1、第25章病毒感染的检查方法和防治原则,第一节 病毒感染的检查方法,一、标本采集与送检：供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则采集时间：发病初期（急性期）采集标本标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制标本中的细菌或真菌等生长繁殖。尽量及时接种，如不能当时接种，标本应保存在-70低温冰柜或液氮中。供血清学检测的标本采集原则取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观察双份血清抗体效价,二、病毒的分离,动物接种-动物模型,鸡胚培养,细胞培养,原代细胞培养二倍体细
2、胞培养传代细胞培养,三大培养方法,细胞培养,(1)原代细胞培养 对病毒的敏感性高，可用于生产病毒疫苗，但不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。(2)二倍体细胞培养 生长迅速，可传50代保持二倍体染色体数目，可用于制备病毒疫苗，也可用于病毒的实验室诊断工作。(3) 传代细胞培养 由癌细胞或二倍体细胞突变而来，染色体数为非整数倍，细胞生长迅速，可无限传代，广泛用于病毒的实验室诊断工作。,病毒在细胞内增殖的指征：病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。普通光学倒置显微镜可观察,正常细胞,C
3、PE,红细胞吸附现象带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后，细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合病毒干扰现象,病毒干扰作用,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-)CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),病毒感染性的定量测定空斑形成单位（plaque-forming unit, PFU）50%致死量（LD50）或50%组织细胞感染量（TCID50）测定病毒形态与结构的观察病毒的病原学鉴定,三、病毒抗原的直接检出免疫荧光法酶联免疫吸附试验
4、四、病毒抗体的直接检出中和实验血凝抑制实验补体结合实验,中和实验病毒在活体内或细胞培养中被特异性中和抗体作用而失去感染性的一种试验可检查患者血清中抗体的消长情况，可用来鉴定未知病毒或研究病毒的抗原结构补体结合实验常用病毒内部可溶性抗原检测血清中IgM类抗体用于病毒早期感染的诊断血凝抑制实验检测血凝抑制抗体的试验常用于有血凝素病毒感染的诊断及流行病学调查，也可用于鉴定病毒的型及亚型,五、检测病毒核酸核酸杂交技术PCR技术高通量的病毒核酸检测技术,形态学检查光学显微镜检查法电镜和免疫电镜检查免疫学检查法检测病毒抗原免疫荧光法、酶联免疫吸附试验检查病毒特异性IgM多种病毒抗原抗体检测方法病毒核酸检测
5、技术,病毒感染的快速诊断,第二节 病毒感染的免疫预防,病毒感染的预防更重要!病毒感染的预防主要是使用疫苗!疫苗的使用对减少病毒感染和消灭某些 病毒性传染病起到关键作用!,特异性免疫的获得方式（复习）,主动免疫 自然主动免疫：患病、隐性感染人工主动免疫：疫苗 被动免疫 自然被动免疫：通过胎盘、初乳人工被动免疫：抗毒素、 丙种球蛋白,免疫预防,人工主动免疫,灭活疫苗：,Salk脊髓灰质炎疫苗、狂犬疫苗流行性乙型脑炎疫苗、流感疫苗,减毒活疫苗：,Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗,其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等,人工主动免疫灭活疫苗和减毒
6、活疫苗,我国常用的病毒疫苗,疫苗名称 疫苗种类（培养细胞种类） 脊髓灰质炎疫苗 减毒活疫苗（人二倍体） 麻疹疫苗 减毒活疫苗（鸡胚细胞）流行性腮腺炎疫苗 减毒活疫苗（鸡胚细胞） 风疹疫苗 减毒活疫苗（人二倍体细胞）甲型肝炎疫苗 减毒活疫苗（人二倍体细胞）人用狂犬病疫苗 灭活疫苗（地鼠肾细胞）乙型脑炎病毒 灭活疫苗（地鼠肾细胞）流感病毒 灭活疫苗（地鼠肾细胞）乙型肝炎疫苗 基因工程疫苗（酵母菌表达）,人工被动免疫,注射含有抗病毒中和抗体的免疫血清、丙种球蛋白和IL-2，以及与细胞免疫有关的转移因子、干扰素等，使机体立即获得特异性免疫力。普通免疫球蛋白用于某些病毒性疾病如免疫缺陷病以及传染性肝炎、麻疹、水痘、腮腺炎、带状疱疹等病毒感染的紧急预防抗病毒血清免疫调节剂,第三节 抗病毒治疗,抑制病毒选用抑制病毒复制的化学药物或制剂提高机体免疫提高机体的免疫应答，促进自身消灭病毒感染的细胞效能,化学治疗基本策略：根据病毒的复制周期设计不同药物抑制病毒穿入、脱壳及病毒释放 金刚烷胺抑制病毒核酸复制及mRNA合成核苷类类似物 阿昔洛韦（ACV）、叠氮脱氧胸苷（AZT）、拉米呋定、利巴韦林、碘苷非核苷类似物 抑制病毒蛋白的修饰鸡尾酒疗法,AZT/ZDV,免疫治疗免疫调节或治疗剂治疗性疫苗免疫细胞的修饰与回输 基因治疗,
