起到延缓老年性肝组织纤维化的作用，经常服用能有益健康、延年益寿3。费菜几乎无病虫危害，栽培过程不施农药，无污染，无农药残留，是一种绿色食品，受到广大人们的喜爱。费菜主要食用嫩茎叶，无异味。采下洗净可直接素炒，配肉、蛋、食用菌炒，火锅、炖食、清蒸、浇汤，久煮不烂4。费菜药用功能主要有消肿、定痛、止血、化瘀、治吐血、衄血、便血、尿血、崩漏、乳痈、跌打损伤等，也是治疗心脏病的良药。费菜具有群体整齐，颜色鲜绿，覆盖率
9、高，花色鲜艳，花期较长的特点。费菜在栽培过程中不生虫、无病害，这是它的一大优点，能在贫瘠的土壤里长势强壮，所以无需喷洒农药，避免了化肥污染；加之其易种、易管、产量高，一般栽培条件下，每667M2产量可达5000KG以上，所以是园林花坛、草坪绿化难得的好品种，又是农业产业结构调整和发展无公害绿色蔬菜的理想品种之一。家庭栽培几盆费菜，既有药用价值，又能美化环境，净化空气，陶冶情操，增添乐趣5。费菜经萎凋脱水1520，摇青35分钟，渥堆6小时，220240OC杀青56分钟、揉捻、烘干可制得色香味俱佳的方便饮品养心茶6，泡出的茶水色、香、味俱佳，饮用后可高效抑制失眠、心悸、烦闷等症，加糖饮用13味更佳
10、；除降血压外，还可解除酒醉头痛。除主治心脑血管疾病外，而且对吐血、咯血、烦躁失眠、惊悸癔症、跌打损伤有疗效。目前已有很多研究，从不同植物中提取黄酮和生物碱开发不同的产品78。比如竹叶黄酮饮料、啤酒、保健胶囊、抗氧化剂、美容护肤品；银杏黄酮饮料、啤酒、保健胶囊、美容护肤品；大豆异黄酮胶囊；生物碱的镇咳止痛抗肿瘤等。费菜含有大量的黄酮类和生物碱，目前对费菜的研究基本还停留在其药用价值、培养和繁殖阶段，没有对费菜进一步的开发，今后费菜的研究方向可以转向费菜的生物活性成份。2材料与方法21材料与仪器211材料原料费菜，产于宁波慈溪。试验菌种大肠杆菌ESCHERICHIACOLI；金黄色葡萄球菌STAP
11、HYLOCOCCUSAUREUS；枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）5212试剂无水乙醇芦丁芸香叶苷）BR，含量95，国药集团化学试剂有限公司；亚硝酸钠分析纯，宜兴市第二化学试剂开发中心；硝酸铝分析纯，天津市永大化学试剂开发中心；氢氧化钠分析纯，杭州高晶精细化工有限公司；三氯乙酸分析纯，国药集团化学试剂有限公司；铁氰化钾分析纯，北京化工厂；三氯化铁分析纯，宜兴市第二化学试剂厂；磷酸二氢钠分析纯，汕头全砂化工厂；磷酸氢二钠分析纯，天津市巨星圣源化学试剂有限公司；硫酸亚铁分析纯，上海展云化工有限公司；抗坏血酸（VC）分析纯，杭州化学试剂有限公司；水杨酸分析纯，国药集团化学试剂有限公司
12、；冰醋酸分析纯，国药集团化学试剂有限公司；无水醋酸钠分析纯，上海试剂四厂；双氧水、盐酸、无水乙醇（均为国产分析纯）；蒸馏水。细菌用营养琼脂培养基BR，成分为蛋白胨10G，牛肉膏3G，氯化钠5G，琼脂20G，取38G加蒸馏水至1000ML，PH7274，国药集团化学试剂有限公司；LB肉汤BR，成份为蛋白胨10G，酵母粉5G，氯化钠5G，葡萄糖1G，取21加蒸馏水至1000ML，中国进出口商品检验技术研究所。213主要仪器电热恒温水浴锅DKS22型，上海精宏实验设备有限公司；旋转蒸发仪SENCOR201型，上海申顺生物科技有限公司；循环水真空泵SHZD型，巩义市英峪予华仪器厂；湿热灭菌锅电热鼓风干
13、燥箱CS1011AB型，中国重庆银河实验仪器有限公司；酸度计PHS25型，上海理达仪器厂；可见分光光度计7200型，尤尼柯（上海）仪器有限公司；高速台式离心机H1650型，长沙湘仪离心机仪器有限公司；电子天平BP221D型，SARTORIUS。气浴恒温振荡器SHZ82型，金坛市科析仪器有限公司；22实验方法221实验路线实验主要分为三部分，原料准备、抑菌能力和抗氧化能力测定。原料准备包括原料的预处理和费菜提取液粗提取。原料预处理取新鲜费菜叶在70烘干24H，然后用药物粉碎机粉粉碎并过80目筛，得到的叶粉备用，在提取之前将叶粉在105烘干2H左右。6费菜提取液粗提取过程910称取5G干粉，置于5
14、00ML锥形瓶中，按照料液比150加入浓度为90的乙醇，超声提取50MIN，60水浴浸提6H，趁热抽滤，得到滤液。将粗提液用旋转蒸发仪在4550下浓缩至适量后，加入2倍体积的95乙醇以沉淀多糖，放入冰箱6H，过滤，再将提液用旋转蒸发仪在4550下浓缩至适量后待用。抑菌能力测定包括费菜提取液中黄酮浓度、抑菌圈大小、MIC（最低抑菌浓度）和MBC（最低杀菌浓度）的测定。抗氧化能力测定包括费菜提取液还原力、费菜提取液羟自由基清除率和费菜提取液DPPH清除能力的测定。222测定方法2221费菜提取液中总黄酮浓度测定标准溶液的制备1112。精密称取120干燥至恒重的芦丁90MG，置50ML量瓶中，加30
15、乙醇适量，置水浴上微热使其溶解、冷却，加30乙醇至刻度，摇匀，量取上述试液100ML，置100ML量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀即得标准溶液。每1ML含芦丁0018MG。精密量取上述标准溶液10ML、15ML、20ML、25ML、30ML、35ML，分置25ML量瓶中，各加水至6ML；分别加5NANO2溶液1ML，摇匀，放置6MIN；分别加10ALN033溶液1ML，摇匀，放置6MIN；然后分别加4NAOH溶液10ML，并分别加水至刻度，摇匀，静置15MIN，在510NM测定吸收度，以30乙醇溶液代替芦丁溶液做空白对照。以浓度CMG/ML对吸光度A作标准曲线绘制标准曲线如图1所示。由图1得到
16、回归方程Y12353X00022，R209997。0100102030405060708090001002003004005006007芦丁浓度MG/MLA图1芦丁标准曲线FIG1THESTANDARDCURVEOFRUTIN费菜提取液中总黄酮含量测定。把制得的费菜提取液取1ML稀释100倍，分别吸取05ML、10ML、15ML、20ML、25ML稀释液代替芦丁溶液，按照制作标准曲线相同的方法测吸光值。2222菌种的预处理13首先制作九管无菌的营养琼脂培养基斜面，并标记好菌种和时间，第一天用三管斜面分别接种三种细菌，在37OC培养24H；第二天以培养好的细菌为菌种，分别接种一管，继续在在37O
17、C培养724H；第三天以第二天培养的细菌为菌种，分别接种一管，在在37OC培养24H，备用。在无菌条件下，取一环大肠杆菌放入09的无菌生理盐水中，充分震荡混匀后，制成101的均匀稀释液。大概使菌悬液的浓度为106、107CFU/ML（之前做几次预实验）。领取5支9ML无菌生理盐水试管，分别标记大肠杆菌和102、103、104、105、106。用1ML灭菌移液枪吸取101稀释菌液1ML，沿着管壁徐徐注入标有102试管的灭菌生理盐水中（注意移液枪头不要触及管内稀释液），然后另换1个1ML移液枪头插入102试管中反复吹吸菌悬液10余次，充分混合均匀（吹吸菌液时不要过猛太快，吸时将枪头插入液面下面一点
18、，吹时将吸管提到接近液面以下），制成102稀释液。按上述操作顺序，制成103、104、105、106系列稀释菌液（每递增稀释一次，即换用一个枪头，否则稀释不准）。2223提取液的抑菌圈测定先将灭菌的营养琼脂培养基融化后，在无菌室中趁热导入无菌平板中，冷却后分别做好标记。用移液枪取106试管中的菌液01ML，对号接种于106的平板中（每个编号设两个重复），再用无菌玻璃涂布棒（用酒精棉擦拭并灼烧灭菌）将菌液涂布均匀，平放于实验台上2030MIN，使菌液渗入培养基内。按照上述方法制作101、104、105菌液的平板，104、105菌液各两个，101菌液6个平板。104、105、106菌液做菌落总数计
19、数用，101菌液做抑菌圈用。把直径为6MM的打孔器（用酒精棉擦拭并在酒精灯上灼烧灭菌），在每个101菌液平板上打3个孔，每个孔之间相差30MM以上，并用无菌镊子（酒精棉擦拭并在酒精灯上灼烧灭菌）把平板上打孔后的琼脂拿掉。取出一个平板，分别在里面的三个孔中注入50L的无菌水、硫酸庆大霉素溶液、费菜提取液，做3个平行。取出另一个平板，分别在里面的三个孔中注入50L的费菜提取液、01山梨酸钾、05山梨酸钾溶液，同样做三个平行。以上操作完后，菌落计数的几个平板倒置于37OC培养箱中培养24H，做抑菌圈的几个平板正放于37OC培养箱中培养24H后观察。金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌也做以上相同的操作，但用
20、山梨酸钾做对照的只做大肠杆菌。2224费菜提取液最低抑菌浓度（MIC）的测定1415总黄酮采用二倍稀释法配成各种浓度，其方法取6支试管分别加入2ML液体培养基，2ML提取液于第1支试管中，混匀后取2ML入第2管，然后依次取2ML移入下一管，到笫6管时弃去2ML，即将提取原液1G/ML用提取相应的溶剂按照12、14、18、116、116、132的比例进行倍半稀释，得6个浓度的稀释提取液。在这6管中分别加入01RNL大肠杆菌101菌液，另取7支试管不加菌液作为空白对照。将其放于培养箱中，37培养24H，观察记录澄清不长菌的最高稀释度就是最低抑菌浓度MIC，每个样品设2个平行组，结果以平均值计。金黄
21、色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌也做以上相同的操作。2225费菜提取液最低杀菌浓度（MBC）的测定1617取若干个无菌平皿做好标记，将MIC测定中未生长细菌的肉汤用倾注平板法接种于营养琼脂平板上，37OC培养24H，观察结果，以仍无细菌生长的管内的费菜提取液的浓度，为最低杀菌浓度。2226费菜提取液还原力测定原理18抗氧化剂的还原力与其抗氧化性之间存在十分密切的关系。抗氧化剂是电子的给予体ELECTRONDONOR，通过自身的还原作用给出电子而清除自由基，还原力越强，抗氧化性越强。因此，可通过测定还原力来说明其抗氧化活性的大小。普鲁士蓝法测定还原力的原理是样品将铁氰化8钾K3FECN6）还原成亚铁氰化
22、钾K4FECN6，亚铁氰化钾再与FE3作用，生成亚铁氰化铁普鲁士蓝，在700NM波长处检测普鲁士蓝的吸光度，以表示还原力的大小，吸光度越高样品的还原力就越强。操作步骤19在25ML、PH66磷酸缓冲溶液PHOSPHATEBUFERSALINE，PBS，PH66中加入1ML不同浓度的费菜提取物溶液、1ML1铁氰化钾，混合物在50恒温条件下加热20MIN，急速冷却，加25ML10三氯乙酸，离心分离10MIN。取上层清液5ML，加5ML水，再加1ML01FEC13，混合均匀，静置10MIN后，在700NM下测定其吸光度值以蒸馏水代替样品的混合液作参比溶液，吸光度值越高还原力越强。2227费菜提取液羟
23、自由基清除率测定原理20参照FNTON反应的方法建立反应体系模型，利用H2O2与FE2混合产生OH，但由于OH具有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加入水杨酸，就能有效地捕捉OH，并产生有色产物。反应式如下H2O2FE2FE30H0H该产物在510NM处有强吸收，若在此反应体系中加入具有清除OH功能的被测物，便会与水杨酸竞争OH，从而使有色产物生成量减少。操作步骤21于25ML容量瓶中依次加入2MMOL/LFESO45ML，6MMOL/LH2O25ML，6MMOL/L水杨酸一乙醇15ML，于37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度AO，然后再加入1ML被测
24、定样品，摇匀，37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度AX。考虑到色素本身的吸光度值，做了对照试验于25ML容量瓶中依次加入2MMOL/LFESO45ML，蒸馏水5ML，6MMOL/L水杨酸一乙醇15ML，于37水浴中保温15MIN，然后加入1ML被测定样品，摇匀，于37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度AXO。根据下面的公式计算抑制率。清除率AOAXAXO/AOL00式中AO为蒸馏水代替样品的对照值；AX为加样后的吸光度；AXO为样品本身的本底值。把费菜提取液稀释10倍、8倍、6倍、4倍、2倍、1倍，分别测清除率，作图。2228费
25、菜提取液DPPH的清除能力测定原理22DPPH（1，1二苯基2三硝基苯肼）是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液显紫色，在517NM处有最大吸收峰。当有供氢的抗氧化剂存在时如酚类，孤电子被配对，DPPH溶液的颜色变浅，吸光度值变小，根据吸光度的变化可测得抗氧化剂的活性。操作步骤23DPPH以50乙醇溶液配成02MOL/L溶液，取上述不同质量浓度的待测液各2M1和DPPH溶液2ML先后加入同一具塞试管，摇匀于室温下放置30MIN后，于517NM波长处分别测定各反应液的吸光值。9DPPH的清除率1AIAJ/AC100式中，AI代表2MLDPPH溶液加入2ML费菜提取液吸光值，AJ代表2M1费菜提取液加
26、入2ML乙醇的吸光值，AC代表2MLDPPH溶液加入2ML乙醇的吸光值。把费菜提取液稀释10倍、8倍、6倍、4倍、2倍、1倍，分别测清除率，作图。3结果与分析31费菜提取液总黄酮含量通过费菜提取液中黄酮含量的测定，其结果见表1所示。表1总黄酮含量测定结果TABLE1THEFLAVONOIDSCONTENTDETERMINATIONRESULT样品1（SANPLE1）样品2（SANPLE2）样品3（SANPLE3）总黄酮浓度MG/ML（FLAVONOIDSCONCENTRATION）237723702399费菜提取液总黄酮的含量23820011MG/ML32费菜提取液的抑菌效果通过费菜提取液对细
27、菌抑制效果的实验，其结果见表2、表3所示表2菌悬液的细菌总数TABLE2THETOTALBACTERIALCOUNTOFBACTERIALEVITATIONLIQUID大肠杆菌ESCHERICHIACOLI金黄色葡萄球菌STAPHYLOCOCCUSAUREUS枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）106菌悬液菌数823753101菌悬液菌数821073710753107表3费菜提取液的抑菌效果TABLE3ANTIMICROBIAEFFECTOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACT菌株STRAIN抑菌圈直径MM（BACTERIOSTATICCIRCLEDIAMETER）
28、平均直径MM（AVERAGEDIAMETER）大肠杆菌ESCHERICHIACOLI1211118116金黄色葡萄球菌STAPHYLOCOCCUSAUREUS10095909510枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）10010511105从表3可以看出，费菜提取液对三种所选菌种的都有着明显的抑制效果（见图26）。其中对大肠杆菌的抑制效果尤为强烈，枯草芽孢杆菌次之，金黄色葡萄球菌最弱。从图3和图4可以得出，费菜提取液对不同浓度的细菌抑制效果有所区别，细菌浓度越大，抑菌效果越弱。图5和图6的对照分别是01和05的山梨酸钾溶液，从图可以看出费菜提取液比山梨酸钾的抑菌效果好。费菜提取液对几
29、种细菌的抑菌圈ANTIMICROBIALCIRCLESOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTAGAINSTSOMEBACTERIA图1107CFU/ML大肠杆菌图2107CFU/ML金黄色葡萄球菌FIG1107CFU/MLESCHERICHIACOLIFIG2107CFU/MLSTAPHYLOCOCCUSAUREUS11图3107CFU/ML枯草芽孢杆菌图4106CFU/ML枯草芽孢杆菌FIG3107CFU/MLBACILLUSSUBTILISFIG4106CFU/MLBACILLUSSUBTILIS图5107CFU/ML大肠杆菌（山梨酸钾做对照）FIG5107CFU/MLE
30、SCHERICHIACOLI（POTASSIUMSORBETASCOMPARED）33不同浓度的费菜提取液对细菌的抑制效果的影响不同浓度费菜提取液对上述三种受试菌的低抑制浓度实验结果见表412表4不同浓度山费菜提取液对各种细菌的抑制效果TABLE4ANTIMICROBIALEFFECTOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTWITHDIFFERENTCONCENTRATIONONDIFFERENTSTRAINS菌株STRAIN费菜提取液（AIZOONSTONECROPHERBEXTRACT）121418116132164大肠杆菌ESCHERICHIACOLI金黄色葡萄球菌STA
31、PHYLOCOCCUSAUREUS枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）注表示液体非常浑浊，表示液体浑浊，表示液体轻微浑浊，表示液体澄清。NOTESTANDSFORLIQUIDVERYTURBIDITYSTANDSFORLIQUIDTURBIDITYSTANDSFORSLIGHTTURBIDITYSTANDSFORLIQUIDCLARIFY在37OC温箱中培养24H后，取出试管，肉眼观察试管中液体的浑浊度，判断细菌生长情况，结果显示，费菜提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌都有明显的抑制作用，随着费菜提取液浓度提高抑菌效果越强，到一定浓度后可以完全抑制细菌的生长。三种菌在费
32、菜提取液稀释到1/16浓度时都出现浑浊，但金黄色葡萄球菌试管的液体更浑浊。所以三种菌的最低抑菌浓度是费菜提取液稀释到1/8的浓度。34不同浓度的费菜提取液的杀菌效果不同浓度的费菜提取液对上述三种受试菌的杀菌浓度实验结果见表4表5费菜提取液对各种细菌的最低灭菌浓度TABLE5MINIMUMBACTERICIDALCONCENTRATIONOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTONDIFFERENTSTRAINS菌株STRAIN费菜提取液（AIZOONSTONECROPHERBEXTRACT）121418116132164大肠杆菌ESCHERICHIACOLI金黄色葡萄球菌STA
33、PHYLOCOCCUSAUREUS枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）注表示有菌体生长，表示无菌生长。NOTESTANDSFORBIOMASSGROWTHSTANDSFORNOBIOMASSGROWTH在37OC温箱中培养24H后，取出试管，肉眼观察平板中是否长有菌落，结果显示，费菜提取液对大肠杆菌的最低杀菌浓度是提取液稀释到1/8,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最低杀菌浓度是提取液稀释到1/4，说明费菜提取液对大肠杆菌的杀菌效果比对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌好。35费菜提取液的还原能力VC和费菜提取液经还原力测定结果曲线13图7费菜提取液和VC的还原力吸光度曲线FIG7THE
34、ABSORBANCECONCENTRATIONCURVEOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTANDVC图7横坐标是以费菜提取液中总黄酮的量来标定的，VC的浓度与费菜提取液中总黄酮的浓度一致。费菜提取液和VC的吸光度随着浓度的升高而升高。吸光度越大，样品还原力越强，从图7可以得出费菜提取液的还原力高，由于提取液中的成份复杂，一些黄酮类和生物碱类等都具有抗氧化性，和VC的还原力没有相比性，只做参考。此实验表明费菜提取液具有一定的抗氧化能力。36费菜提取液清除羟自由基清的能力通过清除率计算公式得到不同浓度费菜提取液和VC的羟自由基的清除率，绘制曲线，如图8所示。图8费菜提取液和V
35、C的羟自由基清除能力FIG8SCAVENGINGEFFECTOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTANDVCONOH14图8横坐标是以费菜提取液中总黄酮的量来标定的，VC的浓度与费菜提取液中总黄酮的浓度一致。从图8中可以看出，随着费菜总提取液的浓度逐渐增加，其清除率也逐步增大，具有良好的量效关系。本实验中最高浓度的费菜总黄酮样液的最大清除率达9379。由此表明，费菜提取液对羟自由基具有较高的清除能力。VC只做参考，不做对照。37费菜提取液清除DPPH的能力不同浓度费菜提取液和VC对DPPH的清除率，绘制曲线，如图9所示。图9费菜提取液和VC的羟自由基清除能力FIG9SCAVE
36、NGINGEFFECTOFAIZOONSTONECROPHERBEXTRACTANDVCONDPPH图9横坐标是以费菜提取液中总黄酮的量来标定的，VC的浓度与费菜提取液中总黄酮的浓度一致。从图9中可以看出，随着费菜总提取液和VC的浓度逐渐增加，其清除率也逐步增大，两者都具有良好的量效关系。费菜提取液中除了黄酮还有其他抗氧化物质存在的条件下，其对DPPH的清除率不如VC，所以总的来说，费菜提取液提取液清除DPPH自由基能力比VC弱。4小结41费菜提取液的抑菌效果从表35，图14可以得出费菜提取液对三种受试菌有着不同效果的抑制作用。比较费菜提取液对受试菌抑菌圈的直径大小、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度
37、可知（见表35），费菜提取液对大肠杆菌的抑制作用最为强烈，对金黄色葡萄球菌作用次之，而对枯草芽孢杆菌的抑制作用最弱。比较这三种受试菌后发现金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为革兰氏阳性菌，大肠杆菌为典型的革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为球菌，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为杆菌，所以从某种程度上来讲费菜提取液对革兰氏阳性和阴性菌，杆菌和球菌都有一定的抑制作用，可见费菜提取液有着广谱的抑菌效果。而且从MIC和MBC中可以得出，费菜提取液对三种菌完全抑制所需的浓度不大，所以费菜提取液15如果进一步开发可以用在食品、医疗和农业等方面。费菜含有生物碱、谷甾醇、黄酮类、齐敦果酸、景天庚糖，果糖等药物成分，很多资料表明2
38、326，生物碱和黄酮类化合物具有明显的抑菌效果，这就是费菜抑菌的大致原理，但是由于费菜的活性成份很多，具体的原因有待进一步研究。42费菜提取液的抗氧化效果本实验以费菜提取液为原料，通过三种方法检测其抗氧化活性，结果表明费菜提取液具有一定的抗氧化能力，不同的实验检测方法，检测的是其对不同能力的抗氧化性，但总的来说费菜提取液的抗氧化能力较好。1）还原力测定结果表明费菜提取液具有较高还原力，且随着提取液浓度的升高而增大，从而费菜总黄酮具有较好的抗氧化能力。2）羟自由基清除能力结果表明费菜提取液对羟自由基具有很强的清除能力，且随着提取液浓度的升高而增大，在浓度不大的情况下清除率亦可达到9379。3）D
39、PPH自由基清除能力结果表明费菜提取液对DPPH自由基有较好的清除能力，且随着提取液浓度的升高而增大，但相对于VC而言，其清除效果不如VC。费菜含有生物碱、谷甾醇、黄酮类、齐敦果酸、景天庚糖，果糖等药物成分，很多资料表明2326，生物碱、黄酮类化合物和一些多糖等具有明显的抗氧化效果，正是由于费菜的这些生理活性物质使得它具有抗氧化功能。参考文献1孙执中费菜J特种经济动植物，2003，1252李家玉，王海斌，林志华等植物次生代谢物的结构、生物合成及其功能分析生物碱J农业科学研究，2009，30468723中国药科大学中药辞海（第一卷M北京中国医药科技出版社，199318554金运松21世纪绿色保健
40、食疗佳肴费菜J小康生活，2003，1113145种高军新型保健类蔬菜费菜的栽培及繁殖J中国园艺文摘，2009，91111126陈宗忠一种新型保健茶养心茶的研制J福建农业科技，2005，653547王锋鹏生物碱化学M北京化工出版社，200815198唐浩国黄酮类化学物研究M北京科学出版社，20092733829刘羽中，杨洋生物类黄酮提取研究进展J原料与配料，2004，10484910周林，徐立，伍春等桑枝皮总黄酮提取工艺条件的优化试验J蚕叶学，2010，36349149511吕国红，钟晓凌，李良等枳子总黄酮测定方法的比较分析J湖北工业大学学报，2009，24191212莫开菊，柳圣，程超等生姜黄
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