1、细胞因子与病理过程,中国医科大学病理学教研室王恩华,细胞因子cytokines,concept：是由细胞产生和分泌的低分子量的多 肽类介质effect：参与调节细胞生长、分化、器官发育; 炎症、免疫、肿瘤、损伤、修复等许多病理及生理过程来源： 血管内皮细胞、WBC（中性、单核巨噬细胞、LC）、纤维母细胞、神经组织、 平滑肌细胞、软骨组织、肿瘤细胞等,1.白细胞介素类 interleukins ILs2.集落刺激因子类 colony stimulating factors CSFs3.肿瘤坏死因子类 tumor necrosis factors TNFs4.淋巴因子类 lymphokines5.
2、化学趋化因子类 chemotactic factors6.生长因子类 growth factors7.细胞粘附因子类 cell adhension molecules总之：几乎所有组成多细胞间复杂的生物信号语言中的各个元件，均属此范畴,Classification,细胞因子：autocrine(自泌)paracrine(旁泌) 在局部起作用激素：endocrine(内分泌)、经血到远隔器官起作用相同点：细胞产生、分泌，作用受体，放大作用,细胞因子与激素的运行机制不同,举例 局部损伤、细胞产生因子、只对局部细胞产生影响，如象激素一样入血，对全体细胞都产生影响，就麻烦了。细胞因子种类很多，作用广泛
3、，与细胞外基质也有着密切的联系，下面仅就常见的细胞因子作以简介,Wnt通路中的关键分子与肺癌侵袭转移,王恩华中国医科大学,研究背景 1,在中国肺癌的发生率在过去的30年里 上升了465%，死亡率居恶性肿瘤之首每年死于肺癌的患者约45万人，其中约有40万人死于肺癌的转移因此揭示肺癌侵袭转移的分子机制和寻找治疗关键靶点，具有重要意义,研究背景 2,Wnt通路中的关键分子GSK-3B、APC和B-catenin与肿瘤侵袭转移的关系已有较多报道，而位于其上游的DVL和Axin是如何调控肿瘤侵袭转移的则少有报道与B-catenin同一家族的p120ctn是否与Wnt通路有关尚不清楚已有报道p120ctn
4、能与Kaiso结合，而Kaiso只有入核信号，没有出核信号，那么p120ctn是否具有调节Kaiso核浆分布的作用，进而影响肿瘤的侵袭转移尚无报道,-catenin在正常支气管上皮细胞表现为膜表达，而在 NSCLC 中主要表现为细胞浆或核内的蓄积，这种蓄积与NSCLC 的低分化和淋巴结转移相关,1. Axin对NSCLC中-catenin蓄积所起的作用,我们用SSCP和直接测序法检测了100例NSCLC 中-catenin第三外显子突变情况，结果发现-catenin 的第三外显子无一例突变 Am J Clin Pathol. 2006, 125(4):534-541,是什么原因造成了-cate
5、nin 在肺癌细胞中的蓄积？,我们发现Axin在NSCLC中的表达明显下调,Axin的表达下调与NSCLC的不良预后明显相关,转染Axin可明显抑制肺癌细胞的侵袭转移和增殖能力,过表达Axin可使肺癌细胞中高表达的-catenin出现明显下调,我们猜测：Axin的表达减少可能是导致-catenin在NSCLC中蓄积的原因之一 Ann Surg Oncol 2007, 14: 3251-9,我们将新鲜的NSCLC组织经1 gray X-ray照射后发现Axin的蛋白和mRNA均出现了明显的上调，同时Caspase-3的表达也出现了明显的上调,既然Axin有如此明显的抑癌作用，如何上调Axin的表
6、达呢？,因此， X-ray是否能上调Axin的表达及水平是判定NSCLC是否对X-ray治疗敏感的有用指标,X-ray 照射或转染Axin都能上调肺癌细胞的凋亡率，转染Axin加上X-ray照射可使凋亡率明显增加,Axin诱导细胞凋亡的机制是什么？转染Axin或不与p53结合的-Axin，再用p53抑制剂PFT-或JNK抑制剂SP处理,结果发现Axin通过p53和/或JNK通路促进肺癌细胞凋亡 Int J Radio Oncol 2009,我们意外地发现：过表达Axin可以下调TCF-4的转录，但机制不清,已有文献报道：-catenin具有促进TCF-4转录，而p53具有抑 制TCF-4转录的
7、能力 而Axin既具有下调-catenin的能力，又有激活 p53的能力因此，Axin既有可能是通过-catenin，也有可能是通过p53下调TCF-4的转录,我们为了探讨这个问题，构建了Axin不能与-catenin结合，Axin不能与p53结合，以及Axin既不能与-catenin也不能与p53结合的突变体,转染Axin在下调-catenin 表达的同时可明显下调TCF-4的表达，但转染Axin -ca即保留了p53作用时却不能下调-catenin和TCF-4，但由于BE1细胞系是p53突变型细胞系，因此尚不能确定Axin是否具有通过p53下调TCF-4的作用因此，我们向BE1细胞中转染了
8、野生型p53，结果显示单纯转染野生型p53可以下调TCF-4，但共转染Axin -ca和p53后TCF-4并没有出现进一步下调，表明Axin并不能加强p53下调TCF-4的作用,Mol Cancer. 2010 Feb 2;9:25.,二、DVLs对Wnt通路的调节作用 非小细胞肺癌组织中存在DVL-1和3的过表达，其表达与高TNM分期、低分化有关,Dvls在淋巴结转移灶中的表达总是高于原发灶Dvl-1 和Dvl-3的过表达与非小细胞肺癌的不良预后相关,Lung Cancer (2008) 62, 181192,我们发现：过表达Dvl-1可以明显的上调-catenin的蛋白水平，同时激活TCF
9、-4依赖的转录活性，表明Dvl-1主要参与经典的Wnt通路而过表达Dvl-3却不能明显上调-catenin水平和TCF-4依赖的转录活性但无论过表达Dvl-1还是Dvl-3均能明显增强肺癌细胞的侵袭转移能力,我们发现：转染Dvl-3能明显上调肺癌细胞中磷酸化的 JNK和p38水平,那么Dvl-3是怎样促进肺癌细胞侵袭转移的呢？,Molecular carcinogenesis (2010 ),并且明显下调RhoA的活性,上调Cdc42和Rac1活性,由于小GTP酶活性和JNK、p38均与非经典的Wnt通路有关，因此我们可以得出如下结论：Dvl-1主要通过经典Wnt通路而Dvl-3主要通过非经典
10、Wnt通路促进肺癌细胞的侵袭和转移,我们发现：过表达DVL-3上调p120mRNA水平,但是转染Dvl-1却不能,转染Dvl-3可以增加Pax6的表达,无论是应用Pax6的单克隆抗体阻断，还是用siRNA敲出Pax6，都可以明显的下调p120ctn的转录,ChIP分析证实了转录因子Pax6可以直接与p120ctn的启动子区结合,上述结果说明：Dvl-3调节Pax6，而Pax6又与p120ct的启动 子区作用，进而启动了p120ctn的转录 但Dvl-3是如何上调Pax6的尚不清楚,上述结果提示我们p120ctn通过Dvl-3与Wnt通路联系p120ctn与Wnt 通路之间还存在哪些联系呢？,3
11、. p120ctn 在肺癌侵袭和转移中的作用，及其 与Wnt通路的联系,p120ctn在肺癌中的异常表达及意义,P120ctn的异常表达与低分化，高TNM分期，淋巴结转移及不良预后相关 Histol Histopathol 2006, 21:841-847 APMIS 2007, 115: 84856,肺癌中p120ctn-1A、3A和E-cadherin的表达下调与small GTP酶过表达相关,Lung Cancer 63 (2009) 375382,敲除p120ctn后，Pulldown结果证实cdc42、Rac1活性增强，但RhoA活性下降,E-cadherin的蛋白表达下降,敲除p1
12、20ctn后S期细胞比例增加、侵袭和转移能力增强,Cancer Sci 2009 , 100:441448,过表达p120-1A下调Rac1活性而过表达p120-3A下调Cdc42活性,p120ctn-1A 和 3A都可抑制肺癌细胞增殖、侵袭和转移 但是p120ctn-1A 抑制肺癌细胞侵袭转移的能力强于3A而p120ctn-3A 抑制增殖的能力明显强于1A,Exp Cell Res 2009, 315: 890-898,我们发现：,转染 p120-1A可以明显的上调 -catenin的蛋白和mRNA的表达,我们得出以下结论: p120ctn-1A通过-catenin 与 Wnt通路关联,用s
13、iRNA 敲出p120ctn后-catenin 的蛋白和mRNA水平出现明显下调,Kaiso是如何出核的？,4. Kaiso 在肺癌侵袭转移中的作用,Kaiso 过表达与NSCLC不良预后相关,BMC Cancer. 2009, 9: 178,无论是在肺癌原发灶和淋巴结转移灶中，Kaiso 和p120ctn总是呈现同样的表达部位,免疫共沉淀证实，无论在肺癌组织还是细胞系中，Kaiso和p120都可以形成复合体,干扰p120后Kaiso核内增多，核浆蛋白分离进一步验证Kaiso在核内分布增多,说明：p120无论在细胞浆还是在核内，都能与Kaiso结合,转染p120ctn-3A，Kaiso和p12
14、0ctn主要为浆表达LMB阻断p120ctn出核则p120ctn和Kaiso主要位于核内转染p120-NLS-3A入核序列质粒则p120ctn位于核内，Kaiso也位于核内,我们得出结论：p120ctn-3A影响Kaiso的核浆分布，Kaiso的出核 依赖与p120ctn-3A的存在,Exp Cell Res (revised),结论：,Axin、 DVL、 p120ctn、Kaiso在肺癌侵袭转移中发挥着重要的调控作用-catenin在NSCLC中蓄积是由于Axin表达下调 所致，过表达Axin或用X线照射肺癌组织上调Axin的表达，都可明显抑制肺癌的侵袭转移，促进肺癌细胞凋亡P120与Wn
15、t通路中的关键分子Dvl-3和-catenin相关Kaiso是通过与p120-3A结合被携带出核的,Published ariticles (directly relative),1. Axin downregulates TCF-4 transcription via beta-catenin, but not p53, and inhibits the proliferation and invasion of lung cancer cells. Mol Cancer. 2010 Feb 2;9:25. 2. Cytoplasmic Kaiso is associated with po
16、or prognosis in non-small cell lung cancer. BMC Cancer. 2009 Jun 9;9:178. 3. Kaiso is expressed in lung cancer: its expression and localization is affected by p120ctn. Lung Cancer 2010, 67(2):205-215. 4. X-ray induces non-smal cell lung cancer apoptosis by up regulating Axin expression. Inter J Rad
17、Onc. Biol. Phys. 2009,75(2): 518-265. Ablation of p120-Catenin Enhances Invasion and Metastasis of Human Lung Cancer Cells. Cancer Sci. 2009, 100(3):441-448. 6. Abnormal expression of p120-catenin, E-cadherin, and small GTPases is significantlyassociated with malignant phenotype of human lung cancer
18、. Lung cancer. 2009, 63:375-382. 7. P120-catenin Isoforms 1A and 3A Differently Affect Invasion and Proliferation of Lung Cancer Cells. Exp cell res. 2009, 315(5):890-898.,8. Dishevelled family proteins are expressed in non-small cell lung cancer and function differentially on tumor progression. Lun
19、g Cancer .2008;62 (2): 181-19 9. Reduction of p120(ctn) isoforms 1 and 3 is significantly associated with metastatic progression of human lung cancer. APMIS. 2007, 115(7):848-56. 10. Overexpression of Axin Downregulates TCF-4 and Inhibits the Development of Lung Cancer. Ann Surg Oncol. 2007, 14(11):
20、3251-9. 11. Abnormal beta-catenin and reduced axin expression are associated with poor differentiation and progression in non-small cell lung cancer. Am J Clin Pathol. 2006, 125(4):534-541. 12. Abnormal expression and clinicopathologic significance of p120-catenin in lung cancer. Histol Histopathol.
21、 2006, 21(8):841-847. 13. Expression of T cell factor-4 in non-small cell lung cancer. Chin Med J . 2005, 118(2):136-40. 14. Connexin 43 recruits E-cadherin expression and inhibits the malignant behaviour of lung cancer cells. Folia Histochem Cytobiol. 2008;46(3):315-21. 15. Expression of serine thr
22、eonine kinase 15 is associated with poor differentiation in lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma. Pathol Int. 2006, 56(7):375-380.,是由细胞产生或分泌，对细胞生长，分化等具有显著调节作用的多肽目前已发现的生长因子已有50多种，并有新的因子的报道，其中部分生长因子的结构与生物学活性已基本搞清，有的已商品化，并在临床上得以应用,一、生长因子growth factor,意义 对各类生长因子的广泛深入的研究，将有助于人类对胚胎发育、组织与器官的形成等基
23、本生物学问题的认识（如干细胞）同时对肿瘤，血管疾病的诊断治疗以及对创伤修复技术的提高等都将产生巨大的影响,（一）生长因子分类 生长因子种类繁多，来源复杂，结构各异，生物学作用与其它细胞因子间又有交叉，因此，单靠一种分类方法是不足以反应生长因子的本质和作用机制的。目前的分类方法有以下几种,1.根据生物学效应细胞生长促进因子细胞生长抑制因子生长抑素注意 同一种生长因子，对不同的组织细胞或同一种组织细胞的不同生长阶段，可有相反的作用 如转化生长因子（TGF-）早期纤维母细胞生长，晚期起抑制作用，对细胞的增殖既有促进又有抑制,2.根据理化特性单链多肽表皮生长因子EGF含糖链的多肽二聚体蛋白PDGF糖蛋
24、白集落刺激因子CSF和白细胞介素IL,3.根据其作用细胞类型 单价因子一种因子只作用于一类细胞 多价因子一种因子可作用于不同类型细胞,4.按其作用效果增殖因子IL-2、IL-3、GM-CSF、BCGF分化因子IL-2、IL-3、BCGF、IFN效应因子TNF,（二）生长因子作用的靶细胞范围 随着对各类生长因子的认识不断加深，发现生长因子的作用和作用范围都较原来发现时广得多，宽得多举例 在免疫细胞中分离出来IL-I，起初认为是调节免疫系统的信号分子，后来发现，还对角质细胞、f母细胞，星状细胞，软骨细胞有作用,另外 从非免疫细胞中分离出来的转化生长因子TGF-却有着很强的免疫调节作用，在抑制T细胞
25、功能上要比环孢霉素至少强10倍。同时也有很强的抑制B细胞合成免疫球蛋白的作用。因此，它是在器官移植方面，一个非常好的生物制剂,（三）生长因子作用的处境依赖性 生长因子的作用及作用强度是视其周围环境条件而定的，即依赖于受体和其它效应分子的存在举例TGF-在EGF存在时，对f母细胞的生长起抑制作用TGF-在PDGF存在时，对f母细胞的生长起促进作用另外TNF在IL-1和TGF-存在时才发挥作用因此要辩证地看待生长因子作用的广泛性、可变性,（四）生长因子与原癌基因产物的关系 绝大多数原癌基因产物已被证明都是与细胞生长，增殖、分化有关的蛋白质。现已搞清，生长调控基因与原癌基因，在很大程序上就是一回事举
26、例 sis基因表达产物与PDGF的B链有92%的同源性，erbB基因产物与EGF受体高度同源所以，在一定程度上讲，癌蛋白就是生长因子、受体、细胞内信号转导因子或DNA结合蛋白,（五）生长因子的临床应用 生长因子参与了炎症、血管新生、损伤修复和肿瘤的发生发展。在肿瘤形成中起关键作用的生长因子，在炎症、损伤修复中，却是一种正常的反应性的生理表达，这种表达也是至关重要的,目前应用TGF-用于抑制免疫反应和排斥反应bFGF用于抑制肿瘤内血管形成GM-CSF用于再障或放化疗后 几乎每种生长因子都可用基因重组方法生产，未来的10年将是生长因子从基础到临床过渡的10年,几种常见的生长因子：1.血小板源生长因
27、子 platelet-derived growth factor PDGF，最初是在血小板中发现的一种促分裂剂1)这一名称不够准确，因为血小板可产生许多生长因子,血管内皮细胞生长因子vascular endothelial growth factor，VEGF表皮生长因子epidermal growth factor，EGF转化生长因子transforming growth factor-，TGF-,2）另外，许多细胞都可产生PDGF如VSMC、表皮细胞、皮肤f母细胞、肿瘤细胞PDGF分子量为28-35KDa，由A、B两条链组成，B链与sis原癌基因编码蛋白有92%同源性体内存在形式：PDGF
28、-AA PDGF-BB PDGF-ABA链与A受体结合B链即能与B又能与A结合购买抗体时应注意实验的组织或细胞上是否存在被检受体,生物作用诱导细胞增殖，是一种强促有丝分裂剂趋化作用，引起间充质细胞、单核细胞、中性粒细胞，定向迁移及释放颗粒引起-型胶原的合成和分泌，调节细胞外基质,PDGF的临床意义1)创伤修复创口处血小板沉积PDGF中性WBC、单核/巨噬C内移清除异物cap f母细胞、SMC内移、增生肉芽填补伤口cap f母细胞、SMC释放PDGFC.T增生、增加胶原沉积愈合,举例 Knighton采用病人自身血小板释放物质（PDGF），处理因糖尿病出现的难愈合的皮下溃疡，使濒于截肢危险的溃疡
29、得到了愈合,2)动脉粥样硬化形成及血管再狭窄动脉内皮细胞 血小板增殖内膜增厚SMC收缩型分泌型胶原沉积硬化PTCA血管移植,PDGFVSMC游走分裂,PDGFSMC游走、增殖再狭窄,restenosis,设想用单克隆抗体中和局部产生的PDGF在动物及细胞培养上获得成功，但用于人体，给药途径受到限制antisense RNA局部转染，可以研究探讨抑制疤痕形成中和抗体和反义RNA技术等,但应注意 PDGF的作用，不是孤立的，它是在其它细胞因子和生长因子也参与细胞反应的复杂环境中发挥其作用的，也就是说，抑制了PDGF的作用只是一个方面，而其它的因子仍然在起作用，在判定实验结果时，要综合进行考虑,2.
30、纤维母细胞生长因子 fibroblast growth factor 最初是在脑和垂体中发现，对纤维母细胞有促分裂作用而命名的。FGF本身种类繁多，由于制备方法和来源不同给予许多特殊命名，因此，极易混淆。如肝素结合生长因子等。多数人认为，按其等电点分为两类比较合适，即aFGF和bFGF,FGF与原癌基因hst，int-2编码的蛋白有很大同源性来源f母c，血管内皮C、SMC，粒C，肾上腺皮质C、星形胶质C，肿瘤细胞等,生物作用强的血管生长因子，诱发新生cap作用促进创伤愈合和组织修复参与胚胎发育和分化刺激外周神经再生和营养神经的作用调节内分泌的作用,FGF的临床意义创伤愈合FGF用于治疗胃溃疡方
31、面的尝试最多，但由于FGF不稳定，全身投与很难达到胃溃疡部位，直接口服由于胃酸的破坏使其作用大大减弱办法：FGF可与肝素结合，不仅稳定，且耐酸、耐热，可获较好的效果,肿瘤治疗实体肿瘤无一例外均能产生FGFautocrineautointra-factorparacrine血管生长,自身增殖,举例利用bFGF单抗中和FGF，达到对肿瘤的治疗，在动物体内获成功苏拉明阻止bFGF与受体结合，达到了对肿瘤的抑制,设想用人的bFGF单抗和受体单抗，结合介入局部给药，或放入支架制成缓释剂结合介入，局部给予反义RNA-基因治内皮支架基因表达,促进侧枝循环的形成 大面积心梗最令人担心的是猝死，但经抢救免于一死
32、，也担心心脏破裂或室壁瘤的出现。如何加强梗死部位的强度，最好的方式就是能尽快机化。而bFGF是一种强的新生Cap生成因子。国外在狗模型中证实给梗死部位血管内注入bFGF，很快使梗死面积缩小，组织学上有较多的侧枝循环的出现。说明FGF用于治疗心梗方面可望成为可能,血管再狭窄PTCAbFGF PDGFSMS增生restenosis设想：狗+介入球囊心梗模型、冠状血管狭窄模型放置注入bFGF心梗缩小 注入bFGF抗体狭窄减轻反义RNA周围神经再生 脊髓损伤+bFGF 促进神经纤维膜细胞生长，轴突长入,3.表皮生长因子 epidermal growth factor EGF 是一个较早被发现的生长因子
33、，EGF基因与V-mos原癌基因有部分同源性，EGF受体基因与erbB-1基因有75%以上同源性，在人体主要存在于各种体液或分泌物中，促进愈合，其中前列腺液、乳液中最高。除表皮细胞外，对许多细胞都有促进生长作用,应用细胞培养培养液中加入EGF角膜损伤修复：在动物角膜上早获成功，将EGF制成点眼液，使角膜烧伤无法愈合，只留光感的患者，几周后恢复正常,皮肤创伤愈合1)植皮病人，加用EGF明显达到了促进创面愈合的目的2)EGF体外培养自体表皮或表皮细胞，繁殖到一定数量后，将培养好的表皮植入创面，或将培养的表皮细胞象播种一样撒在创面，不仅加快愈合，也减少了疤痕产生,二、白细胞介素interleukin
34、s 为淋巴因子家族中一类，是联系白细胞间相互作用的细胞因子。共有18种，IL1-13研究的比较多，IL14-18是最近才被命名的主要生物学作用：1.参与免疫反应 在移植物排斥反应、哮喘疾病发生、肿瘤免疫中均起重要作用它们的作用相互协同而加强如IL-1 BC增殖、分化、产生抗体 TC产生IL-2及IL-2受体 IL-4,5 可协同加强IL-1对BC的作用,2.参与炎症反应IL-1 使机体发热，外周WBC升高，促进内皮细胞表达粘附分子，增进WBC与之粘附IL-8 是中性WBC趋化因子和激活因子 IL-12 是T、NK细胞等免疫效应细胞的促进因子，具有抗寄生虫、病毒和细菌和抗肿瘤等功能,3.参与损伤
35、修复 IL-1 与酸性FGF有同源性，促进血管新生 IL-2 可使f母C数量增加,4.抗肿瘤作用 IL-12 使NK细胞激活 使CD8+T细胞细胞毒淋巴细胞CTL 这已在IL-12转基因动物研究中得到证实IL-2 使T细胞淋巴细胞激活的杀伤细胞 LAK细胞 从外周血分离TC、经IL-12、2作用后， 回输给病人抗 肿瘤作用,白细胞介素功能很多，作用极强，相互间有重叠，诱导交叉，协同和拮抗，需要进一步研究的方面较多，但抗病毒、抗肿瘤和免疫调控作用是肯定的。目前，绝大多数IL可用基因工程方法生产，相信不久将广泛用于临床为人类造福,三、细胞粘附分子 cell adhension molecules
36、CAMSConcept:是一群在多种细胞上表达，介导细胞间 粘附和具有传递信息作用的糖蛋白物质分为以下5类钙离子依赖型蛋白家族cadherin family CF 主要参与特定组织和器官细胞间粘附，胞内段与细胞骨架联结，因此较牢固,可以想象：如肝细胞间无此种粘附，就不会有肝这个器官，肝C将分布周身癌细胞：如果CF粘附表达下降，就会出现浸袭和转移,2.整合蛋白家族integrin family, IF IF多为跨膜结构的受体型糖蛋白，主要参与细胞间，细胞与外基质间的粘附和信息传递,3.免疫球蛋白超家族 immunoglobulin super family IgSF 免疫细胞间粘附的分子某些细胞
37、因子受体（如PDGF受体） 主要组织相容性抗原（MHC）作用免疫调控细胞间信息传导器官移植排斥反应,均属IgSF,4.选择蛋白家族selectin family SF SF是一类高糖基化，单链膜糖蛋白参与细胞间 选择性识别，粘附作用 淋巴细胞“归巢”homing WBC向炎症部位移动 肿瘤浸润转移肺癌易肾上腺、脑甲状腺癌、肾癌、前列腺癌骨等可能与此处的血管内C的SF有关,5.其它CAMs尚未分类的CAMs 其中，CD44、Catenin倍受重视它是淋巴细胞“归巢”受体指导LC特异的“归巢”向炎症组织移动、定位与肿瘤浸润转移有关,研究热点 心、脑外科，急诊、麻醉器官移植等多脏器的缺血再谈注损伤中
38、，粘附分子起重要作用。使中性WBC与血管内皮C，心肌细胞的粘附造成损伤 应用粘附分子单抗、阻断这一损伤，收到了一定疗效,巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-TC产生的淋巴毒素，命名为TNF-而巨噬细胞是产生TNF的主要细胞TNF的生物学效应较多，如炎症、坏死等，但最引人关注的是抗肿瘤，无论是在体内，还是体外，都有很强的杀伤或抑制肿瘤生长作用,四、肿瘤坏死因子 tumor necrosis factor, TNF,以前生产的TNF主要问题是副作用太大如休克等，目前美国、日本等采用重组人的TNF已进入二期临床我国也已能生产重视人的TNF临床应用表明：对大多数晚期肿瘤患者，具有客观疗效,五、细胞因子的
39、检测方法1.体液中的生化法、提纯、定量、比较难 放免法可尝试免疫PCR法，抗体上联无关的DNA片段扩增2.免疫组化法 定位、半定量或Image Analysis Syston 或流式细胞仪定量3. Western blot 蛋白定量4. RT-PCR法测mRNA 5. 原位杂交 cDNA探针or RNA探针6Northern杂交测RNA7PCR-SSCP或PCR后测序，查点突变8. 基因芯片和组织芯片,思考题1.何为细胞因子，细胞因子都包括哪些？2.细胞因子与激素的作用有何不同？3.FGF的生物学作用是什么？4.细胞粘附分子的分类？5.PDGF、FGF、EGF都分别与哪些原癌基因具有同源性？6.凋亡概念与坏死区别？凋亡的检测方法？7.什么是细胞外基质？都包括哪些主要成分8.试述基底膜的结构和成分？9.举例说明胶原蛋白的变化与哪些病理过程关？,
