1、毕业论文文献综述食品质量与安全植物病毒LAMP检测技术研究进展摘要植物病毒几乎可以侵染所有的作物，造成花叶，矮化，褪绿，生长迟缓、畸形等症状，严重影响作物的产量和质量，造成很大的经济损失。2007年最新的检疫性有害生物病毒种类更是达到39种，基本涵盖了对我国农业有重大潜在性危害的病毒。关键词植物病毒；LAMP；检测1植物病毒11植物病毒的危害植物病毒几乎可以侵染所有的作物，造成花叶，矮化，褪绿，生长迟缓、畸形等症状，严重影响作物的产量和质量，造成很大的经济损失。目前，植物病毒分为18个科、81个属以及亚病毒感染因子的类病毒和病毒卫星，共计900多种1。植物病毒传播方式广泛，可通过汁液接触，昆虫
2、介体，嫁接等多种方式传播，且作物一旦染病一般缺乏有效的治疗方式。因此，即使在科技发达的今天，仍然可见植物病毒肆虐的身影。1990年双生病毒毁坏了多米尼加95的蕃茄；19911992年在美国佛罗里达该类病毒在蕃茄上造成的损失达14亿美元2；19921997年，棉花曲叶病毒导致巴基斯坦的棉花损失达50亿美元，并有200多万公顷棉田遭受严重危害3；19901998年，番茄斑萎病毒使葡萄牙、巴西和阿根廷的马铃薯作物生产受到严重的影响4。我国自1997年就将一些重要的植物病毒列为检疫性名单，2007年最新的检疫性有害生物病毒种类更是达到39种，基本涵盖了对我国农业有重大潜在性危害的病毒。12植物病毒检测
3、方法现状植物病毒本身具有亚显微性、隐蔽性、潜伏性和微量性，以及不易分离不易培养不易观察等特性，给检测带来了很大的困难。早期植物病毒的鉴定方法主要通过汁液磨擦、介体传播和嫁接等方法接种指示植物后观察症状，同时结合血清学检测5、电镜学检测，随着分子生物学的发展，各种分子生物学技术以其具有灵敏度高、特异性强等优点被广泛应用于植物病毒的检测鉴定6,7。本文就近年来LAMP技术在植物病毒检测领域的研究进展做一简述，同时，也对今后植物病毒检测技术的发展方向做一展望。2LAMP检测技术21LAMP检测技术简介环介导等温扩增技术LOOPMEDIATEDISOTHENNALAMPLIFICATION，LAMP是
4、日本学者NOTOMI等于2000年建立的，它主要是在具有链置换活性的BSTDNA聚合酶作用下，利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域，且可在等温条件进行扩增反应。反应结果可通过肉眼观察，或者通过浊度仪检测反应过程中获得的副产品焦磷酸镁所形成的白色沉淀的混浊度来判定，也可在反应管中加入荧光染色试剂，在紫外灯下观察，对反应产物实时临测。运用该技术使基因的扩增和产物的检测一步完成，其特点表现为扩增效率高，可在L560MIN扩增109L010；特异性高，所有靶基因序列的检测可只通过扩增产物的有无来判别8。该技术自产生以后，主要应用于病原微生物的快速检测，包括病毒913、细菌1416、真菌、支
5、原体、寄生虫17等；在动植物疾病诊断1821、食品卫生检验及环境监测方面应用广泛；同时也应用于动物胚胎的性别鉴定、肿瘤的基因检测及基因芯片22的开发等。22LAMP检测方法在植物病毒检测中的研究现状在病毒检测方面，LAMP无论是对RNA病毒还是DNA病毒均能做到快速检测。2003年，FUKUTA等用RTLAMP直接从感染花叶病毒的叶、种子中快速检测出日本红薯花叶病毒23。同年，FUKUTA等用LAMP法检测了番茄叶黄病毒。他们又于2004年对LAMP进行了改进，建立了免疫捕获RTLAMPICRTLAMP，对感染菊花的番茄点状枯萎病毒进行了检测，并对其建立的方法进行了评价，结果显示，免疫捕获RT
6、LAMP的敏感性比RTPCR高L00倍24。SHIRO等用免疫捕获RTPCR对番茄斑点枯萎病进行检测，得到了与FUKUTA同样的结果，即比RTPCR敏感性高，并且通过观察反应管的浊度直接判定结果，大大简化了结果的判定程序。2010年6月，刘佳等建立用LAMP方法检测菊花中的番茄不孕病毒TAV的检测方法，实验中LAMP比RTPCR的灵敏度高3个数量级，实验结果表明，扩增产物直接加入荧光染料来定性研究菊花是否携带病毒时，该方法完全能满足实验的需求25。23LAMP检测技术展望LAMP虽然是本世纪才发展起来的一种分子生物学技术，还存在诸多的缺点和不足，但它在不断地改进和完善。近年来，有学者发现LAM
7、P扩增反应所需要的BST聚合酶比TAQ聚合酶有更高的耐受性26，对与DNA和RNA的检测来说，核酸抽提步骤或省略，也能达到检测的目的，这是一个很闪光的优点11。LAMP以其不需要昂贵的仪器设备、操作程序简单、扩增快速高效和适合各种条件下的快速检测等许多优点，实用性强，因此会有更广阔的应用前景。参考文献1洪健，周雪平ICTV第八次报告的最新植物病毒分类系统J植物病理学报，2005，35（6）192MORIONES,E，NAVASCASTILLO,JTOMATOYELLOWLEAFCURLVIRUS,ANEMERGINGVIRUSCOMPLEXCAUSINGEPIDEMICSWORLDWIDEJV
8、IRUSRESEARCH，2001，711231343BRIDDON,RW，MANSOOR,S，BEDFORD,ID，ETALCLONESOFCOTTONLEAFCURLGEMINIVIRUSINDUCESYMPTOMSATYPICALOFCOTTONLEAFCURLDISEASEJVIRUSGENES，2000，2019264GRACIA,CM，DE,B，GRANVAL,DM，G,VCUESTAOCCURRENCEOFDIFFERENTTOSPOVIRUSESINVEGETABLECROPSINARGENTINAJJOURNALOFPHYTOPATHOLOGY，1998，1474223227
9、5JDCASTELLO，ASSISTANTPROFESSOR，ETALDETECTIONOFTOBACCOMOSAICANDTOBACCORINGSPOTVIRUSESINWHITEASHTREESBYENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYJTHEAMERICANPHYTOPATHOLOGICALSOCIETY，1984，6897877906兰玉菲，郗丽君，等植物病毒检测技术J山东农业科学，2006，558627王健华，王运勤，等植物病毒检测技术研究进展J热带农业科学，2005，3（25）71758唐毕锋，马立业，等环介导等温扩增技术的应用和发展J实用医学杂志，2008，
10、22（24）397239749何琳，徐海圣，等白斑综合征病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立J水产学报，2010，34（4）59860310孙颖杰，岳志芹，等牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用J华中农业大学学报，2010，29（2）20320711谢青梅，曹永曹，等H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增（RTLAMP）检测技术J中国兽医学报，2010，30（1）414612MANMOHANP，GUILLERMOP，SHINGOINOUE，ETALREALTIMEREVERSETRANSCRIPTIONLOOPMEDIATEDISOTHERMALAMPLIFICATIONFORRA
11、PIDDETECTIONOFWESTNILEVIRUSJJCLINMICROBIOL，2004，42125726313POONL，LEUNGCS，CHANKH，ETALDETECTIONOFHUMMANINFLUENZAAVIRUSESBYLOOPMEDIATEDISOTHERNALAMPLICATIONJCLINMCROBIOL，2004，4251956196114黄帆，李琳，等DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究J现代食品科技，2008，24（8）83583815包云娟，朱水荣环介导等温技术在假结核耶尔森菌检测中的应用J微生物检测方法，2010，32055956016王敏雅，徐
12、明汉，等沙门菌INVA基因LAMP快速检测法的建立和初步应用J中国卫生检验杂志，2008，18101971198117王中光，张守发，等牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立J中国预防兽医学报，2010，32210811118夏永恒，杨兵，等2种鸡免疫抑制性疾病LAMP检测方法的建立J中国动植物检疫，2009，26（5）293219刘宝山，潘树德，等环介导等温扩增技术在畜禽疾病诊断中的应用J中国兽医杂志，2009，459646520赵飞，邹为民LAMP法在水产动物病原快速检测中的应用J南方水产，2007，3（2）717521甘文佳，胡旭初LAMP技术及其在病原诊断中的应用J中国病原生物学杂志
13、，2010，5214314522鲁勇，李红海，等LAMP快速检测沙门菌INVA基因的方法建立于应用J浙江中西医结合杂志，2009，19（4）21621823SFUKUTA，TIIDA，YMIZUKAMI，ETALDETECTIONOFJAPANESEYAMMOSICVIRUSBYRTLAMPJARCHIVESOFVIROLOGY，2003，1481713172024周广青，常惠芸，邵军军环介导等温基因扩增技术及其在病毒检测中的应用J生物技术通讯，2008，229029225刘佳，黄丛林，等环介导等温扩增技术检测菊花中番茄不孕病毒J中国农业科学，2010，43（6）1288129426KANEKOH，IIDAAOKIK，ETALSWNSITIVEANDRAPIDDETECTIONOFHERPESSIMPLEXVIRUSANDVARICELLAZOSTERVIRUSDNABYLOOPMEDIATEDISOTHERMALAMPLIFICATIONJJCLINMICROBIOL，2005，43332903296
