1、分子生物学在白血病中的应用,2016-3-8融合基因实验室,一、白血病相关基因改变的常见类型,融合基因,基因突变,基因表达异常,1. 融合基因： 所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。,概 念,Chr 9,Chr 22,ABL,BCR,BCR-ABL融合基因,2. 基因突变： 错义突变（点突变） 插入突变 缺失突变 移码突变,错义突变（点突变）：,DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变。 如： JAK2V617F JAK2基因 mRNA水平（cDNA水平）：第1849位点
2、G突变为T 蛋白水平：第617位氨基酸位点由缬氨酸（V）突变 为笨丙氨酸（F）,插入突变：,较长片段的DNA的插入而发生突变，但不改变阅读框 如： NOTCH1 H1590-L1592insFGP NOTCH1基因 mRNA水平（cDNA水平）：c.47754776ins(TGGGCC) 蛋白水平： H1590-L1592insFGP,缺失突变：,较长片段的DNA的缺失而发生突变 ，但不改变阅读框 如： JAK2 N542-E543del JAK2基因 mRNA水平（cDNA水平）： c.1624-1629 del 6bp 蛋白水平：N542-E543 缺失N、E氨基酸,移码突变：,DNA片段
3、中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或3的倍数碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生错位的一种突变。 如：CALR L367fs(46) 突变 CALR基因 mRNA水平（cDNA水平）： c.1179_1230del 52bp 蛋白水平：第367位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在 367位点起后的46位氨基酸终止。,癌基因或抑癌基因表达异常 如： WT1定量,3、基因表达异常,二、白血病基因检测的临床意义,1、 辅助诊断2、 指导治疗3、 评估预后4、 微小病变残留检测,三、白血病相关基因分类,BCR-ABLFLT3-ITDJAK2V617FC-KIT,PML-RARaNPM1
4、RUNX1AML1-ETO,DNMT3ATET2ASXL1/ASXL2IDH1/IDH2,SF3B1SRSF2U2AF1,Class 1 增 殖,Class 2 分 化,Class 3 表观遗传,Class 4 剪切因子,四、白血病相关常见基因,AML CMLMPN,ALLCLL,MDS,AML 相 关 基 因 异 常,融合基因：,1、 PML-RARa: 95% AML-M3 分为三型 L型、S型、V 型 PLZF-RARa NPM1 -RARa2、 AML1-ETO: 40% AML-M2 (主要为M2b)3、 CBF-MYH11：90% AML-M4Eo4、 MLL-AF17 MLL-A
5、F6 AML-M4 /M5 MLL-AF9,AML 相 关 基 因 异 常,基因突变：,FLT3-ITDNPM1（A/B/D型）c-KitIDH1IDH2 ASXL2NRAS KRAS P53DNMT3A,基因定量分析：,WT1 定量,FLT3-ITD：AML-M3中发生频率较高,c-Kit： 50%AML1-ETO阳性AML CBF-MYH11阳性AML,ASXL2：AML1-ETO阳性AML,CML 相 关 基 因 异 常,BCR-ABL : 95%CML CML特异 marker 亚型： cDNA Protein b3a2、b2a2型 P210 e19a2型 P230 e1a2型 P19
6、0,MPN 相 关 基 因 异 常,PV、ET、PMF的诊断,BCR-ABL 排除早期慢粒,PV: JAK2V617F JKA2exon12ET：JAK2V617F MPL CALRPMF: JAK2V617F MPL CALR,BCR-ABL JAK2V617F MPL CALR JAK2exon12,MDS 相 关 基 因 异 常,WT1 定量DNMT3ATET2ASXL1SF3B1SRSF2 RUNX1,SF3B1：主要见于50-70% 环形铁粒幼增多性贫血,SRSF2 ：主要见于CMML,ALL 相 关 基 因 异 常,BCR-ABL: 35%成人ALLTEL-AML1: 儿童ALL 预后好E2A-PBX1：预后不好MLL-AF4 ： 婴幼儿多见,NOTCH1 ： 预后好FBXW7： 预后不好PTEN NRAS KRAS,B-ALL,T-ALL,CLL 相 关 基 因 异 常,P53NOTCH1,NOTCH1：见于B系或T系CLL在CLL中为预后不好指标,五、检测方法介绍：,1、 RT-PCR2、 PCR3、 PCR-测序4、 RQ-PCR,六、结果报告单分析：,Thank you !,
