1、本科毕业设计（20_届）体重和温度对鲫鱼耗氧率及排氨率的影响所在学院专业班级食品科学与工程学生姓名学号指导教师职称完成日期年月I摘要耗氧率和排氨率是衡量鱼体在水中代谢状况的两个重要生理指标，通过研究温度、体重对鲫鱼耗氧率和排氨率的影响，可以为鲫鱼运输过程中的运输条件提供更科学的依据，同时也可以作为一个模型，研究更多经济型鱼类，提高鱼在运输过程中的存活率和品质。本研究通过实验表明温度的升高会对二者的增加起到促进作用，而体重的增加则会使耗氧率和排氨率减少。关键词鲫鱼；耗氧率；排氨率；温度；体重ABSTRACTSINCEOXYGENCONSUMPTIONANDAMMONIAEXCRETIONRATE
2、ARETWOIMPORTANTPHYSIOLOGICALINDICATORSTOMEASURETHESTATUSOFFISHSOWECANRESEARCHHOWTEMPERATUREANDWEIGHTINFLUENCETHETWOFACTORSOFFISHTOPROVIDEMOREBASISFORCARPTRANSPORTATIONBESIDES,ITCANALSOPROVIDEAMODELTOSTUDYMOREECONOMICFISHESSOCANWEIMPROVEFISHSURVIVALANDQUALITYDURINGTRANSPORTTHISSTUDYWILLUSETESTMETHODT
3、OPROVETHATAHIGHERTEMPERATUREWILLINCREASETHETWORATESWHILEWEIGHTINFLUENCETHETWORATESINTHEOPPOSITEWAYKEYWORDSCARP；OXYGENCONSUMPTIONRATE；AMMONIAEXCRETIONRATE；TEMPERATURE；WEIGHT。II目录1背景与意义12实验材料与方法121实验材料122实验过程1221实验方法2222溶解氧的测定22221测定方法22222测定步骤32223数据计算3223耗氧率的测定3224氨的测定32241测定方法32242制定标准曲线32243水样测定42
4、244数据计算4225排氨率的测定43结果与讨论531温度与体重对鲫鱼耗氧率的影响532温度与体重对鲫鱼排氨率的影响6321标准曲线的制作6322非麻醉状态时鲫鱼的排氨率733讨论8致谢错误未定义书签。参考文献10附录错误未定义书签。11背景与意义鲫鱼CARASSIUSAURATUSAURATUSLINNAEUS隶属鲤形目、鲤科、鲤亚科、鲫属，除了西部的高原地区以外，广泛地分布于我国其它地区，鲫鱼的适应能力非常强，不论是浅水还是深水、流水还是静水、高温水32还是低温水0均能生存。即使是在PH9的强碱性水中，盐度高达45的达里湖里，仍然能生长繁殖（1）。目前主要养的鲫鱼以异育银鲫、彭泽鲫、湘云鲫
5、为主，其中的湘云鲫生长速度最快，其次为异育银鲫，最后为彭泽鲫。但是彭泽鲫的外观优于其它品种，所以出口的商品鲫仍以彭泽鲫鱼为主。鲫鱼是淡水鱼类中食用价值比较高的鱼类，鲫鱼肉质的细嫩，肉味甜美，营养价值很高，每百克肉大约含蛋白质13G、脂肪11G，此外还含有大量的钙、铁、磷等矿物质。鲫鱼药用价值也极高（2），其性味甘、平、温，入胃、肾，具有和中补虚、除湿利水、补虚赢、温胃进食、补中生气之功效。近些年来，我国淡水渔业发展迅猛，产量逐年增加。但是，淡水鱼的保活、保鲜等研究工作做得很少，使得淡水鱼的保活保鲜工作进展缓慢，严重影响了淡水鱼的流通销售。搞好淡水鱼的保活和保鲜，对促进淡水渔业的发展，满足国内消
6、费具有十分重要的意义。特别是在运输和销售过程中应该避免水产品的死亡和由于不良环境引起鱼体衰弱而造成的损失（3），所以对于这一方面的研究有着相当重要的实际应用价值。目前，已经普遍认为温度和体重是影响活体鱼类在陆路运输过程当中的保活时间长短的两个比较重要的因素（4,5），而鲫鱼的耗氧率和排氨率可以作为鲫鱼在运输过程中生理状况的两个具有重要参考意义的指标，所以在此，将具体定量地研究温度和体重对鲫鱼耗氧和排氨的影响。同时为了考虑到在实际的运输过程当中，为了延长鱼的运输时间经常向水中加入一定量的麻醉剂以减缓鲫鱼的呼吸代谢速度（6），因此考虑到这一实际情况还将研究在一定的麻醉状态下，温度和体重对鲫鱼上述两
7、个因素的影响。2实验材料与方法21实验材料实验所用鲫鱼均来源于浙江省宁波市甬江水域中的野生以及养殖鲫鱼，大小为520CM不等，体重从30G到290G不等，要求是体表鳞片完整生命活动旺盛的鱼体，实验用鱼买回后先放入实验所需温度放养24小时，使鱼适应试验温度减少实验时鱼的应激反应，同时在这24小时当中对鱼采用禁食措施以减少排泄物对实验结果的影响。实验所用麻醉剂为现在实际生产活动中普遍使用的MS222型麻醉剂（7，8）。22实验过程实验所研究的体重组分为30G,90G,150G,210G和270G共5个体重组，由于实验材料即市场所售鲫鱼大小限制，研究时取体重差在10G以内的为实验用鱼。实验所研究的温
8、度组分为5，10，15，20，25和30共6个温度组，温差为15。实验中的麻醉组全都使2用MS222型麻醉剂，麻醉浓度为60PPM。221实验方法实验中所用储鱼容器为5L广口瓶，每次实验的前一天晚上都先将广口瓶中装入5L自来水，同时需要加入麻醉剂的实验组也在此时将麻醉剂加入广口瓶中，然后放在将温度已经设定为第二天所需实验温度的水浴锅中，同时将从市场买回的实验用鱼放养于一个水桶中，并将水桶放在另外一个已经将温度设定为第二天所需实验温度的水浴锅中。实验时，先将挑选出的符合规格的实验用鱼放入广口瓶中，每个瓶中放入一条。然后插入用于在稍后抽取实验水样用的吸液装置，此装置由移液管末端套上约50CM长的橡
9、胶管组成。插入取液管后立即用液体石蜡将广口瓶页面封住以隔绝空气中的氧气和氨。液封结束后，先将装置静置1020MIN以让鲫鱼适应新的环境，然后利用虹吸原理从广口瓶中抽出瓶中水样分别装入250ML容量瓶和100ML的试剂瓶中，其中250ML容量瓶中水样用于测定水中的氧气含量，100ML试剂瓶中水样用于测定水中氨氮含量。两瓶水样都取好后让液面继续下降至广口瓶的45L刻度线处，然后用夹子夹紧取液管的橡皮管，此时液面停止下降，这时再用挡光布盖住广口瓶，用以防止由于阳光的照射而使得广口瓶水样中的氨氮分解挥发。随后，让鲫鱼在广口瓶中呼吸代谢一段时间，这一代谢时间的长短主要依据实验时鱼体的大小以及实验所处的温
10、度组而定，一般情况下为30MIN到180MIN之间，例如30G实验鱼体在5的条件下时让其呼吸代谢180MIN；而30G鱼体在30条件下时这一时间间隔为100MIN；270G的鱼在5下时间为90MIN左右，而在30时则只有30MIN，其他实验组的等候时间均在此之间。在这段时间内要将上述取出用于测定氨氮的100ML试剂瓶放置于避光阴凉处，以防止其中的氨氮发生损失。然后去掉挡光布，仿照上述步骤再次抽取出广口瓶中的水样分别装入250ML的容量瓶和100ML的试剂瓶中，由此可以根据两次测得的氧气和氨氮之差得到鱼的耗氧量以及排氨率。水样抽出后便可以撤出取液管，回收液体石蜡，用排水法测出鱼体体积。222溶解
11、氧的测定2221测定方法对于水中的溶解氧的测定，一般采用碘量法。当在水中加入硫酸锰及碱性碘化钾溶液后，会生成氢氧化锰沉淀。此时氢氧化锰性质极不稳定，会迅速地与水中溶解氧化合生成锰酸锰，反应式如下2MNSO44NAOH2MNOH22NA2SO42MNOH2O22H2MNO3H2MNO3十MNOH2MNMNO32H2O棕色沉淀加入浓硫酸使棕色沉淀MNMN02与溶液中所加入的碘化钾发生反应，从而析出碘，溶解的氧越多，析出的碘也越多，溶液的颜色也就越深。2KIH2SO42HIK2SO4MNMNO32H2SO42HI2MNSO4I23H2O3I22NA2S2O32NAINA2S4O6随后只要以以淀粉做指
12、示剂，用标准溶液滴定，就能计算出水样中溶解氧的含量。2222测定步骤（9）首先要对水样中的氧进行固定在250ML的容量瓶装满水样后，取下瓶盖，用移液管吸取1ML硫酸锰溶液插入容量瓶内液面下，缓慢地放出溶液于瓶中。再另取一只移液管,按上述的操作往水样中加入2ML碱性碘化钾溶液，塞紧瓶塞，将瓶颠倒振摇使之充分摇匀。此时，水样中的氧即被固定生成锰酸锰MNMNO3棕色沉淀。然后是酸化将容量瓶静置一段时间，待水样里面的沉淀基本稳定后，打开瓶塞，将上清液的一部分倒入一支500ML三角烧瓶中，随即立即向容量瓶内的沉淀中加入10ML的13（V/V）硫酸，塞紧瓶塞，震荡至容量瓶中的沉淀全部溶解，再将此时瓶中溶液
13、倒入上述三角烧瓶中。倒入后便立即开始滴定先用标准NA2S2O3溶液将待测液滴定至浅黄色，然后向锥形瓶中加入34滴淀粉指示剂，再继续用NA2S2O3标准溶液滴定至蓝色变成无色为止。记下消耗NA2S2O3标准溶液的体积。2223数据计算溶解氧MGLC（NA2S2O3）V（NA2S2O3）32/41000/V（水）223耗氧率的测定利用上述222的测定方法可以分别测出鲫鱼前后两次测量时水体中的氧气含量，则鲫鱼的耗氧率可用下述公式求出ROC。一CTVTW式中RO耗氧率MGKGHC。与CT实验时前后两次测得的水中溶氧量MGLV为实验时水体体积（5L）W鱼体湿重GT实验持续时间H224氨的测定2241测定
14、方法在碱性条件下，以次溴酸钠为氧化剂，可以将水中的氨氧化为亚硝酸盐，而亚硝酸盐在一定的PH值下与磺胺及盐酸萘乙二胺作用形成深红色偶氮染料，用重氮偶氮法测定总亚硝酸盐的吸光值，扣除水样中原有的亚硝酸盐的吸光值后计算氨的浓度。2242制定标准曲线（080MOL/L）首先在12个500ML具塞量筒中分别移入氨标准使用液0，050，100，250，,500，800ML，每种体积各取两份，稀释至50ML，混匀。再用可调定量加液器依次加入50毫升次溴酸钠使用溶液，混匀，放置使其氧化30MIN。随后用移液管依次加入50ML对氨基苯磺酰胺溶液，混匀放置5MIN。用移液管依次加入10ML二盐酸1萘乙二胺液，充分
15、混匀，放置15MIN颜色可稳定4H。待颜色稳定后，在分光光度计上用20CM测定池对照无氨蒸馏水调零，于543NM波长处测定各溶液的吸光值A，其中4试剂加蒸馏水空白吸光值为AB，记录于标准曲线数据记录表中。最后求出氨标准曲线的回归直线方程。2243水样测定9用移液枪取50ML水样置于500ML具塞量筒中（每一水样取两份），用无氨蒸馏水将其稀释至刻度，同时另外量取无氨蒸馏水两份，然后与制定标准曲线时类似，用可调定量加液器依次加入50毫升次溴酸钠使用溶液，混匀，放置使其氧化30MIN。然后用移液管依次加入50ML对氨基苯磺酰胺溶液，混匀放置5MIN。再用移液管依次加入10ML二盐酸1萘乙二胺液，充分
16、混匀，放置15MIN颜色可稳定4H。颜色稳定后，用分光光度计在543NM波长处测定个溶液的吸光值AW和试剂加蒸馏水空白吸光值ABAB按下述方法测定向两个具塞量筒中分别移入500ML无氨蒸馏水，然后按上述用量向一个具塞量筒中加入试剂，测定其吸光值AB1，向另一个具塞量筒中加入双倍用量的各种试剂，测定其吸光值AB2，则AB72/61AB2AB1，记录于测定记录表。2244数据计算总亚硝酸盐原吸光值AZAW72/61AB2AB1式中AW水样的平均吸光值AB2双倍试剂空白吸光值AB1与水样测定时等量试剂的空白吸光值水样中氨浓度的计算式中C（NH3N）水样中氨的浓度，MOL/LA氨标准曲线的截距B氨标准
17、曲线的斜率X氨和亚硝酸盐测定时，所用测定池的长度比ANO2N水样中原有亚硝酸盐吸光值225排氨率的测定利用前面224的测定方法可以分别测出鲫鱼前后两次测量时水体中的氨氮含量，则鲫鱼的排氨率可用下述公式求出RNN。一NTVTW式中RN排氨率MGKGHN。与NT实验时前后两次测得的水中溶氧量MGLV为实验时水体体积（5L）W鱼体湿重GT实验持续时间H53结果与讨论31温度与体重对鲫鱼耗氧率的影响将没有添加麻醉剂的实验组的耗氧率数据整理后得表1，添加过麻醉剂的实验组的数据整理后得表2。表1无麻醉剂组鲫鱼耗氧率MGKGH体重/G温度/5101520253030758008514517107193330
18、852410212326537102245980889067170661360208518440037231240812556912024014175150611306112956021178860972291319925037079231971082105726035125860221732118522206005246711962293413627054230771231312017051142198730392436220522547068在非麻醉状态下，在各个体重组中，25之前随着温度的升高，鲫鱼的耗氧率都随之明显增加，除20组与25组之间差异显著P005外,其余各组间差异极显著P00
19、1；在温度2530时,随着温度的上升鲫鱼耗氧率呈现出下降趋势,25组为峰值。30组除与20组无显著性差异P005外,其它各组差异都极显著P001。在所有的温度组中，鲫鱼的耗氧率都随着体重的增加而显著减少，除210G组与270G组差异显著P005外，其它各组差异都极显著P001。表2有麻醉剂组鲫鱼耗氧率MGKGH体重/G温度/65101520253030392600976690211063808912556122137212051278806790354801171250989871177122190011345200512374023150347200771211271014513612533
20、1021429903613040177210369203375841074107730991293003315177144141691602704015021820908311837131136190741684108715931069在麻醉状态下，各个体重组中，25之前随着温度的升高，鲫鱼的耗氧率也都随之明显增加，各组间差异极显著P001在温度2530时,随着温度的上升鲫鱼耗氧率呈现出下降趋势,25组为峰值。除了30和20组无显著性差异P005外,其它各组差异都极显著P001。在各个温度组中，鲫鱼的耗氧率都随着体重的增加而呈现出先减少后增大的趋势，除90G组与150G组无显著性差异P005外
21、，其它各组差异都极显著P001。此外，各个温度与体重下麻醉的条件下鲫鱼的耗氧率都明显低于未麻醉状态，其差值范围大概在2/3到1/2之间，各组间差异极显著P001，体重越大两种状态下耗氧率的差异越小。32温度与体重对鲫鱼排氨率的影响321标准曲线的制作根据2242测得各浓度下溶液吸光值如下表所示表3各浓度标准氨溶液对应的吸光值浓度/MOL/LA10512558A00690082014602500350制得标准曲线如图1所示7Y00382X00112R20997300050101502025030350123456789氨的浓度/MOL/L吸光值/A图1氨的标准曲线322非麻醉状态时鲫鱼的排氨率将
22、没有添加麻醉剂的实验组的排氨率数据整理后得表4，添加过麻醉剂的实验组的数据整理后得表5。表4无麻醉剂组鲫鱼排氨率MGKGH体重/G温度/5101520253030221502245810316833071822508391380959850035901802011392809856291106887122772402482320771501671015352103750240156037028698300873070572101596001337303147460235722075639903668820572701528001311000245640445518137610704465140
23、28非麻醉状态下，在各个体重组中，鲫鱼的排氨率都随温度的增加而增加，各组间差异均极显著P001。在各个温度组中，鲫鱼的排氨率都随体重的增加而降低，各实验组之间除了210G与270G差异显著P005外，各组差异均极显著P001。8表5有麻醉剂组鲫鱼排氨率MGKGH体重/G温度/510152025303013200882344007366902340580614728103510015290130506423380623527035398303046420824973072150116702322570683318027392605244770574724041210111401521800743
24、16404738541384359012458100927093705521270392985042360807442221134447071在麻醉状态下，与未麻醉时相似，鲫鱼的排氨率都随温度的增加而增加，各组间差异均极显著P001，同时随体重的增加而降低，除150G与210G组间无显著性差异P005外，差异均极显著P001。各个温度与体重下麻醉的条件下鲫鱼的排氨率都明显低于未麻醉状态，其差值范围大概在2/3到1/2之间，各组间差异极显著P001，体重越大两种状态下耗氧率的差异越小。33讨论环境的温度对于生物发育、生长以及代谢强度有着较大的影响。水体温度与鱼的耗氧率和排氨率之间的密切关系早已被
25、很多学者证实，一般情况下认为，在一定的温度范围内，水体温度高低和鱼的耗氧率多少呈正相关关系10，同时与排氨率也成正相关关系。在本实验的未麻醉组中，在25以前，鲫鱼的耗氧率随着温度的增高而逐渐升高，排氨率在各个温度范围内都是随着温度的升高而逐渐增加的。这是因为鱼类是变温动物，其体温会随着水温的变化变动，当水温上升时体温随之升高，所以水体的温度高低由此可以直接影响鱼体体内的生物化学反应速度和生理活动强度。即随着水的温度的升高，维持鱼体生命的脑、心、肝等各重要组织器官的活性将会增强，同时各种酶的活性随之提高，于是鱼类的活动强度也会增大，基础代谢旺盛，对外表现出耗氧率和耗氧量以及排氨率和排氨量同时增加
26、，而耗氧率和排氨率便恰好反映着这些变化的新陈代谢水平11，12。但是各种酶的反应都需要有一个适当的温度范围，超过这个范围酶活力反而下降，从而导致新陈代谢变慢，进而引起耗氧率下降13,所以在本实验中，当温度达到25时耗氧率达到最高点，在此温度之9后鲫鱼的耗氧率会随着温度的升高而降低。在本实验的麻醉组中，鲫鱼在麻醉状态时耗氧率随温度的变化趋势与未麻醉状态的趋势基本相同，只不过在麻醉组中鲫鱼在各个温度下的耗氧率都要明显低于没有添加麻醉剂时的水平，这主要是由于麻醉剂降低了鱼体的新陈代谢水平所致。体重是影响水生动物耗氧率和排氨率的一个重要因素。国内外许多学者已经对呼吸和排泄即耗氧率与排氨率与体重的关系进
27、行了大量研究1416,并证实耗氧率和排氨率与体重之间通常呈幂函数关系,即MAWB,式中的A、B为常数,其中B又被称为体重指数,B值的大小反映了耗氧率和排氨率对体重变化的敏感程度。之所以会呈现出这种规律17,18，可能是因为用以维持鱼体生命活动的重要组织器官在幼龄时占整个鱼体体重比例较大,所以耗氧率和排氨率便会较高,同时随个体的增长而相对下降也可能是因为不同体重的鱼体正处于不同的生长阶段，其中小鱼处于发育期代谢活动要比大鱼旺盛。在本实验的中，除了麻醉状态下的鲫鱼与耗氧率关系与上述不符，其他条件下的耗氧率和排氨率的变化与上述规律基本一致，只是实际拟合所得到的更趋向于线性方程，产生这一差异的原因可能
28、是因为选取的体重范围较窄，当鲫鱼被麻醉后其代谢水平降低，从而不能反应出体重与排氨率的整体关系。但是此结果与对黑鲪排氨率19以及对黄鱼排氨率20的研究结果相一致，都呈线性方程，UAWB，三者都很好地反映出了排氨率随着体重的增大而减少的趋势，这完全符合一般鱼类的氨氮代谢变化规律。而在麻醉状态下鲫鱼耗氧率随体重的变化规律则呈现出先下降后上升的趋势，笔者认为这可能是由于鲫鱼在麻醉状态下会通过代谢而消耗水中的麻醉剂，而实验所用的5L容器对于大鱼来说其麻醉剂总量不足以使鱼始终维持完全麻醉状态，从而导致麻醉剂对其其呼吸代谢的抑制程度并不像对小鱼一样明显。10参考文献1高春生,范光丽淇河鲫肌肉营养成分分析及营
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