1、兽药残留分析技术 与残留检测实验室建设,第一部分 兽药残留及其危害,兽药,典型的兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。随着集约化养殖生产的开展，一些化学的、生物的药用成分被开发成具有某些功效的动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要用于防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质等。,兽药在动物性食品中的残留,兽药的原形化合物及其代谢物在动物的细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中的蓄积、贮存，称为食品动物的兽药残留。（狭义）化学物残留：除兽药外还包括通过食物链进入动物体内的农药（如杀虫剂、除草剂等）和环境污染物(如重金属、霉菌毒素等)。（广义）,兽药在生态环境中的残
2、留,在生产中大量使用的抗菌药物、抗寄生虫药物及各种促生长制剂等药物都会以原形或以有活性的代谢产物形式随动物粪便、尿液或其他排泄物进入环境。这些物质在环境土壤、微生物、水生生物、植物等蓄积或贮存。,兽药残留的产生,外因兽药和添加剂的使用 -防治动物疫病 -使用药物添加剂环境污染物内因兽药的体内过程 -消除规律,兽药残留的产生,兽药残留产生的主要原因不遵守休药期的规定标签外用药 -剂量、剂型、给药途径、疗程、适应症、动物非法使用违禁药物污染 -饲料加工、贮藏、运输,兽药残留的危害,急性毒性作用（瘦肉精）慢性毒性作用（氯霉素、氨基糖苷类）特殊毒性作用（三致作用、激素样作用、过敏反应） -雌激素类（己
3、烯雌酚）、同化激素（苯丙酸诺龙）-喹恶啉类（卡巴氧）-硝基呋喃类（呋喃西林、呋喃它酮）-砷制剂-苯并咪唑类-杀虫剂（666）-氯羟吡啶、SM2等-甲醛、苯酚等,兽药残留的危害,对人类肠道微生物的影响 -破坏或抑制人体胃肠菌群中敏感菌的生长 -导致条件性病原菌的大量繁殖或体外病原菌侵入肠道 -改变肠道菌群的代谢活性，使菌群改变药物和食物固有活性和毒性的的生物转化能力发生变化 -引起细菌耐药性的产生，导致人类感染性疾病治疗的失败,第二部分 兽药残留分析技术,兽药残留分析技术的特点,待测物质浓度低样品基质复杂，干扰物质多兽药残留代谢产物多样或不明动物种类多样，对药物代谢存在差异,残留标示物的选择,用
4、药后体内存在多个残留成分，则需要监控总残留物。总残留物在体内的各组分比例相对稳定，选择总残留物中1种或2种组分作为“参照物”，称为“残留标示物”。通过测定残留标示物的含量表示样品残留量和MRLs。选择残留标示物的原则 -消除慢、含量高、稳定、毒性大,兽药残留分析方法的要求,快速高通量定量准确度和精确度确证法定要求质控要求,兽药残留分析方法的要求,ELISA,LC/MS/MS,LC or GC,分析方法的总体思路,高水平(Level )方法 -确证和定量被分析物质 中等水平(Level )方法 -定量但不需要确证被分析物质低水平(Level )方法 -筛选,分析方法的总体思路,采用快速、大量检测
5、样品的筛选分析方法，能鉴别含有残留物的阳性样品,采用充分可靠的分析方法，残留量的值不具有确证性，但具相应的准确度和有效性,采用经过确认的分析方法对残留物进行鉴别和测定，残留量的值必须是有效和肯定的,酶联免疫法,液相色谱法气相色谱法,液质联用法气质联用法,三级,二级,一级,“筛选”到“确证”的方法体系,定性定量,三级方法,二级方法,一级方法,定性为主,定量为主,定性为辅,GC/MS,LC/MS,GC,HPLC,兽药残留分析技术,用于残留分析的样本制备技术样品的前处理技术残留检测方法的选择,样本的范围,可食性组织及产品 -肝、肾、肌肉、脂肪、皮肤、血液 -奶、蛋 -其他加工食品其他 -毛发、尿、粪
6、便等,样本的收集,取样方法 -代表性原则、随机采样 -各种标准规定活体检测 -一般采集毛发、血液、尿液和粪便屠宰场取样 -药物的靶组织 -其他高浓度的样本：肝、肾、胆汁、注射部位 -排泄物：尿液,样本的贮存,容器材料 -一般为玻璃或塑料预处理 -匀化、缩分、过筛、离心、过滤、防腐、抑制降解等贮存温度要求,样品前处理技术,提取方法 -组织捣碎法 -振荡法净化方法 -液液萃取 -液固萃取浓缩与富集 -旋转蒸发器浓缩 -气流吹蒸法：氮气、空气,样品的前处理技术提取,提取,化合物特性,基质组成,提取剂选择,沉淀剂选择,设计顺序,效率试验配比试验,干扰试验影响净化,样品的前处理技术净化,净化,液液萃取,
7、SPE纯化,相似相溶,小柱选择,浓缩富集,效率试验配比试验,上样洗涤洗脱,残留检测方法简介,快速筛选方法 -酶免疫测定(EIA) -ELISA -放射免疫测定法(RIA) -金标试纸条(Dip stick) -生物传感器 -微生物抑制测定法：抗菌药 -TLC,残留检测方法简介,化学定量方法 -气相色谱法（GC） -高效液相色谱法（HPLC） -原子荧光(AF) -原子吸收(AA),残留检测方法简介,仪器确证方法 -HPLC-PDA -GC-MS -GC-MS-MS -HPLC-MS -LC-MS-MS,样品处理技术进展,SPE的应用与自动化膜分离技术免疫亲和色谱(IAC)凝胶渗透色谱（GPC）
8、分子印迹技术其他技术（自动索氏提取法、超声波辅助提取、超临界流体萃取、强化溶剂萃取、微波辅助萃取、加速溶剂萃取法）,色谱分析技术进展,超高效液相色谱系统(UPLC),色谱分析技术进展,高效毛细管电泳色谱系统(HPCE),色谱分析技术进展,高精密度串联质谱GC-MS/MS、LC-MS/MS,色谱分析技术进展,高精密度串联质谱GC-MS/MS,色谱分析技术进展,高精密度串联质谱LC-MS/MS,色谱分析技术进展,高分辨质谱系统(Q-TOF、Q-Exactive),检测技术发展趋势分析,检测方法,筛选方法,确证方法,快速简便,价格便宜,现场应用,注重时效性,仪器更新快,多组分分析,灵敏度高,提高准确
9、性,限制我国残留检测发展的问题,问题：标准依赖性强，但标准滞后。标准制修订程序化、效应化,导致：标准实施效果较差。标准出台后很快又被淘汰现有标准限制了检测技术发展,限制我国残留检测发展的问题,问题：照搬国外的残留监控内容。检测方法缺乏验证缺乏药理研究，没有“中国特色”的MRL,导致：残留检测基础较差。对不同药物的残留关注程度不一,警惕残留检测发展的误区,误区一：“两极”分化,检测方法,筛选方法,确证方法,成本上升,一物多用,注重首创,忽略了筛选方法的初衷,仪器追新型,盲目多残留,水平看指标,过犹不及不切实际,没有联系,警惕残留检测发展的误区,误区二：习惯“参考”,方法可行,数据可信,撰稿发表,
10、内容相似,知其然，而不知所以然,难以提升自身水平,警惕残留检测发展的误区,误区三：只认“原形”,药物,药物原形,代谢物,缺乏药代动力学研究，盲目检测,正确引导残留检测发展方向,积极研究药物代谢和残留消除规律,药理学,药效研究,药代研究,药物对机体的实际作用,机体内药物的生物转化,药物的生物利用度,药物的标示残留物,药物剂型研究,消除规律研究,确定监控的靶点,制定休药期,危险性评估,正确引导残留检测发展方向,重视饲料投入品的调查和监测,饲料药物添加剂,国外引进,人用药品,企业自创,禁用化合物清单,允许添加的药物,出现干扰物质,有特征组分,未知组分分析,新添加物,第三部分 残留检测实验室建设,残留
11、实验室的功能,动物性食品中兽药残留检测饲料产品中违禁药物(危害物质)检测残留分析技术的推广应用残留分析技术的研发和标准化工作,残留实验室的建设要求,硬件要求 实验场地、格局、设施 设备、标准物质、试剂耗材 人员软件要求 资质认证与管理体系建设,实验室建设的硬件要求,实验场地和格局面积要大。根据具体功能分割，不同实验室要求不一。 （天平室不宜太大，仪器室不宜太小）根据实验流程分割。明确每个实验室名称，避免功能混乱。,功能实验室,样品保存室天平室（称量）样品预处理室（组织匀浆、饲料粉碎、分样）样品检测室（ELISA检测）仪器分析室（大型仪器设备）清洗消毒室试剂保存室（危险化学品）耗材保存室标准物质
12、保存室,实验室建设的硬件要求,必要设施安全设施：消防装置、报警装置等。环境设施：空调、通风柜、排气扇、去湿机等。防护设施：医药箱、冲淋装置。三废收集与处理设施。,实验室建设的硬件要求,设备(按流程分类)样本的保存设备：冰箱、培养箱等。样品前处理设备：匀浆机、粉碎机、浓缩仪等。检测用设备：酶标仪、HPLC、LC-MS/MS等。设备(按功能分类)主要设备：出具检测数据。辅助设备：对检测数据有一定的影响。,主要检测用仪器设备,主要检测项目,实验室建设的硬件要求,标准物质 标准品和对照品 标准溶液常用试剂 水 固体试剂 液体试剂专用试剂 试剂盒,实验室建设的硬件要求,常用耗材玻璃仪器（包括小容量玻璃仪
13、器）塑料制品（离心管、枪头等一次性用品）防护用品（手套、护目镜等）专用耗材色谱耗材（色谱柱、样品瓶等）前处理耗材（SPE小柱、滤膜等）保存用耗材(密封袋、标准溶液瓶),实验室建设的硬件要求,人员了解行业动态，关注食品安全。没有固定专业要求，但要有化学实验基础。大型仪器要尽量配备具有操作经验的人员。有较高的结果分析能力和判断能力。,实验室建设的软件要求,资质认证与实验室管理体系建设,实验室建设的软件要求,检测和校准实验室能力的通用要求25要素,组织管理体系文件控制要求、标书和合同评审分包服务和供应品采购服务客户投诉不符合检测工作的控制记录控制改进纠正措施预防措施内部审核管理评审,管理要素,技术要素,总则人员设施和环境条件检测方法及方法的确认设备测量溯源性抽样样品处置检测结果质量保证结果报告,
