1、本科毕业设计（20_届）金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究所在学院专业班级食品质量与安全学生姓名学号指导教师职称完成日期年月【摘要】金黄色葡萄球菌是动物和人类化脓感染中最常见的病菌，在自然界中无处不在，因而食品受其污染的机会很多。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，葡萄球菌肠毒素是中毒的主要致病毒素，它对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠菌素破坏，必须加热100持续2H才能破坏其毒性。对生产的危害比较重大，为了在普通生产中杜绝或减少金葡菌及其肠毒素的危害，在生产加工的时候要杜绝营养丰富水分
2、充足的环境，以降低金葡菌及其肠毒素对食品和食品原料的污染。【关键词】金黄色葡萄球菌；肠毒素；冻虾仁。【ABSTRACT】STAPHYLOCOCCUSAUREUSWASINFECTEDANIMALSANDHUMANSARETHEMOSTCOMMONROTTINGBACTERIA,INNATURE,ANDFOODEVERYWHEREBYITSPOLLUTIONOPPORTUNITYMANYTHEIRULENCEAUREAUSDEPENDMAINLYONITSSTRENGTHOFTHETOXINSTHATANDINVASIVEENZYMES,STAPHYLOCOCCUSBOWELTOXINISTHE
3、MAINPATHOGENICTOXINPOISONING,ITMAY,INTHETHERMALSTABILITYOFHEATTREATMENTPROCESS,THUSMAINTAININGOREVENINCREASEACTIVITYAUREAUSONCEPOLLUTEDFOODANDAMIDPRODUCEDBOWELPOISON,USINGGENERALCOOKINGMETHODSWILLLIVEBACTERIAINACTIVATED,ALSOCANNOTAFTERINTESTINALBACTERIAELEMENTDAMAGE,MUSTBEHEATING100CONTINUETODISRUPT
4、ITSTOXICITY2HTHEHARMOFPRODUCTIONINGENERAL,COMPAREDTOMAJORPRODUCTIONOFELIMINATEORREDUCEAUREAUSANDBOWELPOISONHARMSOINPRODUCTIONPROCESSINGTOELIMINATENUTRITIONISRICHENOUGHMOISTURE,INORDERTOREDUCETHEENVIRONMENTAUREAUSANDBOWELPOISONTOFOODANDFOODRAWMATERIALSPOLLUTION【KEYWORDS】STAPHYLOCOCCUSAUREUS；BOWELPOIS
5、ON；FROZENSHRIMP。II目录1引言12材料与方法221试剂与材料222仪器设备223金黄色葡萄球菌培养方法及肠毒素检测方法2231金黄色葡萄球菌致病性研究2232肠毒素检测（ELFA）324操作步骤及方法4241细菌分离检验4242肠毒素中的毒素提取与检测43结果与分析531进口冻虾仁中金葡菌的检测532进口冻虾仁中金葡菌含量与肠毒素之间的关系633冻虾仁中部分金黄色葡萄球菌菌株的产肠毒素分析734模拟样品在不同温度和不同污染时间下的产毒分析735不同培养介质之间的产毒差异性比较84结论9参考论文91引言金黄色葡萄球菌（STAPHYLOCOCCUSAUREUS）以下简称金葡是动物和
6、人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在8，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多10。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒14。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100G的肠毒素A即可出现食物中毒的症状2。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜
7、在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100两小时才能破坏其毒性9。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌1。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的
8、爆发。金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染16，一般地，在PH6080、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险15。如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠
9、毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导作用22。金葡菌是一种重要的致病菌，当它污染食品后，在适宜的条件下会产生金黄色葡萄球菌肠毒素。因此，本实验拟调查研究冻虾仁中金黄色葡萄球的数量，按照国家标准方法GB/T478910检测并计数。同时采用MINIVIDAS的葡萄球菌肠毒素（SET）试剂盒提供的方法提取产品肠毒素，根据酶联荧光免疫分析原理检测是否污染肠毒素，研究金葡菌和肠毒素间存在的关系18。在虾仁中感染接种入金葡菌，初步研究
10、虾仁中金葡菌的产毒情况，包括培养时间和培养温度等条件的影响，为现实条件中的产品存放和安全食用供指导。22材料与方法21试剂与材料75氯化钠胰蛋白胨肉汤（北京陆桥）每一千ML中含酪蛋白胨170G，磷酸二氢钾25G大豆木瓜蛋白酶消化物30G，氯化钠50G，葡萄糖25G，去离子水1000ML。PH调剂。血琼脂平板（上海程嘉）每1000ML琼脂含酪蛋白胰酶消化物100G，心胰酶消化物30G，玉米淀粉10G，琼脂130G150G，肉胃酶消化物50G，酵母浸出粉50G，氯化钠50G，蒸馏水1000ML，兔血50ML70ML。BAIRDPARKER琼脂（北京路桥）BAIRDPARKER氏培养基每1000ML
11、成分胰蛋白胨10G，牛肉膏5G，酵母膏1G,丙酮酸钠10G,甘氨酸12G,氯化锂LICL6H2O5G,琼脂20G,蒸馏水950ML，将PH调至75，增菌剂的配法30卵黄盐水50ML与除菌过滤的1亚蹄酸钾溶液10ML混合，保存于冰箱内。制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25，校正PH。分装每瓶95ML，121高压灭菌15MIN。临用时加热溶化琼脂，冷至50，每95ML加入预热至50的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5ML，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48H。冻干血浆北京路桥VIDASSET2试剂盒生物梅里埃22仪器设备生化培养箱PSH300ROWSEN全自动
12、免疫荧光分析仪MINIVIDAS,法国生物梅里埃公司离心机802离心沉淀器上深入细致手术器械厂23金黄色葡萄球菌培养方法及肠毒素检测方法231金黄色葡萄球菌致病性研究金黄色葡萄球菌污染食物后，不仅使其腐败变质，而且部分细菌产生肠毒素，引起食物中毒。金葡菌具有多种蛋白质抗原，常用于食品检测的有葡萄球菌肠毒素和葡萄球菌A蛋白（STAPHYLOCOCCALPROTEINA,SPS）,葡萄球菌肠毒素是一组结构相关，毒力相近的胞外蛋白质，迄今为止从血清上已被鉴定的SE有10种A，B，C，D，E，G，H，I，J，K型，其中C型抗原又根据等电点的不同分为3个严型（C1，C2，C3），其中肠毒素A是分子量为2
13、7KD的单体蛋白，它是葡萄球菌食物中毒最常见的类型，D，B，C次之4。肠毒素可与相应的抗毒素特异性结合。因此，采用其中之一有可检测标记的，特异性的单克隆或多克隆抗体，与样品中肠毒素结合，结果可采用比色、放免、荧光检测，或采用凝集、沉淀等肉眼可观察的免疫学现象来判断肠毒素的有无。A蛋白存在于葡萄球菌的表面，具有种属特异性，无型别特异性，能与人与多种哺乳动物的免疫球3蛋白IGG和FC片段结合。因此可采用IGG包埋的乳胶颗粒，结合血浆纤维蛋白原与凝集因子的凝集反应，来检测金葡菌的有无。按照国家标准GB/T4789102008的附录B中，对金葡菌肠毒素的检测，采用的就是免疫学的方法用玻片双相琼脂扩散法
14、和酶联免疫分析法（ELISA）两个方法。新国家标准GB4789102010的附录B中则只保留了酶联免疫分析法（ELISA）的方法。两种方法的步骤都非常繁锁。玻片双相琼脂扩散法原理是用含有电解质的琼脂凝胶为载体，侃肠毒素和抗肠毒素在凝胶中相对扩散，当扩散的肠毒素和相应的抗毒素相遇，比例适当时，就形成肉眼可见的抗原抗体复合物沉淀物。此法灵敏度有限，需要肠毒素深度至少3060NG/G才能检出。因此需要先将食物样品经层析纯化和浓缩，以达到一定深度，才可进行琼脂扩散。酶联免疫分析法（ELISA）方法的原理是预先将肠毒素的抗体（单价或多价抗体）与载体吸附。当加入待检样品后，如样品中含有肠毒素，即可与之特异
15、性结合。再采用第二抗体（抗抗体）与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体抗抗体三层“夹心”结构，而抗抗体上标记有某种酶（如碱性磷酸酶、过氧化物酶等），最后加上该酶的底物使之显色。根据颜色深浅进行定性或定量检测。利用该方法的已经有多种商品化的试剂盒，提供已吸附单价或多家抗体的微孔板，以及阴性、阳性对照等。此法灵敏（05MG/ML），专一，操作简单而快速（约4个小时）。但其缺点是由相关抗原引起的交叉反应或内源性过氧化物干扰酶，肠毒素蛋白可能会凝集，而降低反应原性（仍保持毒性），造成假阴性。232肠毒素检测（ELFA）目前对于金葡菌肠毒素的研究检测方法，按照检测原理不同，可以分为五大类，包括生物学检测方法
16、、免疫血清学方法、聚合酶链反应技术、生物传感器技术及超抗原技术等5。VIDASSET2试剂盒是用自动化VIDAS设备进行酶联荧光免疫分析（ELFA）以测定葡萄球菌肠毒素。小型VIDAS检测金黄色葡萄球菌毒素肯有灵敏度高，特异性强，操作简单方便等优点。VIDAS食品自动完成全冲毁实验程序。将食物提取物加于试剂条上，样品将在SPR内定时循环，样品中的葡萄球菌肠毒素与包被在SPR内侧的抗葡萄球菌肠毒素单克隆抗体结合，未结合的样品则被洗去。抗体碱性磷酸复合物通过SPR循环并与SPR内壁上的任何肠毒素抗原结合，最后洗去未结合复合物。荧光底物（4甲基香琣素磷酸酯）在SPR内外反复循环，SPR上存留的酶催化
17、底物分解为荧光底物（4甲基伞形酮）。VIDAS的光扫描仪在450NM处自动测定荧光产物。试验结束时，计算机自动分析结果并打印报告，得出检测并与阈值比较，得出最终解释（阴性或阳性）7。该方法只需简单的提取后，VIDASSET2试剂盒可直接用于筛选食物中任何一种肠毒素的存在，实验室全自动化，80分钟可获得结果17。该方法可以弥补国家标准中的检测金黄色葡萄球菌肠毒素时的提取困难，试剂来源难，保存时间短，毒素检测样本少而导致试剂盒过期，操作繁等问题而无法检测此毒素的空白，弥补了用金黄色葡萄球菌计数来确定是否为此菌引起食物中毒过程中由于标本量太少及一些特殊改善标本而无法进行计数的缺陷。尽管目前用小型VI
18、DAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素还不能分型，但对判断此菌引起民的食物中毒的诊断起到简便操作并明示作用。424操作步骤及方法241细菌分离检验金葡菌的检测金葡菌能耐受1015的氯化钠，对温度适应强，最适温度3536度。多数能产生溶血素、血浆凝固酶，以及卵磷脂，热稳定核酸酶、磷酸酶、脲酶，还原亚碲酸钾、还原硝酸盐，发酵甘露醇产酸、触酶阳性、产生金黄色或柠檬色色素。2411金葡菌的定性检测金葡菌的检测根据GB/T487910方法来检测。样品接种。4氯化钠胰蛋白胨肉汤，培养后转接BAIRDPARKER琼脂和血平板。金葡菌在BAIRDPARKER平板上典型菌落为圆形光学的灰黑色菌落（因还原亚碲酸钾生产碲，
19、所以菌落呈灰黑色），直径13MM，边缘颜色较浅，周围有透明圈（因含卵磷脂酶分解培养基中的卵黄所致）。在血平板上典型菌落为圆形光滑的金黄色或者黄白色菌落。直径23MM，周围有溶血圈（因含溶血素所致）。血浆凝固酶试验将可疑菌落转接到营养肉汤中，培养物加入到14的兔血浆中36度放置26小时，试管中呈凝块者，为血浆凝固酶试验阳性，同时以阳性菌株及内分泌作为对照，血浆凝固酶试验采用商品化的北京陆桥公司生产的冻干血浆。可疑金葡菌进行镜检为革兰氏阳性球菌，直径081UM的不规则成堆排列，类似葡萄串，无芽孢。挑平板上的可疑菌进行血浆凝固酶实验并进行VITEK生化鉴定。报告样品中是否含带金黄色葡萄球菌19。24
20、12虾仁产品中的金葡菌的定量检测取25G样品于225ML生理盐水中稀释均匀，并取该1ML十倍稀释液涂布于BAIRDPARKER琼脂平板培养48小时进行可疑菌的计数及鉴定，可疑菌的判断同上。可疑菌同时分离纯化，接种于血平板上，并进行VITEK生化鉴定。根据结果报告样品的金黄色葡萄球菌含量（CFU/G）20。242肠毒素中的毒素提取与检测毒素提取后采用酶联免疫荧光分析方法，用全自动免疫荧光分析仪（MINIVIDAS）检测。提取的方法生肉、海产品与熟肉1称取25克的样品加入25ML蒸馏水。2反复混匀以得到均匀悬液，如悬液过稠，再加25ML蒸馏水混匀。3回收全部的提取液。4使用5的盐酸调整PH值至40
21、。51825摄氏度静置1530分钟。6将悬液1825摄氏度，30005000转，15MIN离心。57使用1氢氧化钠调整滤液P至7580之间。取05ML离心上清液作为毒素样品，放入VIDASSET2试剂条的样品孔中，测定肠毒素。80MIN后自动出结果。判断肠毒素有无及其强弱程度。3结果与分析31进口冻虾仁中金葡菌的检测宁波口岸一年四季常年有块冻虾仁报检出口，为了观察一年四季中金黄色葡萄球菌含量波动是否明显，实验室在2008年底至2009年底间四个季度对进口金葡菌虾仁结果计数进行了普查6。结果如表1所示。表1块冻虾仁的金黄色葡萄球菌带菌量情况TABLE1THEQUANTITYOFSTAPHYLOC
22、OCCUSAUREUSINFROZENSHRIMP季节取样时间样品编号金葡菌数量（CFU/G）平均菌量冬天200812110202008122302008123202008124302009155020091610200917302009182020091910春天20094110402009421020094350200944202009554020095680200957502009581020095960200971100200972806夏天20097310402009742020098510200986502009872020098850秋天200910120302009102302
23、00910310200910410200911510200911650200911780200911890从表1中可以看出，四个季节中，块冻虾仁普遍携带金黄色葡萄球菌，而且金葡菌含量基本持平，差异不明显。在严冬季节仍然有检出金黄色葡萄球菌，因此在容易为人忽略的冬季仍不能忘记对生产加工过程的监控，防止金葡菌的系列及后续的产肠毒素过程。32进口冻虾仁中金葡菌含量与肠毒素之间的关系为摸清进口块冻虾仁中金葡菌的数量和是否存在肠毒素，对报检的样品同时进行这两项目检测。在每年的5月份和7月份这两个气温较高的月份中，实验选取了7个块冻虾仁样品的比较检测。其结果如表2所示。表2进口虾仁的金黄色葡萄球菌数和肠毒
24、素之间的关系TABLE2THERELATIONSHIPBETWEENSTAPHYLOCOCCUSAURESUANDBOWELPOISONINSHRIMP样品分类肠毒素VIDAS结果金葡菌数10CUF/G阴性金葡菌数20CUF/G阴性金葡菌数40CUF/G阴性金葡菌数80CUF/G阴性金葡菌数100CUF/G阴性金葡菌数100CUF/G阴性金葡菌数150CUF/G阴性从表2可以看出，块冻虾仁中金黄色葡萄球菌带菌量在10CUF/G至150CUF/G之间，而其肠毒素检测结果均为阴性。7这结果可能与块冻虾仁的生产工艺及其经历的环境温度和时间相关，A型肠毒素在金葡菌的生长对数期较多，在静止期，休眠期间不
25、产毒；B型肠毒素在对数生长末期开始，即在对数生长期到生长静止期最多。尽管食物中毒和细菌的数量有一定关系，但是少量的金黄色葡萄球菌在适宜的条件下产毒所产生的肠毒素，仍可以引起中毒，所以要加强食品生产的卫生管理。33冻虾仁中部分金黄色葡萄球菌菌株的产肠毒素分析一般来说，金黄色葡萄球菌中，并非所有菌株均能产肠毒素。为了确定从虾仁中分享的金黄色葡萄球菌是否都为产毒菌株，随意选取几株从块冻虾仁中分享出的金黄色葡萄球菌菌株，接入营养肉汤，培养1618小时，检测培养液中的肠毒素情况。结果如表3所示。表3金黄色葡萄球菌菌株的产毒情况TABLE3STATUSOFSAMPLESHRIMPSECRETEDBYSTA
26、PHYLOCOCCUSAUREUS金葡菌菌株编号肠毒素产生1阳性2阳性3阳性4阳性5阳性6阳性从表3可以看出，分离出来的部分金黄色葡萄球菌菌株均为产毒菌株，为阳性结果，产毒力达100。分析出现这种情况可能原因是产生肠毒素的金黄色葡萄球菌比一般的葡萄球菌抵抗力更强，不易被杀死，不易被破坏，又能在自然界中存活数月，也可能和样品的局限性有关。因此在实际生产和样品保存过程中，金黄色葡萄球菌污染存在的几率很高，随之而来的菌株产肠毒素的几率也非常高，所以要注意样品的低温生产和保存。34模拟样品在不同温度和不同污染时间下的产毒分析选择一株产肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株，在血平板上过夜培养。刮取血平板上的纯菌菌
27、苔，制成适当麦氏深度的菌悬液，进行系列稀释，选择适当深度的稀释度进行平板计数实验，计算原麦氏浓度菌悬液的金葡菌浓度（CFU/G）。表4样品在不同温度及不同时间培养产肠毒素结果TABLE4ARESEARCHOFHRIMPSAMPLESATDIFFERENTTINESANDTEMPERATURESSECRETEDBOWELPOISON温度产毒结果1H3H6H9H24H28H10D83/阴性阴性阴性阴性/20室温/阴性阴性阴性阴性弱阳性/30阴性阴性阴性阴性弱阳性阳性/18/阴性，未检出菌按实验要求，以最后每小份样品为约50克计算，称取适当重量的冷冻虾仁样品，并以最后能达到每克虾仁样品中200CFU
28、/G计算，移取相应体积的菌悬液，加约510ML无菌无理盐水，用无菌喷雾器对虾仁样品进行均匀污染，并将虾仁样品搅拌均匀，分装成小袋，按照各个温度所要求大约份数分堆。13实验按照20室温，3低温，30和18四个温度来进行，污染样品培养时间从早上900开始。实验结果如表4所示。从表4可以看出，气温越高，越适合金黄色葡萄球菌生长，产肠毒素越快。在20室温培养时，产毒从28小时左右开始，在30的培养时，时间略早于20培养，为24小时弱阳性。并且这些冻虾仁样品尽管后面已经产毒，但是已经失去使用价值，有明显异味。对于冷冻的样品，在第10天时，金黄色葡萄球菌已经死亡，未检测出金葡菌，并且未检出金黄色葡萄球菌毒
29、素。在3储存的虾仁样品，经过前处理和后面的近1天多时间，也几乎失去样品的良好形态。因此，在实际生产中，尽量将环境温度降低一点，使金黄色葡萄球菌失去赖以生存并产毒的良好环境，并且要养活样品在室温和高温环境下的暴露时间，剥完虾之后尽快进行冷冻处理，不仅能有效防止肠毒素的产生还减少金葡菌的繁殖，提升产品质量。35不同培养介质之间的产毒差异性比较为观察金黄色葡萄球菌在几个不同介质中的产毒情况，实验设计了在一般常用营养肉汤培养基和目标样品中产毒实验。结果如表5所示。表5金黄色葡萄球菌在不同介质中的产毒情况比较TABLE5DIFFERENTRESULTSOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSSECR
30、ETBOWELPOISONINDIFFERENTMEDIUMS培养介质培养时间16H24H28H营养肉汤强阳性/污染虾仁样品阴性阴性/弱阳性阳性从该表5可以推断，营养肉汤因其富含糖类和蛋白质，所以金黄色葡萄球菌在营养肉汤中生长较快，产毒较快。而虾仁样品尽管也富含蛋白质等营养物质，并且水分含量丰富，但相较肉汤营养略逊一筹。9食物的性质和组成成分与金黄色葡萄球菌生长繁殖以及产生肠毒素的程度也有密切关系，一般说来，在PH6080，水分含量较多，蛋白质或淀粉比较丰富的食品中，该菌比较容易系列并产生肠毒素，因此样品一旦被金黄色葡萄球菌污染，只要遇到适宜的温度和足够的时间，就会大量繁殖并产生肠毒素，严重威
31、胁产品质量和信用者的安全。块冻虾仁具备金黄色葡萄球菌繁殖和产毒的主要条件。因此在实际生产加工中，还应该保持一个低温并且干净的环境，不让虾仁比较久堆放在一个地方，地面也常以流水冲净，避免有积水，避免有死水，杜绝形成一个营养丰富的水体环境，杜绝形成产毒条件。4结论金黄色葡萄球菌是人和动物化脓感染很常见的致病菌。当金葡菌污染了富含营养和水分的食品之后，在适宜的温度和充足的时间下，就能大量繁殖，甚至产生金黄色葡萄球菌肠毒素，从而引起食物中毒。经过实验可得，一年四季中，虾仁中金黄色葡萄球菌数量基本持平，变化不大。在环境温度较高的夏季，对原样品肠毒素进行抽检，结果均为阴性。但从中分离出的菌株均为产肠毒菌株
32、，产毒力100。研究结果表明，在生产过程中，控制较低的环境温度，可以避免金葡菌的快速繁殖；生产时，尽快将虾仁快速冷冻，避免长时间堆放；保持环境整洁，杜绝形成一个可供金葡菌繁殖的环境，有助于预防和控制金黄色葡萄球菌对食品和食品原料的污染。参考论文1胡荣华，徐景野，速冻食品中金黄色葡萄球菌污染调查及存活观察J中国食品卫生杂志，2002，VOL14,NO4,37382向阳，食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测方法J，中国食品学报，2002，VOL2,NO23刘雪云，武海燕，陆峥等，速冻食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的调查研究J，中国卫生杂志，200312，VOL13,NO24王小红，谢笔钧，史贤明，食品中
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34、萄球菌肠毒素BJ,中国食品卫生杂志，10313510SMORANDI,MBRASCA，RLODIETAL，DETECTIONOFCLASSICALENTEROTOXINSANDIDENTIFICATIONOFENTEROTOXINGENESINSTAPHYLOCOCCUSAUREUSFROMMILKANDDAIRYPRODUCTSSMORANDIETAL/VETERINARYMICROBIOLOGY1242007667211NINAWALLINCARLQUIST,DRAMRTA,ELISABETHBORCH,PETERRDSTRM，PROLONGEDEXPRESSIONANDPRODUCTIO
35、NOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSENTEROTOXINAINPROCESSEDPORKMEATINTERNATIONALJOURNALOFFOODMICROBIOLOGY1412010697412MARCELLEVIANNADECARVALHOUHL，RICARDOJOSEBOTTECCHIA，JULIANAAZEVEDOSILVAETAL,SUITABILITYOFARECOMBINANTSTAPHYLOCOCCUSAUREUSENTEROTOXINCBOVINEVARIANTFORIMMUNODIAGNOSTICSANDTHERAPEUTICVACCINEDEVELOPMEN
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