1、毕业论文文献综述生物技术食品中氯霉素类抗生素的检测技术的研究摘要本文就分子印迹固相萃取技术、氯霉素类抗生素检测方法，包括微生物学法、高效液相色谱法、气相色谱法、色谱质谱连用法、放射免疫分析法、酶免疫分析法等做一概述。关键词氯霉素；检测；分子印迹固相萃取技术氯霉素最初是从委内瑞拉链丝菌的培养液中提取的，是一种有效的广谱抗生素。曾因其对多种病原菌的较强的抑菌作用而被广泛用于养殖业。后来人们逐渐发现其对人类有很大的毒、副作用，能引起人的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症以及新生儿、早产儿灰色综合症等。长期微量摄入氯霉素会引起动物机体正常菌群失调，抵抗力下降，易感染各种疾病,许多国家已经相继禁止或严格限
2、制使用氯霉素13，但由于氯霉素抑菌效果好，价格低廉，目前违法使用的现象还有发生，因此，建立高灵敏度、特异性强、简便易行而又经济的氯霉素残留的分析方法已经成为一项迫切的任务。1氯霉素类抗生素检测方法氯霉素分析检测方法的研究始于二十世纪七八十年代,到目前为止,国内外用于氯霉素检测的方法已近十几种,其中主要有微生物法、仪器分析法和免疫分析法等。下面进行对这些检测方法进行了综述。11微生物学法微生物学法的原理是利用特定菌株与药物的作用来检测样品中CAP的种类和含量。常用于动物性食品兽药残留的初筛。有人用试纸法、棉签法、发酵法等微生物法来检测牛奶中氯霉素的残留,其中试纸法的灵敏度可达3G/L4。但是可以
3、看出灵敏度不够高。还有人用用藤黄八叠球菌菌株作为对氯霉素的敏感菌对鱼肉组织中残留的氯霉素进行检测时的结果是检测限为025G/G，平均回收率为675。它的优点是操作简单、样品用量少、预处理简单、快速、费用低，适合大规模的定性筛选工作。缺点为灵敏度低、易漏检、结果一出现假阳性、检出限高。12高效液相色谱法HPLC高效液相色谱法检测氯霉素是一种灵敏度较高、可靠性较强的方法，此法重复性好、假阳性少，可以进行定量鉴定。其中灵敏的差异与其所连检测器的不同而不同。戴华等就曾用HPLC法测定饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量5。而PILAR等在检测动物性食品中氯霉素残留实验时发现其检测限为07G/KG6。
4、如果采用荧光检测器时，灵敏度就有所提升，邹月利在用该法测定奶中氯霉素残留量的实验中的方法检测限可达01G/L，回收率在9671027。它的优点是精确可靠、重复性好、灵敏度高、假阳性少。其缺点是处理过程复杂、耗时长、成本高、分析速度慢、回收率偏低，不适合用于大规模的样品检测。13气相色谱法GC氯霉素气相色谱检测法最早是在1974年AOAC会上由JACOBSON等人提出的7。目前气相色谱法分析氯霉素检测限一般在01G/KG左右812。在样品提取后衍生化在用氮吹干、定容的方法进行气相色谱检测这方面存在着一定的争议，惠英等在其实验中发现衍生后不用氮吹干，而加大定容剂量，这样检测的结果更好10。它的优点
5、是分离效能高、选择性高、灵敏度高和检测迅速。其缺点是繁琐的衍生步骤，仪器化程度高且价格贵，不适在基层推广使用。14色谱质谱联用法141液相色谱质谱联用GCMS已成熟的运用于分析食品中氯霉素类抗生素残留的检测，这类方法一般都用硅烷化试剂对残留物衍生，然后用不同的离子源使衍生物破碎成相应的离子进行定性和定量分析。实例李鹏等在用GCMS法检测动物组织中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的残留量时其中氯霉素的检测限达到了003G/KG,回收率为80111513。此方法有一不足就在于必须进行衍生反应。142液相色谱质谱联用LCMS是目前美国FDA推荐的氯霉素检测方法。它有着取代GCMS法的趋势。实例陈小霞等在
6、用此方法测定鸡肉中氯霉素残留量时，检出限为10NG/KG14。MASAHIKO等也用此法检测了黄尾鱼和比目鱼鱼肉组织中的氯霉素含量15。15免疫分析方法免疫分析法是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合为基础,对新型动物性食品中氯霉素和甲砜霉素残留进行定量及半确证方法。151酶联免疫吸附测定ELISA其最低检测可达到002G/KG左右16,17,它的优点是简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强。其缺点是因抗体的批次不同检测结果存在细微的差异。152放射免疫测定RIA它是使用以放射性同位素作标记的抗原或抗体，用Y射线探测仪或液体闪烁计数器测定。Y射线或B射线的放射性强度，来测定抗体或抗原量的技术
7、。它的优点是检出限为1G/KG以上的氯霉素残留量能进行准确的定量1820。它的缺点是检测费用较昂贵、标记物易衰变性和一定的放射性污染。153金标试纸条法它是一种新型的速测技术，是单克隆技术和胶体金免疫层析技术交叉产物。实例徐余动等用此法对虾肉等组织中的氯霉素残留量进行了检测,灵敏度最低值可达到1NG/ML,只需510MIN,与类似物无交叉反应21。它的优点是简便易行、快速、试剂安全，特异性强、可单份测定、不需要特殊仪器和设备、更便于长期保存。多用于先现场检控22。16其他分析方法161荧光分析法FIA实例潘莹宇等用FIA来测定牛奶中氯霉素的残留，其加标回收率为8187，相对标准偏差为39842
8、3。162超临界流体色谱SFC它弥补GC和HPLC的不足，但不可能取代二者。SFC优点是可以方便地连接各种灵敏的检测器MS，ECD等。163毛细管区域电泳CZE实例陈天豹等用CZE法检测蜂蜜中残留的抗生素实验中氯霉素时的检测极限为10G/L24。它的优点是简化样品前处理、多残留分析以及使分析自动化。其缺点是样品量太少，限制了检测的灵敏度。2分子印迹固相萃取技术在检测样品前处理的应用21介绍分子印迹和固相萃取食品检测中被检测的物质大多是痕量，易受干扰。所以样品前处理是食品检测中的关键。211传统的方法它包括液液萃取、索式提取、固相萃取等25。这里就主要介绍固相萃取。固相萃取SPE是由液固萃取与柱
9、液相色谱技术相结合的产物。它很好的将分离和浓缩合为一体，通过使用不同选择性溶剂与洗脱顺序来洗脱出杂质与目标物质，达到分离目的。根据填料不同可分为以正相吸附、反相吸附和离子交换吸附。传统的SPE的目标物与吸附剂之间的作用力是非特异性的，通常需对萃取和洗脱条件进行仔细选择，而且对不同基质的分离与分析物需要选择不同的柱填料。222分子印迹固相萃取技术它是分子印迹和固相萃取相结合的产物。它充分利用MIPS独特的选择性和亲和力。通过让模板分子和适合官能团的功能单体结合成分子印迹聚合物，在通过合适的洗脱剂出去模板分子，聚合物中就留下了空穴。这个空穴就只有混合物中待测分离物进行可逆性特异性结合。实例CHRI
10、STINA等检测蜂产品中的氯霉素时，用氯霉素为模板分子，甲基丙烯酸作功能单体，用乙二醇二甲基丙烯酸酯作交联剂、用偶氮二异丁腈为引发剂和氯仿为溶剂，于60度热引发24小时制得分子印迹聚合物，用该聚合物装填固相萃取柱对蜂产品中氯霉素进行富集，用RPHPLC定量检测，该方法对氯霉素的检测限能达01G/ML26。3展望就MISPE的应用在氯霉素类抗生素检测展望主要可以在功能单体与关联剂、聚合方法与印迹方法进行探索找出最优条件。找出适合氯霉素类抗生素检测的分子印迹聚合物。寻找合适的上样溶剂、淋洗溶剂和洗脱溶剂。参考文献1陈鹏,罗晓琴氯霉素残留状况及检测方法J动物保健,2006,181041422陈眷华,
11、彭羽氯霉素类抗生素药物对人类健康的威胁J贵州畜牧兽医,2006,30417183李秀萍,尉新华,孙艳霞浅谈氯霉素的危害与控制J中国动物检疫,2003,205184宋杰,宋燕青,王勇鑫,等微生物法在检测牛奶中氯霉素残留的应用J河北师范大学学报,2005,29185915戴华,王美玲,李拥军,等饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量的HPLC测定方法J光谱实验室,2006,236120912126PILARV,NURIABDETERMINATIONOFCHLORAMPHENICOLRESIDUESINANIMALFEEDSBYLIQUIDCHLORAMPHENICOLINMILKJJASSOCOF
12、FANALCHEM,1980,635104410487JACOBSONWC,ALLENEH,WISEMENHGDETERMINATIONOFCHLORAMPHENICOLINLIVER,KIDNEY,MUSCLE,ANDWHOLEBLOODJPRESENTEDAT88THANNUALMEETINGOFAOAC,1974,201014178彭莉,程江,高岚,等牛奶中氯霉素残留的气相色谱测定法研究J中国兽药杂志,2006,40914179宫向红,徐英江,张秀珍水产品中氯霉素残留量气相色谱检测方法的探讨J食品科学,2006,27722222410钟惠英,杨家锋,徐开达气相色谱法定量分析水产品中的氯霉
13、素CAP残留量J中国卫生检验杂志,2006,16218318511洪振涛,张卫锋,聂建荣,等气相色谱法测定动物组织中氯霉素的残留量J中国兽药杂志,2006,402141612周金慧,张素霞,沈建忠,等鸡组织中氯霉素残留的气相色谱微电子捕获检测方法研究J中国兽药杂志,2006,401161913李鹏,邱月明,蔡慧霞,等气相色谱质谱联用法测定动物组织中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的残留量J色谱,2006,241141814陈小霞,岳振峰,吉彩霓,等高效液相色谱电喷雾电离三级四极杆质谱测定鸡肉中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的残留量J色谱,2005,231929515MASAHIKOT,SHIGEKI
14、D,TAKETOSHINDETERMINATIONOFCHLORAMPHENICOLRESIDUESINFISHMEATSBYLIQUIDCHROMATOGRAPHYATMOSPHERICPRESSUREPHOTOIONIZATIONMASSSPECTROMETRYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,2003,101112677516郝俊虎,王仙琴,闰永利,等酶联免疫吸附法检测鸡肝肾中氯霉素残留的分析J中国家禽学报,2004,81626417沈美芳,赵文亚,费志良,等用酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量J南京师范大学学报工程技术版,2003,32L418倪梅林,章再婷,李佐卿
15、虾仁中氯霉素残留量的放射免疫测定J中国卫生检验杂志2006,16101266128019黄晓蓉,郑晶,杨方,等放射性受体免疫法分析方法快速筛选检烤鳗中氯霉素残J水产养殖,2003,244L61820徐美奕,孟庆勇养殖对虾中氯霉素残留的放射免疫分析J水利渔业,2003,236L41521李余动,张少恩,吴志刚,等胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留J中国食品卫生杂志,2005,17541641922白艳玲,陈剑刚,张彩虹,等水产品中氯霉素残留量测定方法的研究J中国卫生检验杂志,2005,15667267423潘莹宇,许茜,康学军,等高效液相色谱荧光检测法测定牛奶中氯霉素的残留量J色谱,2005,23657758024陈天豹,邓文汉,卢菀华,等毛细管电泳法检测蜜蜂中残留的抗生素J2001,191919325谢孟峡,刘媛,邱月明,等固相萃取气相色谱质谱测定动物组织中氯霉素的残留量J分析化学,2005,3311426CHRISTINASEHIRMER,HANSMEISELSYNTHESISOFAMOLECULARLYIMPRINTEDPOLYMERFORTHESELECTIVESOLIDPHASEEXTRACTIONOFCHLORAMPHENICOLFROMHONEYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,2006,11321325328
