1、毕业论文文献综述生物技术软体动物染色体的研究进展摘要本文对以往有关软体动物染色体制备方法及现阶段软体动物染色体核型的研究进展做了一简要的综述。秋水仙素的作用时间浓度，低渗的时间是影响染色体制备的关键因素，软体动物的染色体数量变化也较大，其染色体还存在着多态现象。关键词软体动物；染色体制备；染色体组型软体动物是仅次于节肢动物门的第二大类群，迄今有记录的大15000多种（许崇任，2008）。从上个世纪开始出现染色体的研究报道，并取得一定的成绩，对水产动物染色体研究也比较多，如节肢动物（周岭华等，1999；朱冬发等，2005），鱼类（林明敏等，2009；顾若波等，2009；王妍妍等，2009；张涛等
2、，2008；周丽青等，2005），软体动物（李雅娟等，2002；孙振兴等，2004；王梅林等，2000；吴萍等，2002）。但是头足类关于这方面的报道相对比较少（PAPANF,2010），而组织学繁殖等方面相对多些（蒋霞敏等，2007；蒋霞敏等，2008王春林等，2006；王春林等；2008）。随着近年来软体动物育种的发展，作为其细胞遗传学基础的染色体研究也日益受到人们的重视。染色体组型研究是细胞遗传学的基础,不仅有助于探讨物种在分类系统中的地位和系统演化过程,而且对现代分子生物学研究和遗传育种等均具有十分重要的意义进行染色体组型的观察、分析,并逐步建立了较为可靠的软体动物染色体制备方法,旨为
3、解决分类学上的疑难问题提供更科学的依据,并为细胞的融合、人工诱导多倍体，遗传图谱等遗传育种工作和遗传多样性的研究提供基础资料。1软体动物染色体的制备方法11研究材料的选择制备软体动物染色体的材料，大多采用繁殖期的精巢、卵裂或囊胚阶段的早期胚胎、孵化的幼虫及成体的鳃组织等，这些组织的细胞具有分裂旺盛、容易观察到分裂相的优点，其中尤以早期胚胎和各幼虫的分裂相更为理想。而生殖腺组织会使细胞染色体成倍存在而干扰染色体数量的计数，因此，在做软体动物的染色体时往往采用胚胎及幼虫制备染色体,对头足类的染色体制备也有用其血液细胞（PAPANFETAL,2010），但利用生殖腺、胚胎、幼虫制备染色体，受到繁殖季
4、节的制约，利用鳃等组织则无季节限制，但分裂相相对较少。12秋水仙素的处理方法成体一般采用活体注射，王贵云等人将新鲜皱纹盘鲍体内注射秋水仙素08G/ML,在海水中养4H（王桂云等，1988）；但周丽青等对栉节扇贝及虾夷扇贝进行染色体研究时采用活体取鳃，用004秋水仙素溶液处理30MIN周丽青等，2005；各种幼虫及胚胎一般采用秋水仙素浸泡的方法，袁美云等取孵化的岩牡蛎面盘幼虫放入含05G/L的秋水仙素海水中处理23H袁美云等，2008；常建波等在制备文蛤染色体时将发育到816细胞期胚胎时的受精卵，取样用005的秋水仙素簿水处理40MIN常建波等，1996。在制备染色体标本时，不一样的物种所合适的
5、秋水仙素的浓度及处理时间方法都有所不同。秋水仙素的处理在整个制片过程中起关键作用。13低渗处理低渗的目的使细胞体积胀大，染色体松散。一般采用0075MOL/L的KCL溶液，处理时间一般大于30MIN，当然每个物种的生理浓度不一样，所合适的低渗液及低渗时间也各异。低渗时间过长，造成细胞破裂，染色体丢失，不好准确计数，时间过短，导致染色体聚集，不能展开，无法观察与计数。闻海波等将中华圆田螺及背瘤丽蚌取鳃组织蒸馏水低渗1H（闻海波等，2007）；周丽青等将经秋水仙素处理的栉节扇贝和虾夷扇贝的鳃用25海水低渗周丽青等，2005；而王桂云等则分别用50的海水30MIN,25海水30MIN，蒸馏水10MI
6、N依次对皱纹盘鲍的鳃和生殖腺进行低渗处理（王桂云等，1988）。14固定染色体的固定一般用CARNOY氏液甲醇冰醋酸31，重复三次，每次不得小于15分钟（袁美云等，2005），CARNOY氏液必须现配现用，每次加固定液时须轻轻吹打均匀。15滴片干燥及染色采用热滴片法或者冷滴片法，目的是为了使细胞悬液与玻片存在一定的温差，便于细胞的破裂，使染色体较好的分散在玻片上，滴片的时候要距离玻片一定高度，使细胞破裂。一般用热滴片法，比较好维持温度。大多采用空气干燥法干燥，10GIEMSA染液或15的LEISMAN染液对其进行染色，染色时间为5MIN,30MIN,2H不等（陆荣茂等，2008；袁美云等，20
7、08；闻海波等，2007）。2有关软体动物染色体的研究动态21双壳纲染色体的研究动态双壳类，因其高等类具有瓣鳃，又被称为瓣鳃类。其研究报道比较多，尤其是海产类的。常建波等人报道了文蛤的染色体数目为2N38，未发现染色体异形的性染色体，高温和低温诱导的三倍体，染色体数为57，根据二倍体染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数的统计结果，文蛤染色体的核型为2N3818M20SM,NF76（常建波等，1996）；袁美云等人根据岩牡蛎染色体的相对长度、着丝点的位置和形态特征,可把全部染色体配成10对同源染色体。发现10对同源染色体全部为中部着丝粒染色体,无亚中部、亚端部与端部着丝粒染色体,2N2020M,染
8、色体的总臂数NF40（袁美云，2008）；周丽青等人对栉节扇贝及虾夷扇贝的染色体进行研究，核型公式分别为2N8M10SM20STM和SM归为双臂，ST和T归为单臂,总臂数NF56和2N2N6M10SM16ST6T,总臂数NF54。并对它们的杂交一代进行了核型分析，得出核型公式为2N6M11SM18ST3T,总臂数NF55周丽青等，2005。陆荣茂等人对小荚蛏的染色体研究得出其核型公式为12M14SM10ST2T，NF64，未发现性染色体和随体陆荣茂等，2008。双壳类染色体还存在多态现象，沈亦平等（沈亦平，1994在近江牡蛎染色体中观察到一些核型多态现象，一是个别分裂相中出现一条亚端部着丝粒染
9、色体，二是个别分裂相的一对染色体上出现随体。22腹足纲染色体的研究动态对腹足纲的研究也相对较多。王桂云等人对皱纹盘鲍的染色体进行研究，并认为鲍属不同，染色体也存在着些差异，得出皱纹盘鲍的核型公式为2N3622M14SMM和SM归为双臂,染色体总臂NF72，李雅娟等利用上足触手和外套膜分别对皱纹盘鲍染色体的二倍体三倍体进行了研究，染色体数目分别为2N36,2N54。管云雁等报道了黄口荔枝螺和疣荔枝螺的核型疣荔枝螺，其核型公式分别2N242SM20M2ST,2N2422M2ST并认为两种螺的核型具有一定相似性（管云雁等，2004）。曹伏军等对管角螺及细角螺进行了染色体研究，管角螺核型公式为2N60
10、44M10SM6T，染色体总臂数NF114。细角螺核型公式为2N42M10SM2ST6T，总臂数NF112。两种螺的全套染色体中未发现次缢痕、随体，也无性染色体（曹伏军等，2008）。3展望现今在我国乃至世界范围内，对软体动物染色体的研究相继时常被报道，染色体的制片技术也越发成熟。然而对软体动物的已知种类有15000多种，而与对其染色体的研究种类数量只不过是沧海一粟，对软体动物中一些染色体数目较多的种类如头足类的研究报道太少，需要进一步研究。相信未来这方面的研究肯定会有质的飞跃从而为探讨物种在分类系统中的地位和系统演化过程,而且对现代分子生物学研究和遗传育种等提供重要的参考价值。参考文献1曹伏
11、军，李长玲，罗杰等。管角螺、细角螺的核型研究J广东海洋大学学报，2008,28（1）15182常建波,魏利平,杨建敏,等文蛤染色体核型及三倍体诱导的初步研究J水产学报,1996,2032692743顾若波,徐钢春,华丹太湖似刺鳊鮈染色体组型分析及细胞核DNA含量J水产学报,2009,33（19144管云雁，韩雅丽。两种荔枝螺染色体核型以及性畸变个体染色体研究J海洋环境科学，2004,23321225蒋霞敏,符方尧,李正,等人工养殖曼氏无针乌贼生殖系统的解剖学与组织学研究J中国水产科学，2008,163726蒋霞敏,符方尧,李正,等曼氏无针乌贼的卵子发生及卵巢发育J水产学报,2007,314,6
12、076177李雅娟,毛连菊,李霞,等三倍体皱纹盘鲍活体倍性鉴定用上足触手、外套膜活体组织制备染色体标本J遗传学报,2002,2965145188林明敏,朱香萍,华丹石蝶染色体核型分析J青岛农业大学学报,2009,2631281309陆荣茂,柴学良,董迎辉,等宽壳全海笋的核型分析J台湾海峡,2008,271434610沈亦平,刘汀,姜海波，等近江牡蛎染色体核型的研究J武汉大学学报自然科学版,1994410210611孙振兴中国海洋贝类染色体研究进展J海洋通报,2004,206778312孙振兴,郭胜超,邵雁群,等三种海产帘蛤目贝类的核型研究J海洋学报,2004,261889413王梅林,郑家声我
13、国海洋鱼类和贝类染色体组型研究进展J青岛海洋大学学报,2000,30227728414王妍妍,柳学周,徐永江条半星鲽染色体核型分析J渔业科学发展,2009,30281315王桂云,马庆惠,王志先皱纹盘鲍的染色体研究J动物学杂志，1988,9（2）17117416王春林,樊晓旭,余红卫,等曼氏无针乌贼墨囊组织学及墨汁形成的超微结构J动物学报,2008,54236637217王春林，蒋霞敏，邱勇敢曼氏无针乌贼海水围塘养殖技术J中国水产,2006,8515218闻海波,顾若波,徐钢春,等两种淡水贝类的核型分析J大连水产学院学报,2007,221424519吴萍,董建萍,倪建国,等文蛤染色体的研究J上
14、海水产大学学报,2002,11210610920许崇任动物生物学M北京高等教育出版社,20089811121袁美云,毛连菊,周炜岩牡蛎的染色体核型分析J大连水产学院学报,2008,23（4）31832022张涛,程宝林,张贤刚,等澳洲宝石鲈染色体核型分析J淡水渔业,2008,382767923周岭华,张晓华,相建海鹰爪虾染色体数目与核型的研究J海洋与湖沼,1999,303,25025324周丽青,杨爱国,柳学周,等周丽青,杨爱国,刘志鸿,等栉孔扇贝虾夷扇贝杂交子一代与双亲染色体核型的分析J水生生物学报，2005，29（1）10510925朱冬发,王春林,李志强三疣梭子蟹核型分析J水产学报,20
15、05,29（5）64965326PAPANF,EBRAHIMIPOURM,EBRAHIMIPOURMTHESTUDYOFPERSIANGULFCUTTLEFISHSEPIAPHARAONISCHROMOSOMEVIAINCUBATIONOFBLOODCELLSJJOURNALOFAMERICANSCIENCE,2010,6216216427NAKAMURA,HKAREVIEWOFMOLLUSCANCYTOGENETICFORMOLLUSCANCHROMOSOMEBIVALVIA,POLYPLACOPHORAANDCEPHALOPODA,VENUSJAPENSJOURNALMALACOLOGY198544193226
