1、本科毕业设计（20_届）福寿螺卵中类胡萝卜素的研究所在学院专业班级食品质量与安全学生姓名学号指导教师职称完成日期年月2目录1引言12材料与方法221主要试剂与设备2211主要试剂2212主要设备222福寿螺卵的基本理化性质2221卵的采集及卵研磨液的制备3222水分含量的测定3223灰分含量的测定3224脂肪含量的测定3225蛋白质含量的测定323福寿螺卵类胡萝卜素提取方法的选择3231福寿螺卵标准液的配制3232提取溶剂的选择3233测定方法324福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素的比较3241胡萝卜素的提取3242福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素薄层色谱比较425福寿螺卵类胡萝卜素的抗氧化评价425
2、1FRAP法测定总抗氧化活性4252FESO4标准曲线的绘制4253抗氧化总值与抗坏血酸对比426福寿螺卵类胡萝卜素提取方法的优化4261优化工艺条件4262提取液浓度的计算43结果与讨论531福寿螺卵的基本理化特性532福寿螺卵类胡萝卜素提取方法的确定633福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素的比较分析734抗氧化活性测定结果835单因素试验结果与分析936部分因子试验结果与分析1037提取条件的优化结果114小结13致谢错误未定义书签。参考文献153摘要本文以福寿螺卵为原料，测定了福寿螺卵的水分、灰分、脂肪、蛋白质的含量，并采用不同溶剂进行类胡萝卜素的初步提取，比较了不同提取方法的效果，从而确定氯
3、仿甲醇体系适宜提取福寿螺卵中类胡萝卜素。通过改变溶剂体积比、提取温度、提取时间、超声波等因素，进行提取方法的优化。实验结果表明当氯仿甲醇的溶剂体积比为037，提取温度为39，并进行超声波处理时，对福寿螺卵中类胡萝卜素的提取效果最好。关键词福寿螺卵；类胡萝卜素；提取ABSTRACTBASEDONTHEAPPLESNAILEGGSASMATERIALSINTHISPAGE,WEDETERMINEDITSCONTENTOFMOISTURE,ASH,FATANDPROTEINTHENWEEXTRACTEDTHECAROTENOIDSINAPPLESNAILEGGSPRELIMINARYWITHDIFF
4、ERENTKINDSOFSOLVENT,ANDCOMPAREDTHEPERFORMANCEOFDIFFERENTEXTRACTIONMETHODS,SOTHATWEDETERMINETHEBESTEXTRACTIONSYSTEMISCHCL3CH3OHSYSTEMWEOPTIMIZEDTHEEXTRACTIONMETHODSBYCHANGINGTHEFACTORSLIKESOLVENTVOLUMERATIO,TEMPERATURE,TIME,ULTRASONICWAVETHEOPTIMUMCONDITIONSFORCAROTENOIDEXTRACTIONFROMAPPLESNAILEGGSWE
5、REASCHCL3CH3OHIS037,THETEMPERATUREIS39ANDUNDERULTRASONICWAVEPROCESSINGKEYWORDSAPPLESNAILEGGSCAROTENOIDSEXTRACTION11引言福寿螺（APPLESNAIL）又称大瓶螺，原产于南美洲亚马逊河流域1，因其头部肉质细嫩鲜美，富含蛋白质、胡萝卜素、多种维生素和矿物质，在1981年作为食用螺引入中国2。福寿螺以植物性饲料3为主，主食各种水生植物、陆生草类和瓜果蔬菜，如各种浮萍、水花生、水葫芦、青菜、青草、瓜皮、水果等，也食人工投喂的糠麩、饼粕类饲料及下脚料等，在食物缺乏的时候也摄食一些残渣剩饵和腐
6、殖质及浮游动植物。但由于人们对福寿螺的危害性4缺乏认识，盲目引进，管理不当，同时该物种有生活适应性强、生长迅速、繁殖快等特点5，很快成为危害巨大的外来入侵物种，现已对农业以及生态造成巨大危害6。因此围绕该物种各行业展开了一系列研究。对于福寿螺及其卵，不同的研究者就不同的方面进行了少量的研究，比如，张刚生7研究了福寿螺卵壳的化学组成；毛孙忠8等对福寿螺纤溶酶的进行分离纯化并研究了其性质。HEARS等9首次报道了福寿螺卵中具有防止入侵的活性成分，该成分能对卵提供化学防护，对小鼠具有神经毒性作用的活性成分。总得来说，对于福寿螺的研究还不够系统，也不够深入。事实上福寿螺体内和卵中具有丰富的生物活性物质
7、，包括消化系统内的消化酶类10,11,12，体内的抗菌活性的多肽、免疫功能的酶类，以及卵中的强抗氧化和防入侵等活性成分。MARCOS等13研究发现卵红蛋白在福寿螺卵抗氧化损伤保护系统中具有重要作用，且这种胡萝卜素糖脂蛋白中类胡萝卜素成分与其抗氧化能力息息相关。人们普遍接受，类胡萝卜素可以作为抗氧化剂，特别是在胞膜形式14下虾青素是一种有力的抗氧化的模型。类胡萝卜素（CAROTENOID）是一类广泛存在于自然界中的天然有色物质，通常是指40碳的碳氢化合物（胡萝卜素）和它们的氧化衍生物（叶黄素）两大类色素的总称，其颜色通常为黄色到红色，属于脂溶性四萜烯类化合物15。类胡萝卜素一般可分为两类胡萝卜素
8、和叶黄素16。前者以胡萝卜素为代表，仅含碳、氢两种元素，后者则是前者的含氧衍生物，如虾青素。而我们研究的福寿螺卵中类胡萝卜素就是虾青素的一种。类胡萝卜素在生物体中能够表现出许多生物学功能17，是一种良好的自由基淬灭剂，具有显著的抗氧化性，可以有效地阻断细胞内的自由基链式反应18，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素，在抗癌、防癌方面和预防心血管疾病、白内障方面有显著作用，并能防止老化和衰老引起的多种退化性疾病，因而被认为是治疗和预防这些顽疾的理想药物19。类胡萝卜素化合物以其独特的生物活性引起了国内外功能性食品和药品的开发热20。其中胡萝卜素21具有营养增补剂和食品着色剂的双重功效，被
9、广泛用作饮料、食品及饲料添加剂。胡萝卜素的生产方法有化学合成法和天然胡萝卜素生产法两种。而提取是天然色素生产中较为关键的工序22之一，其中的影响因素也较多，例如提取工艺的流程，提取溶剂的选择。一般常见的提取方法有有机溶剂提取法23、酶反应法24、微波辅助提取法25、超声波辅助提取法26、超临界流体萃取法27等。本研究先对福寿螺卵的基本理化性质进行检测，预估其提取特点，再对其中的类胡萝卜素进行初步提取，确定合适的提取溶剂体系。接着对福寿螺卵中提取的类胡萝卜素进行薄层色谱和分光光度法分析，比较从福寿螺卵提取类胡萝卜素的经济性。最后结合众多文献的经验，对溶剂体积比、提取温度、提取时间、和是否进行超声
10、波这些因素进行单因素、部分因子和响应面分析试验，进行提取条件的优化。22材料与方法21主要试剂与设备211主要试剂柠檬酸（C6H8O7H2O）分析纯上海试剂四厂昆山分厂磷酸氢二钠（NA2HPO412H2O）分析纯湖州化学试剂厂无水乙酸钠（CH3COONA）分析纯上海国药集团化学试剂有限公司冰乙酸（CH3COOH）分析纯上海国药集团化学试剂有限公司无水硫酸铵分析纯上海国药集团化学试剂有限公司甲醇分析纯上海国药集团化学试剂有限公司石油醚分析纯上海国药集团化学试剂有限公司氯仿分析纯上海国药集团化学试剂有限公司丙酮分析纯上海国药集团化学试剂有限公司乙醇乙酸乙酯乙酸抗坏血酸分析纯分析纯分析纯分析纯上海国
11、药集团化学试剂有限公司上海国药集团化学试剂有限公司上海国药集团化学试剂有限公司上海国药集团化学试剂有限公司硫酸亚铁分析纯上海国药集团化学试剂有限公司醋酸钠分析纯上海国药集团化学试剂有限公司三氯化铁TPTZ（三吡啶三吖嗪）分析纯上海国药集团化学试剂有限公司SIGMA公司生产212主要设备新型电热恒温鼓风干燥箱密封式恒温可调电炉CARY100紫外/可见光分光光度计电子天平AB204S电子天平PH33C型PH计宁波江南仪器厂嘉兴市欣欣仪器设备有限公司美国瓦里安公司余姚市金诺天平仪器有限公司上海台衡仪器仪表有限公司上海雷磁仪器有限公司DKS22电热恒温水浴箱上海精宏实验设备有限公司旋涡混合器杭州泰林生
12、物技术设备有限公司BIOGELP100BIORAD公司MICROCONYM30超滤浓缩离心管上海索莱宝生物科技有限公司CARY100紫外/可见光分光光度计UVVISIBLE公司SOEVALLSTRATOS冷冻高速离心机上海纳诺仪器有限公司冰箱海尔集团有限公司22福寿螺卵的基本理化性质不同样品因为其中水分、脂肪、蛋白质的含量不同，直接影响对其中物质的提取方式和提取效果，因此实验最初对样品福寿螺卵进行了基本理化性质的分析，测定了其水分、灰分、脂肪和蛋白质的百分含量。3221卵的采集及卵研磨液的制备在水塘、芦苇荡1等福寿螺卵高产地中，选择颜色鲜艳、产期靠近的新鲜福寿螺卵进行采集。利用剪刀等工具剪下一
13、段卵块依附的枝干以避免卵的破裂，从而保持卵块的完整性。将采集的卵块放入保鲜袋中，置于冰箱冷藏室中进行保藏待用。需要时称取适量的福寿螺卵块，在室温中静置片刻，待卵块略解冻后放入研钵中进行研磨，至研磨液均匀，没有明显的卵粒或者卵壳。研磨液现配现用，注意避免与空气的长时间接触而造成类胡萝卜素的损失。222水分含量的测定取5G福寿螺卵研磨液用干燥法测定其水分含量28。223灰分含量的测定取5G福寿螺卵研磨液测定其灰分含量28。224脂肪含量的测定取5G福寿螺卵研磨液用索氏抽提法测定其脂肪含量28。225蛋白质含量的测定取5G福寿螺卵研磨液用凯氏定氮法测定其蛋白质含量28。23福寿螺卵类胡萝卜素提取方法
14、的选择231福寿螺卵标准液的配制精确称取100G均匀的福寿螺卵研磨液，分别装入50ML离心管中，配平后，在高速冷冻离心机中以5000RPM的转速离心15MIN，取中间的澄清液，倒入100ML的容量瓶中，注意避免上层泡沫进入容量瓶。向离心管中加入少量的蒸馏水，盖好盖后，摇匀，继续用5000RPM的转速离心15MIN，将中间的澄清液倒入容量瓶中。重复上述步骤至离心管的泡沫和沉淀不为鲜红色为止，再用蒸馏水定容至100ML，标准液配制完成。标准液如不立即使用，必须放入冰箱保藏室，防止类胡萝卜素的氧化。232提取溶剂的选择类胡萝卜素为多烯类的脂溶色素，一般不溶于水，而易溶于脂溶性有机溶剂，然而不同的浸提
15、溶剂对类胡萝卜素成分的溶解性不同，提取效果也不一样29。为充分将原料中的色素提出，本实验采用一系列不同极性的溶剂，如丙酮、乙酸乙酯、石油醚、正己烷丙酮混合液及氯仿甲醇混合液等，以提取物中类胡萝卜素的含量为指标，筛选出提取效果最好的溶剂体系。吸取2ML福寿螺卵标准液，分别加入编号离心管中，再加入6ML对应的不同溶剂，充分振荡05H，放入离心机中以5000RPM的转速离心15MIN。233测定方法由于类胡萝卜素的分子结构中存在类异戊二烯共轭双键，故吸光性能强，在400500NM内有强的吸收，对类胡萝卜素进行紫外可见光光谱扫描在486NM处有最大吸收值。因此，采用分光光度法对提取结果进行测定。由于标
16、准胡萝卜素不稳定性，给标准曲线的制备带来困难，而采用02G/LK2CR207标准溶液制备的标准曲线，与胡萝卜素标准曲线完全吻合，并操作简便，重现性好。因此，本试验以K2CR207为标样，在486NM波长处测定吸光度，绘制标准曲线。24福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素的比较241胡萝卜素的提取经上述实验可确定，提取福寿螺卵类胡萝卜素的最佳提取剂为氯仿甲醇（体积比为13）。称取2ML4胡萝卜研磨液，加入离心管中，加入6ML氯仿甲醇（体积比为13），充分振荡半小时，放入离心机中以5000RPM的转速离心15MIN，测胡萝卜素提取液紫外吸收光谱。242福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素薄层色谱比较向由氯仿甲醇（
17、体积比为13）提取的福寿螺卵类胡萝卜素和胡萝卜素提取液中分别加入足量无水硫酸钠脱水。以石油醚丙酮（体积比为10035）试剂作展开剂，对两者做薄层色谱分析比较。25福寿螺卵类胡萝卜素的抗氧化评价将标准液稀释5个梯度，然后进行抗氧化总值的测定，并与抗坏血酸的抗氧化能力进行比对，判定福寿螺卵中的类胡萝卜素是否具有作为食品添加剂广泛应用的潜质。251FRAP法测定总抗氧化活性采用FRAP法评价被测样品的总抗氧化能力，因为抗氧化活性物质将FE3还原为FE2，FE2与TPTZ（三吡啶三吖嗪）结合生成明显的蓝色络合物，在593NM处有最大吸收光，根据吸光度的大小来计算样品的总抗氧化能力。FRAP工作液的配制
18、03MOL/LPH为36的醋酸盐缓冲液，100MMOL/LTPTZ溶液，20MMOL/LFECL3溶液，按1011的比例混合，现配现用。操作步骤FRAP工作液使用前在37水浴预热，取3ML，加150L不同浓度样液，300L去离子水，在37水浴锅中反应10MIN，以去离子水代替样液调零，在593NM测吸光度。根据还原力标准曲线，将达到相同吸光度所需的FESO4浓度记为FRAP值，表示总抗氧化能力的大小。252FESO4标准曲线的绘制浓度梯度为50，100，200，400，800，1000MOL/L的FESO4溶液，以FESO4溶液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制。253抗氧化总值与抗坏血酸对比测
19、定浓度梯度为0，4，8，12，16，20G/ML的抗坏血酸测定抗氧化总值，测定浓度梯度为0，002，004，006，008，010（设标准液浓度为1）的福寿螺卵溶液，绘制趋势图，比较两者的抗氧化能力。26福寿螺卵类胡萝卜素提取方法的优化提取是天然色素生产中比较重要的工序，提取工艺是否合理，溶剂选择是否恰当，直接关系到产品的产量和质量，也影响后面工序的进行29。对福寿螺卵中类胡萝卜素的提取，根据提取物得率，提取液的浓度，对各种提取方法的优劣进行评价，从而筛选出合适的提取工艺。261优化工艺条件在溶剂选择的基础上，对所选定的溶剂体系的溶剂体积比进行调节，并结合提取温度、提取时间、是否微波等因素进行
20、单因素、部分因子和中心组合设计试验。通过测定提取剂不同层的比色值，推断出提取剂中提取的类胡萝卜素的含量，换算出提取率，从而对福寿螺卵中的类胡萝卜素的提取条件进行评价，进一步优化工艺条件。262提取液浓度的计算将提取液取出，置于1CM比色皿中，同标准曲线制备方法，在486NM处测定吸光度，通过之前得到的重铬酸钾标准曲线及其公式，算出提取液浓度。53结果与讨论31福寿螺卵的基本理化特性福寿螺卵的基本理化性质测定结果见下表311至表314，即福寿螺卵的水分含量为7605，灰分含量为1397，脂肪含量为069，蛋白质含量为122。表311福寿螺卵的水分含量TABLE311THEMOISTURECONT
21、ENTOFAPPLESNAILEGGS编号123样品质量（G）500275003650039样品干燥后质量（G）118641203012052样品中水分含量（）762848759573759148样品的平均水分含量（）760523表312福寿螺卵的灰分含量TABLE312THEASHCONTENTOFAPPLESNAILEGGS编号123样品质量（G）500395010850028样品中灰分质量（G）070630694606965样品中灰分含量（）141150138621139222样品中平均灰分含量（）139664表313福寿螺卵的脂肪含量TABLE313THEFATCONTENTOFAPP
22、LESNAILEGGS编号123样品量（G）530775340353069样品中脂肪质量（G）003710037500366样品中脂肪含量（）069900702206897样品中平均脂肪含量（）06970表314福寿螺卵的蛋白质含量TABLE314THEPROTEINCONTENTOFAPPLESNAILEGGS编号空白123样品质量（G）0500175001050034消耗盐酸标准滴定液（ML）020462450434盐酸标准滴定液浓度（MOL/L）09648样品中蛋白质的含量（）125931225311791样品中平均蛋白质含量（）12212632福寿螺卵类胡萝卜素提取方法的确定重铬酸钾标
23、准曲线见图321，线性方程Y02626X00036，R209874，在01G08G/ML范围内有良好线性关系。采用分光光度法对不同试剂的提取结果进行测定，根据吸光值在标准曲线中得出福寿螺卵类胡萝卜素的提取量。最终确定氯仿甲醇（体积比为13）提取效果最佳。图321重铬酸钾标准曲线FIGURE321THESTANDARDCURVEOFK2CR207表321不同提取剂提取液的吸光值TABLE321THEABSORBANCEOFEXTRACTINDIFFERENTEXTRACTIONAGENTS提取剂吸光值（486NM）水1177水（抽滤）乙酸乙酯16481101氯仿乙醇甲醇096205640259丙
24、酮1999正己烷丙酮（11）石油醚丙酮（11）乙酸丙酮（11）229119050984氯仿甲醇（13）氯仿甲醇（12）37661303733福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素的比较分析图331福寿螺卵类胡萝卜素提取液光谱图FIGURE331THESPECTROGRAMOFCAROTENOIDSEXTRACTINAPPLESNAILEGGS图332胡萝卜胡萝卜素提取液光谱图FIGURE332THESPECTROGRAMOFCAROTENEEXTRACTINCARROTS图331和图332分别为福寿螺卵类胡萝卜素和胡萝卜中胡萝卜素在氯仿甲醇（体积比13）体系中提取液的光谱图，可以看到福寿螺卵类胡萝卜素的
25、两个波峰分别为在486NM时，吸光值为4752，以及241NM时，吸光值为5938；而胡萝卜中胡萝卜素的两个波峰分别为在472NM时，吸光值为0288，以及在209NM时，吸光值为2484。通过比较，我们可以明显知道福寿螺卵中类胡萝卜素与胡萝卜中胡萝卜素的最大吸收峰波长不同，并且两者最大吸光值差距很大。就此数值进行比较，可初步确定福寿螺卵中类胡萝卜素的含量较胡萝卜中胡萝卜素中高。因为众所周知类胡萝卜素是脂溶性色素，不易溶于水，所以用同一溶剂在不同样品进行中进行类胡萝卜素的提取，其提取效果受到样品中水分、脂肪、蛋白质的含量和比例等的影响较大。我们也可以初步判断福寿螺卵的脂肪应该高于胡萝卜，而水分
26、含量可能低于胡萝卜。当然类胡萝卜素种类繁多，不同样品中类胡萝卜素的极性也可能不同，还需要通过进一步实验进行分析。8表331福寿螺卵和胡萝卜的成分比较TABLE331THEINGREDIENTSCOMPARISONBETWEENAPPLESNAILEGGSANDCARROTS福寿螺卵胡萝卜水分（）7688脂肪（）0702蛋白质（）122104类胡萝卜素（G/ML）0011400031表331进一步证实了之前的猜测，福寿螺卵中水分的含量低于胡萝卜，但是其脂肪、蛋白质和类胡萝卜素的含量都高于胡萝卜，也证实假如从福寿螺卵中提取类胡萝卜素，产量应该较胡萝卜高。采用薄层色谱分析胡萝卜素和福寿螺卵类胡萝卜素
27、提取液，展开后（石油醚丙酮10035）能清晰的分出两个斑点。根据斑点的颜色、形状，可初步判定福寿螺卵类胡萝卜素与胡萝卜素的极性不同，它们的组成成分可能不同。34抗氧化活性测定结果硫酸亚铁标准曲线见图341，线性方程Y00006X00001，R209972，在01000MOL/ML范围内有良好线性关系。看图342可知，达到同一吸光值所需福寿螺卵类胡萝卜素的浓度小于抗坏血酸浓度，同等浓度下福寿螺卵类胡萝卜素的FRAP值大于抗坏血酸，证明福寿螺卵类胡萝卜素的总抗氧化能力高于抗坏血酸，从福寿螺卵中提取类胡萝卜素具有可行性。图341硫酸亚铁标准曲线FIGURE341THESTANDARDCURVEOFF
28、ESO49图342硫酸亚铁标准曲线FIGURE342THESTANDARDCURVEOFFESO435单因素试验结果与分析以氯仿甲醇为提取溶剂，在其他条件一致的情况下，分别针对溶剂体积比、提取温度、提取时间以及是否超声波等提取条件按表351进行单因素试验，结果见图351。表351单因素试验设计TABLE351THEDESIGNOFSINGLEFACTOREXPERIMENT因素水平1水平2水平3水平4AB溶剂体积比（氯仿甲醇）提取时间（MIN）11301260139014120C提取温度（）15253545D超声波开关图351单因素试验结果FIGURE351THERESULTOFSINGLEF
29、ACTOREXPERIMENT图351所示的吸光值为提取液氯仿层的吸光值，直接代表了提取液的提取率。结果显示，在本试验10范围内，不同因素的结果呈现不同的趋势。溶剂体积比即氯仿甲醇的体积比，比例越小，提取效果越明显。提取时间随着提取时间的增加，提取效果也逐渐变好，但是时间越久，提取效果增强越不明显。提取温度提取时温度越高，提取效果越好，但是超过一定限度，可能会对类胡萝卜素的活性造成破坏。超声波使用超声波的提取效果远高于未使用超声波，对类胡萝卜素的提取有明显的促进作用。但这些因素的具体影响力，需要进一步分析。36部分因子试验结果与分析了解溶剂体积比，提取时间，提取温度和超声波这些单因素的大概影响
30、之后，需要对这些因素的影响力大小以及他们之间的相互影响程度进行一个量化的测定，于是设计了一个部分因子试验，研究这些因素中哪些对提取效果有显著性影响。试验测定的是提取液甲醇层的比色值，因为类胡萝卜素总量统一，甲醇层的比色值越高，说明未提取的类胡萝卜素越多，提取效果越差。表361部分因子试验设计及试验结果TABLE361THEDESIGNANDRESULTSOFFFDSTD溶剂体积比提取时间提取温度超声波甲醇比色值10253015关225120253015关22703053015开24014053015开239350259015开202760259015开20567059015关256280590
31、15关267690253035开2249100253035开242211053035关284712053035关2839130259035关2495140259035关228415059035开290416059035开30771703756025关26021803756025开22631903756025关25132003756025开22372103756025关25912203756025开22392303756025关26032403756025开225911表362部分因子试验回归分析结果TABLE362THERESULTSOFTHEFFDREGRESSIONANALYSISFORA
32、LGINATELYASEPRODUCTIONSOURCE平方和SUMOFSQUARES自由度DF平均方差MEANSQUAREF值FVALUEPVALUEPROBFMODEL150354602505904989526FMODEL250975480313719873384200001A溶剂体积比122309011223090340504400001B提取温度085976410859764239355500001C超声波034730910347309966896000001AB001980110019801551239500312AC000476810004768132728102652BC0001
33、88510001885052472104787A2003665110036651102033800053B2002318910023189645563100211RESIDUAL0061064170003592LACKOFFIT004643890005160282224500794PUREERROR001462680001828CORTOTAL257081825STDDEV0060RSQUARED09762MEAN248ADJRSQUARED09651CV241REDRSQUARED09379PRESS016ADEQPRECISION35385方程系数R2为09762表明此方程有较好的拟合度,
34、方程与实际情况比较相符,并能作出相对准确的预测。ADJR209651校正决定系数表明仅有约4的甲醇比色值不能由此模型进行解释。LACKOFFIT反映的是实验数据与模型不相符的情况,它的值等于282,差异不显著，与整个模型的873比起来是很小的,这表示不符合的数据相对于纯误差是不显著的，也就是说这个模型拟合的较好，能较好的反映实验结果。由中心组合设计实验回归分析结果可以看出对于类胡萝卜素的提取，溶剂体积比（A）、提取温度（B）、超声波（C）是最主要的影响因素，在大于99的概率水平上影响甲醇比色值的大小。溶剂体积比（A）与提取温度（B）存在显著的交互作用。由回归分析结果可得二次拟合回归方程为（超声
35、波设为“开”）R123006A008B013AB009A2009B2对该方程的方差分析表明，该模型在95概率水平上足够拟合了实验数据。该模型的R2为09762，表明98的实验数据可由该模型解释。该方程的平方项系数都为正值，抛物线的开口向上，因此有极小值点。当Y取极小值时，得A002，B043。即溶剂体积比为037、提取温度为39时，理论甲醇比色值为23。对该优化值进行多次验证，结果与理论值基本吻合，吸光值在2283内。4小结通过实验，测定出福寿螺卵的水分含量为7605，灰分含量为1397，脂肪含量为069，蛋白质含量为122。相对于胡萝卜而言，其类胡萝卜素的含量远高于胡萝卜中的胡萝卜素的含量，
36、而与抗坏血酸进行对比，其抗氧化能力也较抗坏血酸高，因此对其进行类胡萝卜素的提取具有一定的经济性。接着，采用不同溶剂对福寿螺卵中类胡萝卜素进行初步提取，比较了不同提取方法的效果，从而确定14氯仿甲醇体系最适宜做提取剂。通过改变溶剂体积比、提取温度、提取时间、超声波等因素，进行提取方法的优化。实验结果表明当氯仿甲醇的溶剂体积比为037，提取温度为39，并进行超声波处理时，对福寿螺卵中类胡萝卜素的提取效果最好。15参考文献1林巧玉稻田福寿螺的发生及防治J植物保护,2004,320212张炳光福寿螺的发生规律与防治技术J现代农业科技,2005,8193林伟群,周锡跃稻田福寿螺的发生规律及综合防治J中国
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38、纤溶酶的分离纯化及其性质研究J温州医学院学报,2005,64614639KSRINIVASAMOORTHY,KASIREDDYCHANGESINACTIVITYLEVELSOFAMPDEAMINASEANDADENOSINEDEAMINASEINTHEINDIANAPPLESNAIL,PILAGLOBOSASWAINSONDURINGSTARVATIONANDAESTIVATIONSTRESSCELLULARANDMOLECULARLIFESCIENCESCMLS,1982,VOL381010张喆,赵红,周兴旺等福寿螺葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究J厦门大学学报自然科学版,1999,02
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